荧光PCR法检测GBS的临床意义

1、THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF TESTING GBS BY FQ-PCR荧光荧光PCR法检测法检测 GBS的临床意义的临床意义国家-地方联合工程实验室钟菲菲B族链球菌的介绍GBS显微镜图20世纪30年代国外学者 Fry报道了3例死于GBS引起的产后心内膜炎病例, 由此证实了GBS为人类致病菌。 20世纪60年代首次发现其可以导致严重的新生儿感染，引起新生儿死亡。 20世纪70年代，GBS已被证实为围产期母婴感染的主要致病菌之一，在围产医学中占有不可忽视的地位。表面蛋白质Ag荚膜多糖Ag(C抗原)肽聚糖磷壁酸B族链球菌(group B streptococcus,GB

2、S)学名无乳链球菌，为革兰氏阳性球菌，寄居于阴道和直肠，属于条件致病菌。B族链球菌的介绍根据其是否溶血分：不完全溶血、完全溶血、不溶血3种。根据其致病血清分：I a、I b、 I c、 II、 I V和V，其毒力荚膜多糖抗原、脂磷壁酸、神经氨酸酶等有关（发达国家（60%）发展中国家I bI b、 I c I c、 II II（74%74%）。）。健康女性1535% 1535% 的生殖道和消化道中存在GBSGBS菌落,而且种族、人群有明显区别。GBS定植表现为一过性,间歇性或持久性,导致孕妇不同时期GBS检测结果不同。性生活活跃,多次妊娠,妊娠期间糖尿病等因素更容易获得GBS。B族链球菌流行病学

3、GBSGBS1 1（ 1535% 1535% ）一般健康良好的并不致病。2 2（约（约25%25%）早产，胎膜早破，泌尿系感染、胎膜感染、宫内膜感染和创伤感染。3 3（约（约50%50%）约约1 12%2%新生儿发病新生儿发病新生儿肺炎，败血症和脑膜炎，发育障碍，可导致新生儿听力和视力受损以及脑瘫等后遗症。 B族链球菌危害GBS阳性的孕妇中新生儿感染率阳性的孕妇中新生儿感染率GBS对孕妇的危害抑制乳酸杆菌抑制乳酸杆菌生长，生长，pHpH值值升高，利于杂升高，利于杂菌。菌。胎膜早破羊膜腔胎膜早破羊膜腔感染，早产、晚感染，早产、晚期先兆流产。期先兆流产。GBSGBS对绒毛膜的对绒毛膜的吸附力及穿透

4、力最吸附力及穿透力最强，宫内感染的主要原因。强，宫内感染的主要原因。胎膜表胎膜表面张力面张力降低降低GBS炎性细胞炎性细胞吞噬作用吞噬作用细菌代谢细菌代谢蛋白质水蛋白质水解酶解酶“释放释放”磷酸酯酶磷酸酯酶A2，前前列腺素列腺素，细胞因子细胞因子IL- 1、IL- 6、IL- 8、IL- 12胎膜早破胎膜早破早产早产刺激子宫收缩 GBS对孕妇的危害关于263例高危孕妇的研究GBS感染患者治疗后的情况如下: 早产62例中有13例GBS感染经治疗后，其中6例至37周后分娩，时间最长1个月，新生儿体重达2 600 g；胎膜早破早产136例中有31例GBS感染经治疗后，其中6例延长了孕周， 最长延长1

5、5天，达足月分娩；晚期先兆流产38例中有9例GBS感染，经过治疗，4例早产，孕周增长最长的达6周（24周入院至302周剖宫产结束分娩，早产儿体重1 800 g经抢救存活，随访6个月目前情况良好）。：经经GBSGBS干预治疗后干预治疗后, ,可延长孕周可延长孕周, ,使胎儿获得宫内生长机会，使胎儿获得宫内生长机会，增加存活率和生存质量增加存活率和生存质量, ,降低极低出生体重儿和围产儿死降低极低出生体重儿和围产儿死亡率亡率, ,减少母婴感染率及其并发症。减少母婴感染率及其并发症。参考文献：中国妇幼保健2009年第24卷 B族溶血性链球菌感染与胎膜早破、早产、晚期先兆流产的关系与干预刘剑等. GB

6、S对孕妇的危害GBS对新生儿的危害早发型：0-6 天迟发型：7-89 天症状包括呼吸窘迫，呼吸暂停，以败血症最症状包括呼吸窘迫，呼吸暂停，以败血症最常见，肺炎和脑膜炎是早发型的形式常见，肺炎和脑膜炎是早发型的形式早期病死率高达早期病死率高达5050，近年来，为，近年来，为4-64-6无症状带菌母亲分娩传播。无症状带菌母亲分娩传播。主要为足月儿主要为足月儿 和和 近近 足足 月儿月儿 。早发型感染危害早发型感染危害James Hanley. Neonatal infections: group B streptococcusJ. Clinical Evidence. GBS对新生儿的危害新生儿B

