缓解体力疲劳功能评价方法

1、缓解体力疲劳功能试验项目、试验原则及结果判定1. 实验项目1.1 动物实验1.1.1动物体重1.1.2 负重游泳实验1.1.3 力竭实验1.2人体试食试验1.2.1 临床症状与体征1.2.2 跑台试验2 试验原则2.1 动物实验所列指标均为必做项目，动物负重游泳和力竭实验前，对实验动物进行运动能力筛选。2.2 实验前必须对同批受试样品进行违禁药物的检测。2.3 运动实验与生化指标检测相结合。2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。2.5 停止给予受试物一天后进行效果观察。3 结果判定3.1 动物实验：负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性（特指无显著不利影响），

2、可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。3.2 人体试食试验：（1）试食前后，受试组自身对照，肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶无不利的显著性改变；（2）跑台试验：试食组自身对照，试食后运动时间与试食前相比显著性增加，首次试食后运动时间与试食前相比无显著性差异。满足（1）和（2）可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。缓解体力疲劳功能评价方法1. 动物实验1.1 原理在一定时间内给予一定量的受试样品，通过持续服用，调整特定人群机体状态，使其拥有更好的调节功能，该功能包括应对潜在需求、使机体处于良好状态，具有更长时间作业能力或在相同作业时间内不出现更重的疲劳表现。1.2 负重游泳实

3、验1.2.1 仪器与器材游泳箱（大小约80cm×50cm×60cm），电子天平、铅皮。1.2.2 实验方法1.2.2.1 实验动物推荐使用雄性小鼠，6周龄，体重20-24g。1.2.2.2 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个阴性对照组，一个空白对照组，一个单次中剂量受试组。其中以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组灌胃给予安慰剂。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。1.2.2.3 实验步骤末次给受试样品24小时后，将尾根部负荷6%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于40cm，水温30±2

4、.0，记录小鼠自游泳开始至力竭时间，即小鼠负重游泳时间。力竭判断标准为：小鼠沉入水中超过10秒，且放在平面上无法完成翻正反射。1.2.3 数据处理及结果判定游泳时间为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。（1）受试样品组负重游泳时间明显长于阴性对照组和空白对照组，

5、且差异有显著性；（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，负重游泳时间无显著差异。同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阳性。1.3 力竭实验1.3.1仪器与器材 全自动生化仪，游泳箱，电子天平、铅皮。1.3.2 实验方法1.3.2.1 实验动物 雄性SD大鼠，体重160-200g。1.3.2.2 剂量设计和分组 大鼠以人体推荐量的5倍为基本剂量。其余同1.2.2.2。1.3.2.3 实验步骤末次给受试样品24小时后，采用尾部负重3%体重铅皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水温31±1.0，当大鼠游至连续3次没入水底，每次超过10秒，视为力竭。记录大鼠自游泳开始至力竭时间，

6、大鼠腹主动脉采血全血，置4冰箱约3h，血凝固后2000rpm离心15min，取血清备用，测定尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性。1.3.3 数据处理及结果判定血液生化数据为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值<F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值F0.05，P0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。（1）受试样品组与阴性对照组和空白对照组相

7、比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阴性（特指无显著不利影响）。1.4 注意事项1.4.1 每一游泳箱一次放入动物不宜太多，每只小鼠占用的水面积大多在300平方厘米以上，每平方米水面同时不超过6只大鼠游泳，否则互相挤靠，影响实验结果。1.4.2 水温对小鼠的游泳时间有明显的影响，因此要求各组水温控制一致，每一批实验动物下水之前都应测量水温，水温以30-31为宜，如果过低可能引起实验动物痉挛，影响实验结果。1.4.3 铅

8、皮缠绕松紧应适宜。1.4.4 观察者应在整个实验过程中使每只实验动物四肢保持运动。如果实验动物漂浮在水面四肢不动，可用木棒在其附近搅动。同时适时清除水中杂质，以避免影响实验结果。1.4.5 不同批的实验动物因饲养环境、季节等原因的变化体质上会出现差异。因此受试样品组和对照组应采用同一批动物同时进行实验。1.4.6负重游泳实验、力竭实验前对实验动物进行能力筛选。1.5 结果判定负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性，可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。2 人体试食试验2.1 受试者的选择标准2.1.1 纳入受试者标准：2.1.1.1需要较长时间持续中等强度作业或易于疲劳的自愿

9、受试者人群。2.1.2 排除受试者标准：2.1.2.1 年龄在20岁以下或45岁以上男性，年龄在20岁以下或55岁以上女性及妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本样品过敏者。2.1.2.2已知患有心血管、肺脏（如哮喘等）和（或）代谢疾病（如糖尿病等），精神病患者；心血管、肺脏和（或）代谢疾病的症状或体征。 2.1.2.3经常用药、嗜酒吸烟或戒烟不足6个月，血浆胆固醇200mg/dl，4周内参加过其它实验。2.1.2.4 正在服用其它营养补充剂、治疗药物或接受其它治疗者。2.1.2.5 未按规定服用样品，无法判断功效，或资料不全等影响功效或安全性判断者。2.2 试验设计及分组要求：采用自身对照设计。受

10、试者不少于50例。2.3 受试样品的剂量和使用方法：受试者在试食观察期间，按推荐服用方法、服用量服用受试产品，连续给予受试样品30天，必要时可延长至45天。2.4 观察指标2.4.1 安全性指标2.4.1.1 一般状况 包括精神、睡眠、饮食、大小便等2.4.1.2 试食前后进行血、尿、便常规检查（肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶）2.4.1.3 肝、肾功能检查2.4.1.4心电图2.4.2 功效性指标2.4.2.1 一般情况详细询问病史，了解受试者饮食情况、活动量。观察主要症状：头痛、眩晕、心悸、耳鸣、失眠、烦躁、腰膝酸软等。2.4.2.3 跑台试验（1）试食前测试在跑步机上0坡度，以8km

11、/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最大心率时为止，为试食前运动时间，并于运动后采血。其中最大心率=220 - 年龄。（2）试食中测试第二次试食2小时后，在跑步机上0坡度，以8km/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最大心率时为止，为首次试食运动时间。其中最大心率=220 - 年龄。（2）试食后测试 试食结束24小时，在跑步机上0坡度，以8km/小时速度进行跑步运动，对心率进行实时监测。从55%最大心率开始计时，连续运动60分钟以上，且心率达到69%最

12、大心率时为止，为试食后运动时间，并于运动后采血。其中最大心率=220 - 年龄。2.5 注意事项2.5.1跑台试验中三次测试为测试当日同一时间，以避免时间周期对运动时长产生的影响；2.5.2跑台试验中试食前测试60分钟以内即超过69%最大心率者不可纳入受试者人群；2.5.3跑台试验中试食后测试前，先对受试者进行安全性观察和一般性观察，若受试者不符合测试条件，该受试者不进行试食后测试。2.6 数据处理和结果判定测得数据为计量资料，可用t检验进行分析。凡自身对照资料可以采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐要求，改用t检验或秩和检验；但变异系数太大（如CV>50%）的资料应用秩和检验。结果判定（1）试食前后，受试组自身对照，肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶无不利的显著性改变；（2）跑台试验：试食组自身对照，试食后