食品中菌落总数的测定实验

1、食品中菌落总数的测定实验一、 实验目的：了解稀释平板计数的原理， 掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后， 其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落， 即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。 统计菌落数， 根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。 为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形

2、成单位 (colony-forming units ， cfu) 而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响， 但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1. 仪器恒温培养箱：（36 ± 1 ， 30 ± 1 。）均质器或振荡器无菌吸管： 1 ml （ ml刻度）、 10 ml （ ml刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml 、500 ml 、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2. 样品1

3、）平板计数琼脂（plate count agar ，PCA）培养基：蛋白胨 g 、酵母浸膏 g、葡萄糖 g、琼 脂 g 、蒸馏水 1 000 ml 、pH ±。将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解， 调节pH。分装试管或锥形瓶，121 高压灭菌15 min 。注：用平板计数琼脂，称取g 于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 高压灭菌 20min ，冷却至 4547左右备用。2 ） 无 菌生理 盐 水 ：氯 化 钠 （ NaCl ）蒸 馏 水 ( 纯 净 水 )500ml称取 NaCl 溶于 500ml 蒸馏水中， 121 高压灭菌20min 。3. 器材100ml无菌水

4、、 9ml 无菌水、无菌平皿、天平、称样瓶、记号笔、酒精灯等。四、 操作及实验步骤1. 样品的稀释： 25 g(ml) 样品 +225 ml 稀释液，均质。10倍系列稀释。每递增稀释一次，换用1次1 ml无菌吸管或吸头。（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）选择 2个 3个适宜稀释度的样品匀液，各取 1 ml分别加入无菌培养皿内。吸取1 ml 空白稀释液作空白对照。每皿中加入15 ml 20 ml平板计数琼脂培养基，并转动平皿使其混合均匀。2. 培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ±1 培养 48 h ±2 h 。水产品 30 ± 1 培养 72 h±3 h。（如果有弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 ml ），凝固后翻转平板。）3. 菌落计数：记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（ colony-forming units，CFU）表示。五、计算公式 :式中： N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n