细菌遗传和变异医学微生物学讲义

1、细菌遗传和变异医学微生物学讲义 由于细菌个体微小、遗传物质较为简单由于细菌个体微小、遗传物质较为简单，易于人工培养，繁殖速度快，突变型容易识，易于人工培养，繁殖速度快，突变型容易识别和检出。因此，细菌一直被用做研究生物遗别和检出。因此，细菌一直被用做研究生物遗传与变异规律的实验材料。传与变异规律的实验材料。 利用人工诱变或杂交选育医药或食品工利用人工诱变或杂交选育医药或食品工业中所需要的高产菌株。业中所需要的高产菌株。 利用分子生物学技术，构建利用分子生物学技术，构建“基因工程基因工程菌菌”，生产新药、疫苗、食品添加剂，或者，生产新药、疫苗、食品添加剂，或者用于环保等。用于环保等。一、一、细菌

2、遗传的物质基础细菌遗传的物质基础二、细菌的基因二、细菌的基因小胸泳衣小胸泳衣突变突变三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组四、微生物基因组学四、微生物基因组学五、基因工程菌株的构建五、基因工程菌株的构建细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异 细菌染色体是一个裸露的闭合环状的细菌染色体是一个裸露的闭合环状的双链双链DNA分子，有核蛋白，缺乏组蛋白，分子，有核蛋白，缺乏组蛋白，无核膜包裹。无核膜包裹。 细菌基因组结构的主要特征：细菌基因组结构的主要特征： （1）遗传信息是连续的，不含内含）遗传信息是连续的，不含内含子。很少有重复序列。子。很少有重复序列。 （2）通常，编码相关功能的基因高度）通

3、常，编码相关功能的基因高度集中，组成操纵子集中，组成操纵子（operon）结构，自一个结构，自一个启动子开始转录成多基因的启动子开始转录成多基因的mRNA分子，翻分子，翻译成多种功能相关的蛋白质。译成多种功能相关的蛋白质。（plasmid） 是细菌染色体外的遗传物质，大多由闭合环是细菌染色体外的遗传物质，大多由闭合环状双链状双链DNA组成。组成。 具有自我复制的能力。具有自我复制的能力。 所携带的基因赋予宿主菌某些生物学所携带的基因赋予宿主菌某些生物学 性状（如性状（如F质粒、质粒、R质粒、毒力质粒、质粒、毒力质粒、 代谢质粒），增加代谢质粒），增加小胸泳衣小胸泳衣细菌的存活机细菌的存活机会。

4、会。非生存所必需，可自行丢失或消除。非生存所必需，可自行丢失或消除。可在细菌之间转移。可在细菌之间转移。质粒质粒DNA的特征的特征v1) 1)致育质粒（致育质粒（F F质粒）与有性生殖功能关联；质粒）与有性生殖功能关联；v2)2)耐药性质粒耐药性质粒 编码细菌对抗菌药物或重金属盐类的编码细菌对抗菌药物或重金属盐类的耐药性。分两类，一是耐药性。分两类，一是接合性接合性耐药质粒（耐药质粒（R R质粒），另质粒），另一是非接合耐药性质粒；一是非接合耐药性质粒； v3)3)毒力质粒（毒力质粒（ViVi质粒）质粒） 编码与该菌致病性有关的毒力编码与该菌致病性有关的毒力因子；因子；v4)4)细菌素质粒细菌

5、素质粒 编码细菌产生细菌素；编码细菌产生细菌素；v5)5)代谢质粒代谢质粒 编码产生相关的代谢酶。编码产生相关的代谢酶。 （transposon） 是一个是一个DNA片段（片段（2kb），可在质粒），可在质粒与质粒之间或质粒与染色体之间随机转移，与质粒之间或质粒与染色体之间随机转移，故又称为故又称为“跳跃基因跳跃基因” 。 转座子不能自我复制。转座子不能自我复制。转座子转座子质粒质粒转座子的结构特点转座子的结构特点 能为整合酶所能为整合酶所识别，与插入功能有关。识别，与插入功能有关。 带有遗传信息，如常带有耐带有遗传信息，如常带有耐药基因、细菌毒素基因、整合酶（或转座酶药基因、细菌毒素基因、整

