论文杨青终稿

1、 聚维酮碘对草鱼苗的急性毒性检测和酶活力测定 学生：杨青青指导老师：王春花淮南师范学院生命科学系摘 要：采用常温静水实验法，探讨聚维酮碘对草鱼鱼苗(体长4.0±0.5cm) 的急性毒性效应，酶活力试验主要研究聚维酮碘对鲤鱼肝脏、血液、肌肉中的过氧化氢酶(Catalase)，超氧化物歧化酶 (Superoxide dismutase，SOD)和谷胱甘肽硫转移酶(Glutathione Stransferase，GST)的活性影响。结果表明，聚维酮碘对草鱼鱼苗24 h、48 h 、96 h 的半致死浓度分别为21.11mg/ L 、20.68mg/ L 、20.60mg/ L。对草鱼CA

2、T、SOD和GST活性均有影响。在相同浓度（1/10LC50）不同暴露时间(5h、ld、2d、3d)的情况下，CAT活性先升高后降低；SOD和GST的活性也是先升高后降低。关键词：聚维酮碘；过氧化氢酶；超氧化物歧化酶；谷肤甘肽硫转移酶Studies on Acute Toxicity of pvidone-iodine( PVP -I) and determination of enzyme activity to Grass CarpStudent:Yang Qing-qing Instructor:Wang Chun-huaDepartment of life science， Huain

3、an Normal UniversityAbstract : The acute toxicity of pvidone iodine ( PVP - I) Grass Carp (body length 4.0±0.5cm) was determined by conventional met hod. Major research activity test mainly determine the effects of PVP-I on the activity of SOD,CAT and GST in the liver, blood, muscle of Grass Ca

4、rp were studied and the interaction mechanism was also investigated.The results showed that povidone-iodine on grass carp fry 24 h, 48 h, 96 h semi-lethal concentration of 21.11mg / L, 20.68mg / L, 20.60mg / L. The activities of CAT,SOD and GST of the Grass Carp were affected.For the groups treated

5、with the same concentration(1/10LC50 )but different exposure time(5h、ld、2d、3d),the activities of CAT inereased initially and then decreased; and the activities of SOD and GST also increased initially and then decreased.Key words : pvidone-iodine；eatalase；superoxide dismutase；glutathione S-transferas

6、e前言目前在水产养殖中通过增大放养量以获得高产和高效益是许多渔民所普遍采用的方式之一。由于放养密度大、投饲量大，养殖水体中排泄物和残饵的积累使水质极易恶化，从而诱发各种鱼病，因此高效、低毒、无公害药物的筛选和应用日益受到人们的重视1。聚维酮碘的化学名称为1-乙烯基-2-吡咯烷酮均聚物与碘的复合物，是以聚乙烯吡咯烷酮( PVP) 为载体的高分子化合物，溶于水后缓慢释放出碘。聚维酮碘的杀菌活性是有表面活性剂PVP提供对菌膜的亲和力，解聚后释放出所载有的碘与细胞膜和细胞质结合，使硫基化合物、肽、蛋白质、酶、脂质氧化或卤化，使病原体的蛋白质和酶的稳定性和活性被破坏，代谢机制发生障碍而死亡，从而达到杀灭

7、病原体的目的2。研究业已表明，以非离子表面活性剂为载体杀菌效果最好3。聚维酮碘是碘元素与聚乙烯吡咯烷硐(简称PVP)以络合形式借助氢键和其他引力络合形成的络合物4，PVP - I成品为黄棕色至红棕色的无定形粉末，易吸潮成软块状，其有效碘含量可高达质量20% ，在水或乙醇中可以任何比例溶解，溶液为棕褐色，皮肤消毒使用浓度溶液为棕红色澄明液体5、均匀、不分层、无沉淀。聚维酮碘具有极强的杀菌力和广泛的杀菌范围；低浓度效果好，成本低；稳定性好，作用持久，不易升华；无刺激性，毒性低；黄染易洗去等特点6。碘伏类消毒液已被广泛应用于外科手术人员手消毒、注射和穿刺部位皮肤消毒以及黏膜和创面消毒。鱼类对水环境的

8、变化十分敏感，当水体中有毒物质达到一定质量浓度时，就会引起一系列中毒反应，因而被广泛用于毒物和废水的生物监测、评价，进而据此进行质量标准和排放标准的制定以及工业废水的管理等。关于碘伏类消毒液消毒性能研究报告较多710，并有一些对于虾类、贝类的毒性试验报道11,12 ，但对鱼类苗种的毒性研究较少。本实验以常见的草鱼为研究对象，探讨( PVP - I)对草鱼苗的毒性效应，旨在为生产上鱼苗培育期间科学使用该药物提供参考。1 材料和方法1.1 试验鱼草鱼(体长4.0±0.5cm)淮南渔场购买，试验前在室内水族箱中暂养3天，进行正常投喂配合饲料，然后随机挑选体健无病规格基本一致的个体作为受试对

