临床检测--谷丙转氨酶活性的测定课件

1、现在学习的是第1页，共12页现在学习的是第2页，共12页临床意义临床意义谷丙转氨酶谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic Transaminase，GPT)丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶(Alanine Transaminase，ALT) ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死急性肝炎及肝细胞坏死，血清中谷丙转，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也可中度或轻度增高

2、。可中度或轻度增高。现在学习的是第3页，共12页如何测定酶的活性如何测定酶的活性?活性单位定义中必须规定哪些条件活性单位定义中必须规定哪些条件?现在学习的是第4页，共12页 在紫外分光光度计中，在紫外分光光度计中，1ml血清血清(反应溶液总量为反应溶液总量为3ml)在在340nm波长下，用内径为波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在的比色皿，在25，1分分钟内生成的钟内生成的丙酮酸丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变变成成NAD+，使光密度下降，使光密度下降0.001为为1个转氨酶活性单位。个转氨酶活性单位。 卡门氏单位的定义为：卡门氏单位的定义为：丙氨酸丙氨酸

3、+ -酮戊二酸酮戊二酸 谷氨酸谷氨酸 + 丙酮酸丙酮酸GPT乳酸氢酶乳酸氢酶 NAD+ +乳酸乳酸NADH+H+现在学习的是第5页，共12页丙氨酸丙氨酸 + -酮戊二酸酮戊二酸 谷氨酸谷氨酸 + 丙酮酸丙酮酸GPT乳酸氢酶乳酸氢酶 NAD+ +乳酸乳酸NADH+H+显色反应显色反应分光光度法分光光度法现在学习的是第6页，共12页现在学习的是第7页，共12页现在学习的是第8页，共12页 3737水浴预温水浴预温5 5分钟，各管加分钟，各管加2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼0.5ml0.5ml混匀，再在混匀，再在3737水浴中放置水浴中放置2020分钟后，各管加分钟后，各管加0.4mol/L

4、0.4mol/L NaOHNaOH溶液溶液5ml5ml，混匀放，混匀放置置1010分钟后，以蒸馏水调零点，用分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm520nm波长比色，读取各管光密。波长比色，读取各管光密。. . 各管的读数均减去对照管各管的读数均减去对照管(O(O管管) )的光密度，然后以光密度值为的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。 实验操作实验操作1. 1. 标准曲线的制作标准曲线的制作: :现在学习的是第9页，共12页2.2.酶活性测定：酶活性测定：测定前将底物缓冲液在测定前将底物缓冲液在3737水浴中预温水浴中预温5 5分钟，分钟，再按下表操作。再按下表操作。 混匀，在室温中放置混匀，在室温中放置1010分钟，以蒸馏水调零点，用分钟，以蒸馏水调零点，用520nm520nm波长比波长比色，读取光密度。用色，读取光密度。用T-CT-C管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所含含ALTALT的酶活性。的酶活性。参考值：参考值： 525卡门