6、合酶（或转座酶）基因。）基因。 当转座子插入到某一基因组中，可能当转座子插入到某一基因组中，可能会产生什么遗传学效应？会产生什么遗传学效应？ 可引起插入基因失活，可引起插入基因失活，产生基因突变。产生基因突变。 在插入部位又出现一个或在插入部位又出现一个或多个耐药基因，使细菌产生耐多个耐药基因，使细菌产生耐药性或多重耐药性。药性或多重耐药性。 （bacteriophage）噬菌体是感染细菌、真噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。微生物的病毒。转座子转座子质粒质粒一、细菌遗传的物质基础一、细菌遗传的物质基础三、细菌的基因转移三、细菌的基因转移小胸泳衣小胸泳衣

7、与重组与重组四、微生物基因组学四、微生物基因组学五、基因工程菌株的构建五、基因工程菌株的构建细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异（gene mutation）：）：细菌染色细菌染色体基因发生突然而稳定的结构改变，包括一体基因发生突然而稳定的结构改变，包括一对或少数几对碱基的缺失、插入对或少数几对碱基的缺失、插入或置换（点突变：或置换（点突变：point mutation），），导致细菌性状的遗传性变异。导致细菌性状的遗传性变异。 随机发生，不定向随机发生，不定向 稳定稳定 自发突变产生频率为自发突变产生频率为10-1010-6 可诱发性：野生株、突变株可诱发性：野生株、突变株 耐药性突变：选择标记

8、耐药性突变：选择标记 毒力突变：疫苗研制、新现传染病毒力突变：疫苗研制、新现传染病 营养缺陷体突变：新药诱变作用检测营养缺陷体突变：新药诱变作用检测 高产突变：抗生素等药品、食品生产高产突变：抗生素等药品、食品生产 抗原性突变：抗原性突变：逃逸免疫机制逃逸免疫机制 日本发生过一次细菌性痢疾大流行。从病日本发生过一次细菌性痢疾大流行。从病人粪便中分离到人粪便中分离到痢疾杆菌敏感株和耐药痢疾杆菌敏感株和耐药株（同时耐链霉素、氯霉素、四环素、磺胺类株（同时耐链霉素、氯霉素、四环素、磺胺类），且），且有完全相同的多重有完全相同的多重耐药性。多重耐药性传播迅速。耐药菌在传代、耐药性。多重耐药性传播迅速。

9、耐药菌在传代、保藏过程中可保藏过程中可耐药性。耐药性。 能否用基因突变解释以上现象？能否用基因突变解释以上现象？二、细菌的基因突变二、细菌的基因突变四、微生物基因组学四、微生物基因组学五、基因工程菌株的构建五、基因工程菌株的构建细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异 供体菌供体菌（donor）将遗传物质转移至受体将遗传物质转移至受体菌菌（recipient），使后者获得新的生物学性状，使后者获得新的生物学性状，称为基因转移称为基因转移（gene transfer）。 细菌通过水平方向的基因转移和重组，细菌通过水平方向的基因转移和重组，产生新的基因型个体，以适应随时改变的环产生新的基因型个体，以适应随

10、时改变的环境。境。基因转移的概念基因转移的概念 质粒质粒（plasmid） 转座子转座子（transposon） 温和噬菌体温和噬菌体（temperate phage）基因转移的元件基因转移的元件 接合（接合（conjugation） 转化转化（transformation） 转导转导（transduction） 转座转座（transposition）基因转移的方式基因转移的方式1、接合、接合（conjugation） 接合：供体菌通过性菌毛与受体菌直接接合：供体菌通过性菌毛与受体菌直接接触，并将遗传物质（主要是质粒接触，并将遗传物质（主要是质粒DNA）转）转移给受体菌，使受体菌获得新的遗传性

