高二生物微生物实验室培养上

1、高二生物微生物实验室培养上本节学习目标 1 了解了解 2 培养基的种类和成分培养基的种类和成分 3 无菌技术无菌技术消毒和灭菌的区别和方法消毒和灭菌的区别和方法 4 牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程 5 分离细菌方法：纯化大肠杆菌分离细菌方法：纯化大肠杆菌是一切肉眼看不见或看不清楚的微小是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。生物的总称。一、微生物一、微生物微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。

2、生物的总称。一、微生物一、微生物 1.1.分类分类特点：小特点：小 简简 低低微生物微生物病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物原核生物界原核生物界原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。物的总称。 1.1.分类分类一、微生物一、微生物病病毒毒的的结结构构 2.2.病毒病毒病病 毒毒 SARS冠状病毒、冠状病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）病毒的增殖病毒的增殖细菌的外形与大小细菌的外形与大小 3.3.细菌细菌 A. A. 球菌球菌 B. B. 杆菌杆菌 C. C.

3、弧菌弧菌 常见的细菌三种典型形态常见的细菌三种典型形态ABC细菌的结构细菌的结构芽孢：芽孢：细菌形成的椭圆形的休眠体细菌形成的椭圆形的休眠体芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌。异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同根据细菌所利用的能源和

4、碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。，将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌细菌的营养类型细菌的营养类型光能自养型：光合细菌光能自养型：光合细菌根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：异养菌：异养菌：腐生菌腐生菌寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌光能自养型：光合细菌光能自养型：光合细菌化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌细菌的营养类型细菌的营养类型根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的

5、能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。自养菌：自养菌：菌菌落落单个或少数细菌在固体培养基上大量单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的菌落是鉴定菌种的重要依据。重要依据。细菌的细菌的菌落特菌落特征因种征因种而异而异 菌落菌落 4.4.放线菌放线菌结构：结构：单细胞原核生物单细胞原核生物分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）（2）繁殖）繁殖孢孢子子丝丝|孢孢子子链霉素、土霉素、四环素、链霉

6、素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的是由放线菌产生的 应用应用: 5.5.真菌真菌酵母菌酵母菌酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉生生 殖殖腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖 6.6.营养及功能营养及功能微生物化学元素组成：微生物化学元素组成： 6.6.营养及功能营养及功能C、H、O、N、P、S微生物化学元素组成：微生物化学元素组成： 6.6.营养及功能营养及功能C、H、O、N、P、S五大营养物质五大营养物质碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子水水无机盐无机盐微生物化学元素组成：微生物

7、化学元素组成：二、培养基二、培养基 培养基（培养液）是由人工方培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。殖使用的混合营养液。 （1）按物理状态分：固体培养基和液）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。体培养基、半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成）按成分分：天然培养基和合成培养基。培养基。 1.1.培养基的类型培养基的类型固体培养基：菌落固体培养基：菌落液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀

8、生长半固体培养基：半固体培养基： 2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方同的培养基配方 2.不同的微生物往往需要采用不不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含有水不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pH、特殊、特殊营养物质以及氧气的要求。营养物质以及氧气的要求。1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分培养基组分提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生

9、素碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨蛋白胨10g氮源和维生素氮源和维生素NaCl 5g无机盐无机盐H2O定容在定容在1000mL氢元素、氧元素氢元素、氧元素 4.4.培养基的用途培养基的用途 4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌、工业生产液体培养基：增菌、工业生产固体培养基：纯化（分离），固体培养基：纯化（分离），鉴定、活菌计数、鉴定、活菌计数、保藏菌种保藏菌种半固体培养基：半固体培养基：液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基物理状态物理状态0101培养基种类工业生产、连续培养工业生产、连续培养菌种分离、鉴定、计数菌种分离、鉴定、计数菌种保存菌种保存培养基种类02

10、02鉴别培养基鉴别培养基选择培养基选择培养基目的用途目的用途0303添加某种指示剂后化学药剂用于菌种的鉴别添加某种指示剂后化学药剂用于菌种的鉴别伊红伊红美蓝鉴别大肠杆菌为深紫红色带金属美蓝鉴别大肠杆菌为深紫红色带金属光泽的菌落光泽的菌落,表面湿润光滑表面湿润光滑,菌落较大菌落较大,有典型有典型的浓郁酸败气味的浓郁酸败气味添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离1：加抗生素，用于分离真核生物和原核生物：加抗生素，用于分离真核生物和原核生物2：加高浓度的食盐获取金黄色葡萄球菌：加高浓度的食盐获取金黄色葡萄球菌3：缺：缺N源，分离固氮微生物源，分离固氮微生物4：缺少有

11、机：缺少有机C源，分离自养型微生物源，分离自养型微生物三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术三、无菌技术1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法操作中，所有防止杂菌污染的方法。1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法操作中，所有防止杂菌污染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。 三、无菌技术三、无菌技术（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义：）灭菌的定义： 2.