7、族链球菌感染死亡1例分析 新生儿出生后3h吃奶差，反应欠佳； 出生后8h情况加重，四肢微凉、体温正常； 出生后13h呼吸急促、反应低下、刺激不哭。以败血症、呼吸功能不全、新生儿肺炎急转儿科； 出生后21h病情进一步加重，提示严重感染、酸中毒、低钙及心肌受损； 出生后38h出现呼吸表浅、暂停等； 出生后41h呼吸首先停止，然后心跳停止，经抢救无效死亡。资料来源：资料来源：中国实用妇科与产科杂志2008年10月第24卷第10期 新生儿B族链球菌感染死亡1例分析北京儿童医院新生儿肺炎死亡病例中B族链球菌的检测收集200 例1953年至2004年间新生儿肺炎死亡病例回顾研究。死亡的200例肺炎患儿，有

8、130例查实GBS阳性感染，高达65%。130例GBS阳性患儿，有74名7d，56名7d。早发型中29名为早产儿。200例患儿中，75例有完整临床资料。其中35例可查到一项或多项与GBS感染有关的危险因素，如早产，低体重，胎膜早破，羊水异常等，GBS检测结果均为阳性。结论：GBS是新生儿肺炎死亡病例中的重要病原，尤其在早发型肺炎病例中GBS感染占很大比重。中华儿科杂志2006年11月第44卷第11期新生儿肺炎死亡病例中B族链球菌的检测新生儿误诊分析1例 西南某三甲军区医院 政委孙女出生后出现感染，经临床科室、检验科经验判断，疑似MRSA感染，建议临床使用万古霉素。政委不认可该结果。 后经过荧光

9、PCR法快速检测，确诊为B族链球菌感染，而临床的症状与链球菌感染表现相近，经过B族链球菌治疗方案后，2天即痊愈。GBS对新生儿的危害 常表现为隐匿发病，最初为脑膜炎，常表现为隐匿发病，最初为脑膜炎，如发烧，昏睡呕吐等，多伴败血症如发烧，昏睡呕吐等，多伴败血症 病死率约病死率约15%15%，但存活者，但存活者30%-50%30%-50%严重后遗症，痴呆、脑积水，智力障碍等。严重后遗症，痴呆、脑积水，智力障碍等。 感染一般系医院内感染，感染一般系医院内感染，90%90%主要是主要是型引起型引起 发病多为产科并发症的早产儿和低体重发病多为产科并发症的早产儿和低体重儿，发病率是足月的儿，发病率是足月的

10、7 7倍，若发生脓毒血症，倍，若发生脓毒血症，病死率高。病死率高。晚发型感染危害晚发型感染危害新生儿B族链球菌脑膜炎13例临床分析和随访温州某医院2005年至2013年5月收治的13例新生儿B族链球菌脑膜炎的临床资料进行回顾性分析。13例患儿治愈7例，好转自动出院4例，因严重并发症死亡2例。出院1个月后1例早发型伴脑积水早产儿在家中死亡。 7例随访至1024个月：3例早发型患儿中，生长发育正常2例，运动发育落后1例；4例晚发型患儿，生长正常发育1例，运动发育落后2例，癫痫发作1例。结论：新生儿GBS脑膜炎住院时间长，死亡率高，易出现神经系统并发症和后遗症。中华儿科杂志2014年2月第52卷第2

11、期90年代美国新生儿的发病率第一组委会第一组委会AAP的报表的报表CDC准则草案公布准则草案公布共识准则共识准则B组链球菌协会成立组链球菌协会成立1996年GBS的预防共识准则1996年预防GBS的共识准则概述了两种方法，对确定需要的IAP妇女。基础筛查：在35-37周的胃肠道，泌尿生殖道基于风险的方法： 早产，胎膜早破18小时 或产时发热T38C美国CDC预防共识准则2010年美国疾病预防控制中心对早发性B族链球菌病的预防指南指出：1、在35-37孕周的孕妇的普遍筛查2、青霉素是首选药物，氨苄青霉素也可进行替代3、不推荐分娩期间常规使用抗生素预防感染基数大，正常寄居产妇影响新生儿：早发、晚发

12、疾病；死亡率高纠纷、风险及时筛查干预美国：发病率、死亡率大幅下降中国开展推广2011年2014年2010年2015年孕前和孕期保健指南（第一版）：建议在孕35-37周进行B族链球菌的筛查。围产期GBS预防指南：所有孕妇于35-37周筛查。早产临床诊断与治疗指南：筛查宫颈阴道GBS感染有可能预防早产。胎膜早破的诊断与处理指南：明确指出胎膜早破是B 族溶血性链球菌上行性感染的高危因素，是导致孕妇产时及产褥期感染、胎儿感染及新生儿感染的重要病原菌，应重视GBS感染的防治。中华医学会妇产科学分会美国疾病预防控制中心建议权威指南共识权威指南共识全球常规筛查GBS的地区中国部分省份及香港，日本等中国部分省