11、状。移给受体菌，使受体菌获得新的遗传性状。质粒质粒质粒接合转移示意图质粒接合转移示意图染色体染色体性菌毛性菌毛受体菌受体菌供体菌供体菌赋予宿主菌的赋予宿主菌的耐药性耐药性 编码性菌毛，决编码性菌毛，决定自主复制与接定自主复制与接合转移合转移 R质粒主要以接合方式从耐药菌传递给敏质粒主要以接合方式从耐药菌传递给敏感菌，使后者变为耐药菌。感菌，使后者变为耐药菌。 R质粒在同一种属或不同种属细菌之间质粒在同一种属或不同种属细菌之间传递，造成耐药性的广泛传播，尤其在肠传递，造成耐药性的广泛传播，尤其在肠道杆菌中比较普遍，给临床治疗带来很大道杆菌中比较普遍，给临床治疗带来很大困难困难 。 日本发生过一次

12、细菌性痢疾大流行。从病日本发生过一次细菌性痢疾大流行。从病人粪便中分离到人粪便中分离到痢疾杆菌敏感株和耐药痢疾杆菌敏感株和耐药株（同时耐链霉素、氯霉素、四环素、磺胺类株（同时耐链霉素、氯霉素、四环素、磺胺类），且），且有完全相同的多有完全相同的多重耐药性。多重耐药性传播迅速。耐药菌在重耐药性。多重耐药性传播迅速。耐药菌在传代、保藏过程中可传代、保藏过程中可耐药性。耐药性。 能否用基因突变解释以上现象？能否用基因突变解释以上现象？F+F-F+F-F+F+F+F+DonorRecipient三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组F+F+Hfr三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重

13、组HfrF-HfrF-HfrF-HfrF-三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组FFFFFF-FF-三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组雄性菌株雄性菌株 Hfr菌株菌株 F 菌株菌株 菌株菌株 （雌株）（雌株）因子和接合因子和接合 F+ 菌株菌株三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组FF+F+F+F+FFF+FHfrHfrF（多数情况下）F+HfrHfrHfr（少数情况下）雄性菌株与雌性菌株接合结果三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组Griffith肺炎链球菌感染肺炎链球菌感染小鼠实验（小鼠实验（1928）无荚膜活菌无荚膜活菌有荚膜活菌有荚膜活菌有荚

14、膜死菌有荚膜死菌有荚膜的活菌？有荚膜的活菌？ 活的无荚膜肺炎链球菌从死的有荚膜肺活的无荚膜肺炎链球菌从死的有荚膜肺炎链球菌中获得荚膜（毒力决定因子）编码基炎链球菌中获得荚膜（毒力决定因子）编码基因，称之为转化因，称之为转化（transformation）。）。 引起转化现象的物质称为转化因子。引起转化现象的物质称为转化因子。 Avery研究揭示，转化因子的本质是研究揭示，转化因子的本质是DNA，即遗传物质是，即遗传物质是DNA。1944年，获得诺年，获得诺贝尔医学生理学奖。贝尔医学生理学奖。 2、转化、转化（transformation） 转化：受体菌从周围环境中直接摄取供转化：受体菌从周围环

15、境中直接摄取供体菌游离的体菌游离的DNA片段，并整合入受体菌基因片段，并整合入受体菌基因组中，从而获得供体菌部分遗传性状的过程组中，从而获得供体菌部分遗传性状的过程。 （1）转化的前提条件）转化的前提条件 1020 个基因个基因同源性高的、未变同源性高的、未变 性的双链性的双链DNA；质粒；质粒DNA。处于处于“感受态感受态”（2）自然转化过程）自然转化过程1 1、受体菌处于感受态、受体菌处于感受态(competence)(competence) Ca Ca2 2诱导法、电穿孔法诱导法、电穿孔法 受体细胞经过一些特殊方法处理后受体细胞经过一些特殊方法处理后, ,细胞膜的细胞膜的通透性发生了暂时

16、性的改变通透性发生了暂时性的改变, ,成为能允许外源成为能允许外源DNADNA分分子进入的感受态细胞。子进入的感受态细胞。 转化因子的结合与进入转化因子的结合与进入 双链双链DNA与感受态受体菌表面的与感受态受体菌表面的DNA结结合受体结合。其中一条链被降解产生能量；合受体结合。其中一条链被降解产生能量；另一条链与特异另一条链与特异DNA结合蛋白形成复合物，结合蛋白形成复合物，进入菌体内。进入菌体内。 转化因子的整合转化因子的整合 单链单链DNA不经复制，与受体菌同源不经复制，与受体菌同源DNA区段的单链配对，被取代的受体菌区段的单链配对，被取代的受体菌DNA单单链被降解，最终链被降解，最终产

