补肾醒脑方对实验性血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡的影响

1、补肾醒脑方对实验性血管性痴呆大鼠脑神经细胞凋亡的影响         11-05-12 15:11:00     编辑：studa20                   作者：郑攀,封银曼,郑宏,杨新年,夏寒星   【摘要】  目的 观察补肾醒脑方对血管性痴

2、呆(VD)大鼠脑神经细胞凋亡的影响,探讨其病理机制。方法 采用反复夹闭双侧颈总动脉伴低血压造成拟VD大鼠模型,通过原位末端标记(TUNEL)法检测脑神经细胞凋亡情况。结果 补肾醒脑高、低剂量组可抑制缺血再灌注后神经细胞的凋亡。结论 补肾醒脑方能抑制脑神经细胞凋亡,缓解兴奋性毒性损伤,保护大脑神经细胞,这可能是补肾醒脑方治疗VD的作用机制之一。 【关键词】  补肾醒脑方；血管性痴呆；原位末端标记；细胞凋亡；大鼠    Abstract：Objective To study the pathology mechanism of vascular dement

3、ia (VD) rats and study the effect of Bushenxingnao (BSXN) prescription on cerebral neurocyte apoptosis. Method Experimental VD model rats were caused by clipping two side of total artery in neck repeatedly and to examine cerebral neurocyte apoptosis with TUNEL. Results Both the high and low dose BSX

4、N abated excitatory toxic infury and inhibit neurocyte apoptosis after ischemia-refusion. Conclusion BSXN prescription can repress cerebral neurocyte apoptosis, to abate its excitatory nerotoxicity, to protect cerebral neurocyte, which may be one of the mechanisms of to treating the lesion. 

5、60;  Key words：Bushenxingnao prescription；vascular dementia；situ nick-end labeling；apoptosis；rat 血管性痴呆(vascular dementia,VD)是一系列脑血管因素导致脑组织损害而产生的痴呆症状的总称,是在智能获得充分发展后,由于中风的损害造成退化的结果。笔者采用具有益气补肾、祛瘀化痰、醒脑开窍作用的补肾醒脑方,观察该药对反复夹闭双侧颈总动脉伴低血压所致痴呆模型大鼠脑神经细胞凋亡的影响,旨在揭示补肾醒脑方治疗VD的脑保护机制。1  实验材料1.1  动物

6、    健康成年雄性Wistar大鼠100只,普通级,体重(215±15)g,河南医科大学实验动物中心提供。1.2  药物及试剂    补肾醒脑方(人参9 g,熟地黄12 g,制首乌12 g,女贞子12 g,赤芍9 g,丹参9 g,川芎9 g,远志6 g,石菖蒲6 g,天麻6 g),方中药物均一次性购于河南省药材公司,并经河南中医学院中药教研室鉴定为正品。制备：用药物总体积的5倍量水浸泡2 h,煎沸后改文火煎,煎煮1 h后倒出药液；继用药物体积3倍量水,先后再煎2次,合并3次滤液。滤过,滤液用文火分别浓缩至(含原药

7、材)浓度为高剂量(3 g/mL)、低剂量(1.5 g/mL)的浓缩液。无菌条件装瓶,置4 冰箱保存备用。喜得镇,天津华津制药厂与北京诺华制药有限公司合作生产,批号030212,用生理盐水配制成0.03 mg/mL的药液备用。硝普钠粉针剂,50 mg/支,北京双鹤现代医药技术有限公司生产,批号0302162,用5%葡萄糖注射液配制成0.25 mg/mL的药液,黑纸包裹避光保存备用。水合氯醛,上海五联化工厂生产,批号20020418,用生理盐水配制成100 mg/mL的药液备用；亚硝酸钠,天津市四通化工厂生产,批号20020710；无水乙醇,郑州化学试剂二厂生产,批号030812；多聚甲醛,天津市

8、博迪化工有限公司生产,批号2001920；原位末端标记检测凋亡试剂盒(TUNEL),法国博士德公司产品。1.3 仪器    轮转式切片机,德国Leitz 2145；BX60研究用万能显微镜,日本OLYMPUS公司。2  实验方法2.1  动物分组动物购入后随机分为5组：模型组(MX组)、假手术组(JS组)、喜德镇组(XD组)及补肾醒脑高(BH组)、补肾醒脑低剂量组(BS)。每组按1、24 h分别再分2组,每组10只,每笼5只喂养。大鼠自由觅食饮水,在室温2225 、相对湿度40%50%的环境中喂养3 d,待大鼠适应环境后开始实验。2.2  给药JS、MX组：生理盐水ig,1 mL/100 g,1次/d；XD组：喜德镇ig,1 mL/100 g,1次/d(0.6 mg/kg,相当于正常成人用量的20倍)；BH组：补肾醒脑方(3 g/mL)ig,1次/d(30 g/kg,相当于正常成人用量的20倍)；BS组：补肾醒脑方(1.5 g/mL)ig,1次/d(15 g/kg,相当于正常成人用量的10倍)。2.3  造模灌胃第7日给药后1 h,将大鼠用10%水合氯醛(350 mg/kg,腹腔注射)麻醉后仰卧固定在手术台上,常规消毒,颈正中切口,分离双侧颈总动脉,