13、份及香港，日本等德国、法国、西班牙、波兰、瑞士、德国、法国、西班牙、波兰、瑞士、意大利、比利时、捷克、斯诺文尼亚意大利、比利时、捷克、斯诺文尼亚等等美国、加拿大美国、加拿大澳大利亚澳大利亚肯尼亚肯尼亚阿根廷阿根廷方法方法原理原理优点优点缺点缺点培养法培养法细菌培养细菌培养, ,形态鉴定形态鉴定, ,生化鉴定生化鉴定易开展易开展耗时长耗时长,48h,48h以上以上,GBS,GBS培培养难度高养难度高, ,灵敏度差，灵敏度差，容易漏检容易漏检免疫方法免疫方法彩色乳胶免疫层析法彩色乳胶免疫层析法胶体金胶体金快速、简便，无快速、简便，无需任何辅助仪器需任何辅助仪器设备设备灵敏度和特异性较差灵敏度和特异

14、性较差 只取一个部位，易漏只取一个部位，易漏检检微生物自动微生物自动分析鉴定系分析鉴定系统统生物与计算机的联合生物与计算机的联合应用应用全面的自动化全面的自动化时间长，成本高，设备时间长，成本高，设备昂贵昂贵荧光荧光PCRPCR采用采用PCRPCR技术结合分技术结合分子荧光标记探针技术，子荧光标记探针技术，快速、准确地检测快速、准确地检测GBSGBS快速快速4h4h内出结果内出结果 灵敏度高灵敏度高特异性强特异性强重复性高重复性高需有需有PCRPCR实验室实验室GBS检测方法检测方法 在羊血培养基上培养48h后的GBS菌落 ： 形成灰白、光滑、圆形突起小菌落 有明显的溶血圈。GBS培养法培养法

15、 荧光PCR仪给出客观的判别标准阳性弱阳阴性PCR检测方法检测方法B族链球菌核酸检测试剂盒（荧光族链球菌核酸检测试剂盒（荧光PCR法）法）优点：简便快捷、灵敏度高（物理破碎）重复性好、特异性强（分子信标）闭管操作、避免污染国内首家，发明专利 GBS核酸检测试剂盒适用核酸检测试剂盒适用生殖道分泌物生殖道分泌物和直肠分泌物和直肠分泌物标本类型标本类型荧光PCR法的取材方法新生儿鼻咽拭子的取材方法新生儿鼻咽拭子的取材方法GBS感染检查时机及治疗方案新生儿：新生儿：母亲阳性、母亲阳性、出生后出生后有高危疑似有高危疑似GBS感感染症状、染症状、同产房内同产房内有阳性者有阳性者不需要干预不需要干预GBS（

16、+）对症治疗对症治疗GBS（-）产时高危产时高危因素：因素：分娩时分娩时37 周，周，产时发热产时发热38 ,胎膜早破胎膜早破12小时小时,进行进行GBS检测检测 不需要干预不需要干预GBS（+）立即干预立即干预GBS（-）不需要干预不需要干预孕孕3537周周取阴道和直取阴道和直肠拭子检测肠拭子检测上次新生儿上次新生儿GBS感染史感染史本次妊娠有菌尿症本次妊娠有菌尿症GBS（+）立即干预立即干预产前干预产前干预有症状有症状无症状无症状GBS（-）2010 GBS预防医疗指南：抗生素治疗方案有无青霉素过敏有无青霉素过敏青霉素青霉素G G，首次剂量，首次剂量500500万单万单位位, ,然后每然后

17、每4 4小时小时250250300300万单万单位，直至分娩或者氨苄西林，位，直至分娩或者氨苄西林，首次剂量首次剂量2g2g，然后每，然后每4 4个小时个小时1g1g，直到分娩，直到分娩病人在接受青霉素或头孢病人在接受青霉素或头孢菌素时有无出现下列任一菌素时有无出现下列任一症状？症状？过敏症、血管性水肿、呼过敏症、血管性水肿、呼吸窘迫、荨麻疹吸窘迫、荨麻疹头孢唑啉，首次剂量头孢唑啉，首次剂量2G2G，然后每，然后每8 8个小时个小时1g1g，直到分娩直到分娩是否对红霉素和克林是否对红霉素和克林霉素敏感霉素敏感万古霉素每万古霉素每1212小时小时1g1g（静脉注射）直至分娩（静脉注射）直至分娩克

18、林霉素每克林霉素每8 8小时小时900mg900mg（静脉注射）直至分娩（静脉注射）直至分娩国内治疗推荐国内治疗推荐321中华医学会妇产科学分会产科学组青霉素青霉素G G 首次剂量首次剂量480 480 万单万单位静脉滴注位静脉滴注,240 ,240 万单位万单位/4 h /4 h 直至分娩。直至分娩。或氨苄青霉素或氨苄青霉素, ,负荷量负荷量2 g 2 g 静静脉滴注脉滴注, ,然后每然后每4 4 小时小时1 g 1 g 的的剂量静脉滴注直至分娩剂量静脉滴注直至分娩对青霉素过敏者则选对青霉素过敏者则选用头孢唑啉用头孢唑啉,2 g ,2 g 作为起作为起始剂量静脉滴注始剂量静脉滴注, ,然后然后每每8 8 小时小时1 g 1 g 直至分娩。直至分娩。对头孢菌素类过敏者对头孢菌素类过敏者则用红霉素则用红霉