17、生转化子。产生转化子。有荚膜的活菌？有荚膜的活菌？3、转导、转导（transduction） 以以温和噬菌体温和噬菌体为媒介，将供体菌为媒介，将供体菌DNA片片段（染色体段（染色体DNA、非接合性质粒、非接合性质粒DNA）转移到）转移到受体菌内，通受体菌内，通过基因重组而使受体过基因重组而使受体菌获得新的遗传性状。菌获得新的遗传性状。（1）转导的概念）转导的概念 是感染细菌、放线菌、真菌等的病毒。是感染细菌、放线菌、真菌等的病毒。 分为头部和尾部。头部由核心（核酸）分为头部和尾部。头部由核心（核酸） 和衣壳（蛋白质）构成。和衣壳（蛋白质）构成。 能通过细菌滤器。能通过细菌滤器。 须寄生在活的易

18、感宿主须寄生在活的易感宿主 菌体内。菌体内。（2）噬菌体）噬菌体（phage）（3）温和噬菌体）温和噬菌体 烈（毒）性噬菌体烈（毒）性噬菌体（virulent phage）：噬菌体在宿主菌体内复制增殖，产生大量子代噬菌体在宿主菌体内复制增殖，产生大量子代噬菌体，并最噬菌体，并最终裂解细菌，建立终裂解细菌，建立溶菌周期。溶菌周期。 温和噬菌体温和噬菌体（temperate phage）：感：感染宿主菌后，不立即增殖，而是将其核酸染宿主菌后，不立即增殖，而是将其核酸整合到宿主菌染色体基因组中，与宿主菌整合到宿主菌染色体基因组中，与宿主菌DNA一起复制，一起复制，并随细菌的分裂而传并随细菌的分裂而传

19、至子代细菌。至子代细菌。前噬菌体前噬菌体溶原性细菌溶原性细菌 有些温和噬菌体可使溶原性细菌的表型有些温和噬菌体可使溶原性细菌的表型发生相应改变，称之为溶原性转换发生相应改变，称之为溶原性转换（lysogenic conversion）。）。例如，白喉棒状杆例如，白喉棒状杆菌若携带菌若携带噬菌体时，可产生白喉毒素。噬菌体时，可产生白喉毒素。 溶原性细菌能正常以二分裂方式繁殖溶原性细菌能正常以二分裂方式繁殖，前噬菌体也一代一代传下去。但有时也会，前噬菌体也一代一代传下去。但有时也会自发终止（发生自发终止（发生率率10-5），从染色体上），从染色体上脱落，进入溶菌周期。脱落，进入溶菌周期。（4）转导

20、的机制）转导的机制 前噬菌体从染色体前噬菌体从染色体上脱离进行增殖，装配成上脱离进行增殖，装配成新的子代噬菌体。大约在新的子代噬菌体。大约在105107次装配中发生一次装配中发生一次错误，误将大小合适的次错误，误将大小合适的供体菌供体菌DNA片段装入噬菌片段装入噬菌体头部，成为体头部，成为“假噬菌体假噬菌体”。 假噬菌体假噬菌体供体菌供体菌 当当“假噬菌体假噬菌体”（转导噬菌体）再度（转导噬菌体）再度感染受体菌时，将供感染受体菌时，将供体菌体菌DNA带入受体菌带入受体菌内。内。完全转导与流产转导完全转导与流产转导普遍性转导、局限性转导普遍性转导、局限性转导假噬菌体假噬菌体受体菌受体菌供体菌供体

21、菌DNA（transposition） 转座子在质粒之间或质粒与染色体之转座子在质粒之间或质粒与染色体之间的自行转移现象，称之为转座间的自行转移现象，称之为转座 。 转座子能在转座子能在2个没有任何同源性的基因组个没有任何同源性的基因组之间转座（即插入到某一基因），并能引起之间转座（即插入到某一基因），并能引起一系列遗传效应。一系列遗传效应。 可引起插入基因失活，产生基因突变。可引起插入基因失活，产生基因突变。 在插入部位引入一个或多个新的基因在插入部位引入一个或多个新的基因 （如耐药基因、毒素基因。（如耐药基因、毒素基因。 转座子的自行转移不需要核苷酸碱基对转座子的自行转移不需要核苷酸碱基对