9、象，试验期间均不投喂。1.2 试验药品试验药品 “聚维酮碘”为市售渔药公司产品，标识有效碘含量为1，实测值为0.94（以下试验除特别说明，均是指有效碘的浓度）。1.3 试验条件试验在容积为1.5L的玻璃鱼缸中进行。试验水pH78，试验期间水温变化范围为23.525，持续充氧。1.4 试验液的配制用充分曝气的自来水将两种碘液分别配制成试验所需浓度，每缸试验液总量均为1.5L。中国国家环保局于1980年制订的生物监测技术规范(水环境部分)将化学物质对鱼类的毒性分级标准分为5个等级13，将96h内LC50小于1mg/L的化学物质的毒性定为剧毒，1100mg/L定为高毒，1001000mg/L定为中等

10、毒性，10001000omg/L定为低毒，大于10000mg/L定为微毒(无毒)。首先进行预备试验，确定试验液浓度的大致范围，然后根据这个范围，参照动物毒理学计算出两种碘液5个浓度梯度组和1个对照组，同时每一浓度均两个平行对照组。1.5 试验方法 急性毒性试验随机放入10尾受试鱼，每24h换试验液1次，及时剔除死亡个体，鱼的死亡以镊子夹起后身体完全不动，用大量清水冲洗后，再放人清水中，5min后仍不动为准。试验开始后，前8h作连续观察，然后作24h、48h和96h试验鱼的存活记录，同时观察记录中毒症状及死亡症状。半致死浓度计算方法：利用寇氏法(Karber法)计算半致死浓度(LC50)，公式：

11、logLC50=1/2 ×（Xi+Xi+1）(P i+1-Pi).式中：Xi与Xi+1及Pi+1与Pi分别为相邻两组的剂量对数以及动物死亡百分比。安全浓度按96hLC50×0.1求得。 酶活力试验根据急性毒性试验的结果，慢性试验浓度设置为1/10LC50（LC50为96h的半致死浓度）以及受试液对照组共2组，每组10尾鱼开始暴露前，试验鱼逐条测量体长、体重，各组之间试验鱼均无显著差异。实验采用静态换液法，每天更换1/2试液，每天清除排泄物1次。.1 蛋白量的测定在蛋白质含量分析中，最常见的方法是Lowry、双缩脲方法、染料结合和Bradford方法。但是Lowry方法在操作

12、过程中，易受K+、Mg 2+、EDTA、Tris、硫醇试剂和糖酶的干扰；而相对不敏感的双缩脲分析法会受到Tris缓冲液、氨离子和甘油的影响。即使对Lowry、双缩脲测定蛋白质的方法有所改进后，在操作过程中也会由于复杂的程序和时间的延迟而使结果受到干扰。本实验中蛋白质含量的测定选用Bradford方法，其原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合后，染料的最大吸收波长从465nm变为595nm，蛋白质一染料复合物具有很高的消光系数，因此蛋白质测定的灵敏度较高，最低检出量为1mg蛋白质。染料与蛋白质的结合，大约只需2分钟，结合物的颜色在1小时内是稳定的。具体操作步骤如下:(1)配制Bradford试剂:

13、称取100mg考马斯亮蓝G250溶于50ml 90%乙醇溶液中，加入85%（m/v）磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到I000ml。试剂的终浓度为0.01%考马斯亮蓝G250，4.7%（m/v)乙醇和8.5%（m/v）磷酸。用Whatman1号滤纸过滤，转入棕色瓶中于4保存。(2)蛋白质标准溶液: 以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白，称取100mg牛血清白蛋白，溶于磷酸缓冲液中，配制成1000 ug/ml标准BSA溶液。(3)考马斯亮蓝-蛋白质标准曲线的绘制：0100 ug/ml标准曲线的绘制，取6支洗净烘干待用的试管，按表2-1的数据配制0100 ug /ml牛血清白蛋白溶液各1ml。表2-