12、 无菌技术(1)消毒和灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌灭菌和消毒灭菌和消毒无菌技术无菌技术1、对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒、对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒2、将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌、将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌3、为避免周围微生物污染、实验操作应在酒精灯火焰旁进行、为避免周围微生物污染、实验操作应在酒精灯火

13、焰旁进行4、避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触、避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触消毒方法消毒方法1、日常生活经常用到的是煮沸消毒法、日常生活经常用到的是煮沸消毒法2、对一些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法（、对一些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法（80中中15min或或70 中中30min，实际生产中常用于鲜奶的消毒），实际生产中常用于鲜奶的消毒）3、对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒碳酸和煤酚皂等溶液以增强、对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒碳酸和煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后用紫外线进行物理消毒消毒效果，然后用紫外线进行物理消毒4、双手使用酒精进行消毒、双手使用酒精进行

14、消毒（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义：）灭菌的定义：3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灭菌的方法：灭菌的方法：1.灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：1.灼烧灭菌灼烧灭菌灭菌的方法：灭菌的方法：2. 干热灭菌：干热灭菌：160-170 下加热下加热1-2h。3. 高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌100kPa、121 下维下维持持15-30min. 1.无菌技术除了用来防止实验室无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？还有什么目的？旁栏思考旁栏思考

15、1.无菌技术除了用来防止实验室无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。自身被微生物感染。旁栏思考旁栏思考 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 2.请你判断以下材料或用具是否需

16、要请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手实验操作者的双手 答：（答：（1 1）、（）、（2 2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A BC D微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1. 1. 器具的灭菌

17、器具的灭菌2. 2. 培养基的配制培养基的配制3. 3. 培养基的灭菌培养基的灭菌4. 4. 倒平板倒平板5. 5. 微生物接种微生物接种6. 6. 恒温箱中培养恒温箱中培养7. 7. 菌种的保存菌种的保存三、实验操作三、实验操作四、实验操作四、实验操作牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏牛肉膏 5.0g蛋白胨蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定将上述物质溶解后，添加自来水，定容至容至1000mL1计算、计算、2 称量称量3 溶化溶化调调pH4灭菌（灭菌（1）分装：分装过程中注意不要使培养基沾分装：分装过程中注意不要使培

18、养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。（烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。（2）加）加塞塞上棉花塞，塞塞上棉花塞， （3）包扎包上牛皮纸（）包扎包上牛皮纸（4）放入高）放入高压蒸气灭菌锅，在压力为压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为、温度为121，灭菌灭菌1530min。（。（5）将培养皿用旧报纸包裹，放）将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌下灭菌2h。5倒平板倒平板操作步骤操作步骤倒平板技术倒平板技术1.将灭过菌的培将灭过菌的培养皿放

19、在火焰养皿放在火焰旁的桌面上，旁的桌面上，右手拿装有培右手拿装有培养基的锥形瓶养基的锥形瓶，左手拨出棉，左手拨出棉塞。塞。1234倒平板技术倒平板技术2.右手拿锥形瓶右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通，使瓶口迅速通过火焰。过火焰。1234倒平板技术倒平板技术1234倒平板技术倒平板技术12344.等待平板冷却等待平板冷却凝固，大约需凝固，大约需510min。然后。然后，将平板倒过来，将平板倒过来放置，使皿盖在放置，使皿盖在下，皿底在上。下，皿底在上。倒平板倒平板: 待培养基冷却到待培养基冷却到50 左右时，在酒精左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观

20、察平板，无杂菌污染才可用来接种后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 无菌检查：无菌检查： 将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入37的温室中培养的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？培养基的温度？问题讨论问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养

21、基的锥形答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。，就可以进行倒平板了。问题讨论问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水答：平板冷凝后

22、，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这培养基溅在皿盖与皿底

23、之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。好不要用这个平板培养微生物。四、分离细菌方法四、分离细菌方法2、稀释涂布平板分离、稀释涂布平板分离法法1、平、平 板划线分离法板划线分离法 1、平、平 板划线分离法板划线分离法1为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染；每次划线前灼烧接种环

24、是为了杀死上次划线后残留在接种环上的菌种，划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3在做第二次划线以及其后划线操作时为什么部是从上一次划线 的末端开始划 线？ 使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使菌种的数目逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。2、涂布分离法、涂布分离法2、涂布分离法、涂布分离法稀释涂布涂布平板分离法是涂布平板分离法是样品经过适当稀释样品经过适当稀释后，用无菌玻璃涂后，用无菌玻璃涂棒取稀释液均匀地棒取稀释液均匀地涂布在培养皿的琼涂布在培养皿的琼脂平板表面，培养脂平板表面，培养后挑取单菌落。后挑取单菌落。2、培养：在、培养：在LB液体培养基上扩大培养液体培养基上扩大培养五、大肠杆菌的培养