22、同源才能插入，可在革兰阴性菌和革兰阳性同源才能插入，可在革兰阴性菌和革兰阳性菌之间转移。菌之间转移。二、细菌的基因突变二、细菌的基因突变三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组五、基因工程菌株的构建五、基因工程菌株的构建细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异 微生物基因组学微生物基因组学（Genomics）是利用全是利用全基因组基因组DNA序列研究微生物基因及其功能序列研究微生物基因及其功能的学科。的学科。 细菌是研究和分析基因组序列与相细菌是研究和分析基因组序列与相关生物学功能关系的理想模式。关生物学功能关系的理想模式。 首先，用超声波将细菌染色体首先，用超声波将细菌染色体DNA随随机切割

23、成一定大小的机切割成一定大小的DNA片段，插入到测序片段，插入到测序载体（质粒）中，以构建载体（质粒）中，以构建DNA文库，文库，进行进行大规模的测序，大规模的测序，对对DNA序列加以拼接。序列加以拼接。1、核苷酸序列测定、核苷酸序列测定 经过计算机分析，完成全基因组各个经过计算机分析，完成全基因组各个区域的编号和注释，最后存入数据库，并区域的编号和注释，最后存入数据库，并在互联网上发表，以供全世界的科学家参在互联网上发表，以供全世界的科学家参考和使用。考和使用。 细菌全基因组序列测定完成后，更重细菌全基因组序列测定完成后，更重要的任务是鉴定基因及尽可能确定基因的要的任务是鉴定基因及尽可能确定

24、基因的功能，称之为后基因组学。功能，称之为后基因组学。 2、微生物基因组结构与功能研究、微生物基因组结构与功能研究 根据病原菌全基因组序列，应用现代生物根据病原菌全基因组序列，应用现代生物信息软件对基因序列进行分析，可确定哪些基信息软件对基因序列进行分析，可确定哪些基因与毒力、体内定居或体内持续感染有关，从因与毒力、体内定居或体内持续感染有关，从而阐明病原菌致病基因及其产物。而阐明病原菌致病基因及其产物。（1）揭示病原微生物的致病机制）揭示病原微生物的致病机制 从分子和细胞水平上，揭示微生物与宿主从分子和细胞水平上，揭示微生物与宿主之间的相互作用，更深入地阐明病原微生物的之间的相互作用，更深入

25、地阐明病原微生物的致病机制，诸如毒素作用机制、宿主细胞中微致病机制，诸如毒素作用机制、宿主细胞中微生物的受体，侵入细胞内微生物的定位和新表生物的受体，侵入细胞内微生物的定位和新表位的发现，对宿主免疫系统的反应等。位的发现，对宿主免疫系统的反应等。（2）建立灵敏特异的基因诊断技术）建立灵敏特异的基因诊断技术 传统的病原体诊断依赖于致病微生物的形传统的病原体诊断依赖于致病微生物的形态、培养和生化特征。态、培养和生化特征。 通过测定多种致病与非致病微生物的基因通过测定多种致病与非致病微生物的基因组序列，可以获得大量的基因信息。如特异组序列，可以获得大量的基因信息。如特异DNA序列用于诊断，菌株特异性

26、基因用于分型序列用于诊断，菌株特异性基因用于分型。 图图2 2 引物特异性单重引物特异性单重PCRPCR电泳结果电泳结果m 100bp Marker， 1 CMCC51252, 2 CMCC51572, 3 CMCC51592, 4 GIM-Shi1, 5 GIM-Shi2, 6 ATCC9027, 7 ATCC15442, 8 CMCC10104, 9 GIM-Ps, 10 ATCC43889, 11 GDCIQ-O157-1, 12 GDCIQ-O157-2, 13 CMCC50093, 14 CMCC50071, 15 CMCC50115, 16 CMCC47001, 17 GIM-Vp