14、1标准蛋白质溶液Tab.2-1The standard Solution of Protein 管号 试剂 1234561000ug /ml牛血清蛋白溶液（ml） 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10蒸馏水（ml）1.000.980.960.940.920.90蛋白质浓度（ug/ml）020406080100准确吸取所配各管溶液0.lml，分别放入10ml具塞试管中，再加入5ml考马斯亮蓝G250蛋白试剂，盖塞振荡，充分混匀，放置2min后用10mm光径的比色杯在595nm下比色，做出标准曲线。依据上述方法，记录数据，得到蛋白质含量标准曲线如图2-1： 图2-1蛋白质含量标准曲

15、线Fig.2-1 The Standard Line of Protein测定：吸取样品提取液0.1ml放入具塞刻度试管中加入5ml考马斯亮蓝G250蛋白试剂，充分混合，放置2min后用10mm光径比色杯在595nm下比色，记录消光值，并通过标准曲线查得每毫升溶液中蛋白质含量，以蒸馏水作空白样。1.5.2.2 过氧化氢酶(CAT)活性的测定CAT是一种在自然界中广泛存在的酶，是生物体抗氧化防御系统中的重要组成部分。可以用丙酮一水混合溶剂从肝脏和红血球萃取到这种酶14。在食品工业上，CAT可以用来除去多余的过氧化氢。因而此酶可用于果汁保鲜等方面。在葡萄糖氧化酶和葡萄糖的混合体中它可以作为抗氧化剂

16、用于食品的保鲜15。每克血红蛋白中或每克组织蛋白中过氧化氢酶（CAT）每秒钟分解吸光度为0.500.55的底物中的过氧化氢相对量为一个过氧化氢酶的活力单位。CAT活力的计算公式为：CAT活力 = * 浓度与吸光度成正相关，OD1为240nm处的零时吸光度，OD2为240nm处1分钟时吸光度。* 2.303从自然对数换算成常用对数log时必须乘以2.303。* A为血红蛋白或组织蛋白的稀释倍数（包括样品测试前稀释倍数及取样量在反应中稀释倍数）。* B为样本中每毫升血红蛋白克数或者每毫升组织蛋白克数。.2.1 样本前处理、溶血液的制备取鱼的新鲜血液50ul加双蒸水至2.5ml混匀配成1：49溶血液

17、。、1%肝脏组织匀浆的制备 用组织匀浆机制备10%肝组织匀浆，再取部分10%肝组织匀浆，用生理盐水按1：9稀释制备成1%肝组织匀浆。.2.2 试验操作取经过前处理的样本0.02ml加入比色皿底部，将已预温至25，OD在0.50.55之间的底物溶液3ml直接用5ml或10ml的移液管快速冲入比色皿中，240nm处立即测定吸光度，记下OD1值，比色皿不要取出，1分钟时立即再测一次吸光度，记下OD2值。.3 谷胱甘肽硫转移酶（GST）活性的测定谷胱甘肽硫转移酶(GST)是一组具有解毒和结合蛋白功能的同工酶，按其等电点的不同分为碱性(a)中性(u)和酸性(e)三类。红细胞需要大量的还原型谷胱甘肽，一方

18、面红细胞与还原型谷胱甘肽共用SH基团来维持其蛋白质结构的完整性；另一方面用于保护脂膜防止被过氧化物、过氧化氢等氧化；再一方面是维持红细胞内血红素的铁原子处于二价；因含有三价氧的高铁血红蛋白(methemoglobin)没有运输氧的功能。谷胱甘肽硫转移酶可以促进一SH基团与氧化型谷胱甘肽结合，保持还原型谷胱甘肽的浓度。谷胱甘肽 + 1-氯-2,4-二硝基苯 谷胱甘肽二硝基苯复合物 盐酸（GSH + C6H3（NO2）2CL） C6H3(NO2)2GS + H+ + CL-GST具有催化还原型谷胱甘肽(GSH)与1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB复合物)结合的能力，在一定反应时间内，其活性高低与反

19、应前后底物浓度的变化呈直线关系。本实验通过检测GSH浓度的高低来反应GST活力的大小，GSH(底物)浓度降低越多则GST活力越大。1.5.2.3.1 试剂组成与配制本实验的试剂由南京建成科技有限公司提供。.3.2 样品前处理 50倍稀释液的溶血液的配制：取肝素抗凝全血20ul，以蒸馏水稀释至1ml，混匀，放置5分钟进行测定。配制号的溶血液要在1小时内测定，否则影响酶的活力；抗凝全血若当天来不及测定可放冰箱4保存，23天内酶活力变化不大。肝组织匀浆血清或血浆可直接取样.3.3 血浆(清)的测定.3.3.1 酶促反应与显色反应测定管(酶管)对照管（非酶管）基质液（ml）0.30.3血清（浆）(ml

20、)0.1-混匀，37水浴30分钟试剂二（ml）22血清（浆）(ml)-0.1混匀，35004000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。空白管标准管对照管（非酶管）测定管(酶管)GSH标准溶剂应用液（ml）2-20umol/lGSH标准液（ml）-2-上清液（ml）-22试剂三（ml）2222试剂四（ml）0.50.50.50.5混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。.3.3.2 定义与计算公式（1）定义：规定每毫升血清（浆）在37反应1分钟，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓度降低1U mol/L为一个活力单位（2）计算公式： * 从操作表中可看出反应液0.

