长春新碱对可移植性小鼠淋巴细胞白血病的疗效及其机制研究

1、长春新碱对可移植性小鼠淋巴细胞白血病的疗效及其机制研究         09-09-11 11:57:00     编辑：studa20                 作者：朱大诚，尹小明，陈秀珍，罗小泉，闵建新【摘要】  目的探讨长春新碱（Vincristine，VCR）对L615白血病的疗效及其可能机制

2、。方法L615白血病造模成功后，分为对照组和VCR组，进行腹腔注射给药（对照组给生理盐水），隔日一次，连续6次。观测小鼠生存时间，体重变化，外周血白细胞计数，肝脾指数，肝脾骨髓涂片及骨髓白细胞分类，流式细胞术测定凋亡率。结果对照组体重明显减轻，VCR组体重无明显改变；VCR组小鼠生存时间是对照组的229%；外周血象，同组小鼠随病程的延长，白细胞逐渐上升，至濒死期则显著上升，与实验前比较有显著差异，且对照组更为显著，而血小板是先升后降，至濒死期，末梢血对照组出现大量L615白血病细胞，占白细胞总数的52.9%，VCR组L615白血病细胞占17.25%，两者具有显著差异（P<0.01）；白血

3、病死亡小鼠脾脏指数有差异(P<0.05)，且VCR组脾指数大于对照组；流式细胞术证实，VCR能诱导L615白血病体内细胞凋亡，凋亡率达43.81%。结论VCR对L615白血病具有较好的疗效，其机制主要是诱导白血病细胞凋亡；VCR在抗肿瘤的同时，可能对正常组织尤其是免疫系统具有一定的损害作用。 【关键词】  长春新碱 L615白血病 生命延长率 细胞凋亡 流式细胞术Abstract:ObjectiveTo discuss the curative effects and the potential mechanisms to the L615 leukemia of VCR. M

4、ethodsAfter making the model successfully, put the mice into 2 groups, antitheses one and VCR group. Then carry on the celiac injection (the antitheses one with NS), once every other day, and totally 6 times. Observe the survival time, weight changes, peripheral blood leukocyte count, hepatosplenic

5、index, hepatic, splenic and marrow swears and marrow leukocyte classification and apoptosis rate determined by FCM.ResultsThe antitheses group's weight declined significantly; but no obvious changes in VCR group were observed. The survival time of VCR group was 229% of the antitheses one. For th

6、e peripheral blood, with the course of diseases extending, the leukocytes increased and notably in the dying period (notably differences compared with the situation before the experiment, especially in antitheses group); the platelets first increased and then decreased and till the dying period. The

7、re were large amount of L615 cells in the peripheral blood of antitheses group (52.9% of the leucocyte number); 17.25% in VCR group was L615 cells, but there were still great differences between the two groups(P<0.01). The splenic indexes of the dead mice were different (P<0.05), and that of V

8、CR group was greater. FCM proved that VCR induced the apoptosis of L615 cells in vivo, and the rate reached to 43.81%. ConclusionVCR has good curative effects on L615 leukemia. To induce the apoptosis of leukemia cells is its main mechanism. It may damage the normal tissues, especially the immune sy

9、stem when it is repelling the tumor.Key words:VCR;   L615 leukemia;   Life extension rate;   Apoptosis;   FCM长春新碱（VCR)作为抗肿瘤化疗药早已应用于临床。有实验证明VCR能诱导髓系白血病HL-60，U937，K562等细胞凋亡13，。这次我们利用VCR作用于可移植性小鼠淋巴细胞白血病L615白血病，观察其疗效，并探讨其可能机制。1  材料与方法1.1  药品及试剂VCR为上海华联制药

10、有限公司产品（批号：050602A），用生理盐水配成浓度为25 g/ml的VCR溶液备用。细胞凋亡检测试剂盒为南京凯基生物科技发展有限公司产品。1.2  细胞培养L615白血病细胞株购于中国医学科学院血液研究所（天津）。培养基为含体积分数10%的小牛血清（杭州四季青）的RPMI-1640（Gibco公司产品），并加入双抗（青霉素100 /ml和链霉素100 g/ml）, 在37，5%CO2饱和湿度的培养箱（Therno Forma公司产品）中培养，取对数生长期细胞进行造模。1.3  模型建立 取对数生长期L615白血病细胞（L615细胞），离心1 500 r/min,8 m

11、in,去上清液，用生理盐水洗涤2次，调整细胞终浓度为1.4×106/ml。取615近交系小鼠（购自中国医学科学院血液研究所）8只，鼠龄10周，体重2427 g，雌雄各半。无菌操作，每只小鼠腹腔接种L615细胞7×105个，造成L615白血病模型（全身白血病）4。小鼠在层流架内饲养，一切与鼠接触的物品均按无菌要求处理。1.4   分组及给药方法将L615白血病模型小鼠随机分为2组。每组雌雄各半，即对照组（L615模型组）(每次每只鼠给生理盐水0.4 ml) ；VCR组（每次每只鼠给VCR 0.3 mg/kg）。模型建立后，第2天开始按以上方案腹腔注射给药，

12、隔日1次，共给药6次。1.5   观测指标 体重变化；生存时间，用公式（T-C）/C×100%计数其生命延长率（T、C分别为VCR组，对照组平均生存天数）；外周血白细胞（WBC）计数及分类，血小板（PLT）计数；肝脾指数；肝、脾、骨髓涂片及骨髓白细胞分类。1.6   流式细胞术（FCM）分析 取濒死期两组小鼠外周血，每个样本0.5ml入已加淋巴细胞分离液的试管内，离心1500r/min，20min，然后小心吸出位于中间的白色层（白细胞），进行细胞计数（每个样本细胞数应大于1×106），用PBS洗涤，然后按凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒要求进行操作。上机检测（流式仪为BECTON DICKNSON,B、D公司产品），采用CenQuest软件获取10 000个细胞，ModFitlt软件分析并获得结果。1.7  统计学处理 采用双侧t检验，P<0.05认为差异有显著性。2  结果2.1   体重变化V