27、, 18 GDCIQ-Vp（3）开发新型抗菌药物）开发新型抗菌药物 病原菌全基因组序列的测定，一方面病原菌全基因组序列的测定，一方面，能揭示细菌耐药的确切机制，对现有抗，能揭示细菌耐药的确切机制，对现有抗菌药物进行改造或开发新型药物。菌药物进行改造或开发新型药物。 另一方面，可使药物的研发策略从筛选另一方面，可使药物的研发策略从筛选化合物库转向优先筛选靶位基因，即以病原化合物库转向优先筛选靶位基因，即以病原菌为目标，找出在人类基因组中缺失，对耐菌为目标，找出在人类基因组中缺失，对耐药菌生存必不可少并在感染过程中优先表达药菌生存必不可少并在感染过程中优先表达的基因；选择这些基因作为抗菌药物的靶位

28、的基因；选择这些基因作为抗菌药物的靶位点，可设计出具有针对性很强的药物（窄谱点，可设计出具有针对性很强的药物（窄谱抗生素）。抗生素）。 病原菌全基因组序列的测定，还可大大病原菌全基因组序列的测定，还可大大加速新疫苗的研制。加速新疫苗的研制。（4）开发新型疫苗）开发新型疫苗 通过生物信息学软件，对全基因组序列进通过生物信息学软件，对全基因组序列进行分析，可预测出病原体的具有很高免疫原性行分析，可预测出病原体的具有很高免疫原性的保护性抗原及其表位。的保护性抗原及其表位。 将抗原或表位编码基因在合适的载体系将抗原或表位编码基因在合适的载体系统中表达，分离纯化目的抗原或表位。最后统中表达，分离纯化目的

29、抗原或表位。最后，检测抗原的安全性和有效性。，检测抗原的安全性和有效性。 随着微生物基因组被解码和微生物功能随着微生物基因组被解码和微生物功能基因组的研究与开发，微生物学正面临着革基因组的研究与开发，微生物学正面临着革命性的飞跃。微生物基因组研究所获得的信命性的飞跃。微生物基因组研究所获得的信息将迅速转化为生产力，微生物感染性疾病息将迅速转化为生产力，微生物感染性疾病的诊、防、治，将会彻底得到改观。的诊、防、治，将会彻底得到改观。 二、细菌的基因突变二、细菌的基因突变三、细菌的基因转移与重组三、细菌的基因转移与重组四、微生物基因组学四、微生物基因组学细菌的遗传与变异细菌的遗传与变异目的基因目的

30、基因重组质粒重组质粒转化转化目的蛋白目的蛋白重组重组DNA技术技术基因工程菌基因工程菌 质粒作为一种独立的复制子，容易从细胞质粒作为一种独立的复制子，容易从细胞中分离出来、在体外进行遗传操作和转入到合适中分离出来、在体外进行遗传操作和转入到合适的受体细胞中，表达外源目的基因。的受体细胞中，表达外源目的基因。 自主复制，自主复制，可表达外源基因可表达外源基因 限制性酶切位点限制性酶切位点 选择性标记（耐药性）选择性标记（耐药性） 质粒可作为表达载体，首先在体外构建质粒可作为表达载体，首先在体外构建重组质粒（携带目的基因）；再转入原核表重组质粒（携带目的基因）；再转入原核表达系统（大肠杆菌）或真核

31、表达系统（酵母达系统（大肠杆菌）或真核表达系统（酵母菌）中，构建菌）中，构建“基因工程菌株基因工程菌株”；大量表达；大量表达目的基因，获得目的蛋白（如氨基酸、味精目的基因，获得目的蛋白（如氨基酸、味精、抗生素、胰岛素、干、抗生素、胰岛素、干扰素、生长激素、乙肝疫苗）。扰素、生长激素、乙肝疫苗）。 幽门螺杆菌幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的致病菌，并是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的致病菌，并与胃腺癌与胃腺癌和胃部淋巴瘤的和胃部淋巴瘤的发生密切相关。发生密切相关。立论依据立论依据 我国人口我国人口Hp感染率为感染率为70%。目前主要采。目前主要采用的抗生素疗法（三联药物用的抗生素疗法（三联药物:埃索美拉唑阿莫埃索美拉唑阿莫西林克拉霉素西林克拉霉素 ）的疗效不甚理想，易复发