21、4ml（0.3ml基质液+0.1ml样本）加试剂二2ml共稀释6倍（对照管OD值测定管OD值）×A*×6÷0.1÷30* * 本实验室A值为161.11.3.4 肝脏组织匀浆的测定.3.4.1 酶促反应与显色反应测定管(酶管)对照管（非酶管）基质液（ml）0.30.3待测组织匀浆(ml)0.1-混匀，37水浴10分钟（准确计时）试剂二（ml）11无水乙醇（ml）11待测组织匀浆(ml)-0.1混匀，35004000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。空白管标准管对照管（非酶管）测定管(酶管)GSH标准溶剂应用液（ml）2-20umol/lGSH标准

22、液（ml）-2-上清液（ml）-22试剂三（ml）2222试剂四（ml）0.50.50.50.5混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。.3.4.2 定义与计算公式（1）定义：规定每毫升血清（浆）在37反应1分钟，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓度降低1U mol/l为一个活力单位（2）计算公式.3.5 50倍稀释的溶血液的测定.3.5.1 酶促反应与显色反应测定管(酶管)对照管（非酶管）基质液（ml）0.30.3样品(ml)0.1-混匀，37水浴30分钟试剂二（ml）22样品(ml)-0.1混匀，35004000转/分，离心10分钟，取上清液作显色反应。空白管标

23、准管对照管（非酶管）测定管(酶管)GSH标准溶剂应用液（ml）2-20umol/lGSH标准液（ml）-2-上清液（ml）-22试剂三（ml）2222试剂四（ml）0.50.50.50.5混匀，室温放置15分钟，1cm光径，蒸馏水调零，412nm处比色。.3.5.2 定义与计算公式（1）定义：全血GST活力单位，规定每毫升血清（浆）在37反应1分钟，扣除非酶促反应，使反应体系中GSH浓度降低1Umol/l为一个活力单位（2）计算公式 .4 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定超氧化物歧化酶(SOD)是一种特殊的金属酶，它能催化超氧阴离子自由基(O2·)发生歧化反应，从而清除O2

24、3;自由基，是生物体重要的细胞防御系统之一。众多医学研究指出，SOD具有防御氧毒、搞辐射、防衰老以及防治肿瘤和抗炎等药用功效16，17，按其金属辅基成分不同分为三类：含Cu和Zn(简称CuZnSOD)，主要存在于真核细胞的胞浆中；含Mn(MnSOD)，存在于真核细胞的线粒体及真核细胞内；含Fe(FeSOD)，存在于真核细胞内。这三类SOD都能催化O2-发生歧化反应： 2O2·+2H+ SOD H2O+O2由于SOD能清除细胞内的O2·，所以在防御氧毒性中起着重要的作用，是活性氧防御系统的主要成分之一。测定SOD活性的方法很多，一般可分为直接测定法和间接测定法二大类18。直接

25、测定法包括脉冲辐射技术、截流光谱法、电子顺磁共振(ESR)法及极谱法等。但直接测定法大都需用较特殊的仪器或试剂，所以常采用较简便的间接法测SOD活性。目前，国内应用的SOD间接测活方法很多，本实验超氧阴离子自由基（O2·），氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测吸光度。当被测样品中含SOD时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品的SOD活力。（1）血清中SOD活力的测定 每毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力（U）计算公式：（2

26、）肝组织匀浆中SOD活力测定每毫克组织蛋白在1毫升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力(U)2 试验结果2.1 急性毒性试验草鱼在不同浓度的聚维酮碘溶液中呈现明显的中毒症状：在高浓度时，草鱼很快就表现出异常反应，用药后2h左右，其游泳的平衡能力明显受到影响，局促不安，剧烈游动，上下游动，侧游，打转时而上下窜动，时而急游，时而紧贴缸壁；而后，运动速度逐渐减慢，反应迟钝，逐渐丧失运动能力，最后死亡；低浓度组实验鱼出现中毒症状的时间较迟，鱼则较为安静，仅沿盆底缓缓游动，无较大的应激反应，一旦中毒，也呈现出同样的中毒症状，这与其他学者观察到的聚维酮碘对鱼类的急性中毒症状相似1

27、9。表1 聚维酮碘对草鱼的急性毒性药 物浓度（mg/L）死亡率（）96h半致死浓度（mg/L）安全浓度（mg/L）24h48h96h聚维酮碘10.0783100.0100.0100.02.0600.206020.068777.587.597.530.060370.080.092.540.052840.060.070.050.046307.50对照组00010注：药物的浓度以两种产品中10%的碘。聚维酮碘对草鱼鱼苗的24 h 、48 h 和96 h 的半致死浓度LC50分别为21.11mg/ L 、20.68mg/ L 、20.60mg/ L。本试验与黄辨非等1报道的聚维酮碘对异育银鲫鱼苗96h

28、 半致死浓度为21.38mg/L的数据较接近。2.2 酶活力试验 CAT活性测定结果在浓度为l/10LC50下，分别于不同暴露时间(5h、ld、3d)的情况下取样，测其肝脏和血液的CAT的活性，染毒后样品均以同期的对照组样品作为对照。实验结果如下：不同聚维酮碘暴露时间对草鱼CAT活性的影响图2-1不同聚维酮碘暴露时间对草鱼血液CAT活性的影响图2-2 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼肝脏CAT活性的影响由图2-1、2-2可以看出，CAT的活性是随着PVP-I暴露时间的延长而有显著变化的，图2-1、2-2的变化趋势是随着暴露时间的延长，CAT活性先受到诱导后被抑制。2.2.2 GST活性测定结果在浓度

29、为l/10LC50下，分别于不同暴露时间(5h、ld、3d)的情况下取样，测其肝脏和血液的GST的活性，染毒后样品均以同期的对照组样品作为对照。实验结果如下：不同聚维酮碘暴露时间对草鱼GST活性的影响图2-3 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼血液GST活性的影响图2-4 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼肝脏GST活性的影响图2-5 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼50倍稀释的溶血液GST活性的影响由图2-3、2-4、2-5可以看出，GST的活性同样是随着PVP-I暴露时间的延长而有显著变化的，在图2-3、2-4、2-5中变化趋势是随着暴露时间的延长，GST活性先受到诱导后被抑制。 SOD活性测定结果在浓度为l/

30、10LC50下，分别于不同暴露时间(5h、ld、3d)的情况下取样，测其肝脏和血液的CAT的活性，染毒后样品均以同期的对照组样品作为对照。实验结果如下：不同聚维酮碘暴露时间对草鱼SOD活性的影响 图2-5 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼血液SOD活性的影响Fig.2-5 The Effect of Different PVP-I Exposure Times on SOD ActivitiesIn the Blood of Grass Carp图2-6 不同聚维酮碘暴露时间对草鱼肝脏SOD活性的影响Fig.2-6 The Effect of Different PVP-I Exposure Tim

31、es on SOD ActivitiesIn the Liver of Grass Carp由图2-5、2-6可以看出，SOD的活性同样是随着PVP-I暴露时间的延长而有显著变化的，表现的变化趋势是随着暴露时间的延长，SOD活性先受到诱导后被抑制。3 讨论与小结 (1)急性毒性试验中，由于操作过于激烈，造成鱼苗的鱼鳞轻度脱落，影响鱼苗的存活率；还有在培养过程中，由于事先没有防护措施，鱼苗从鱼缸中跳出致死，造成对照组出现死亡率的现象。(2)通过比较肝脏、血液中不同暴露时间酶活性的变化趋势，我们可以看出肝脏中的CAT活性早期首先被抑制，呈现中毒现象，反映出在肝脏体内H2O2过量的累积并且损伤了细胞

32、，同时也说明相比之下肝脏在污染物暴露中最先受到损伤，随着暴露时间延长，肝脏中的CAT活性呈现诱导现象，这说明有大量的CAT来清除肝脏中过量的H2O2来保护肝脏细胞免受氧化损伤。(3)碘及其复合物对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、结核杆菌、真菌和病毒具有广谱抗菌作用，其作用机理是碘元素可直接卤化菌体蛋白质，使蛋白质变性，同时具有穿透氧化细胞壁的作用，其产生的游离碘可以替代微生物的内容物，从而导致微生物的死亡20。碘溶液中的有效碘含量是指游离碘的浓度，它是主要的杀菌因子。并且随着溶液的稀释，游离碘的含量会有一定程度的增加21。草鱼就是一种常用毒性实验材料14 M acek和S leight、McKin

33、22，23发现胚胎和幼鱼是鱼类最敏感的生活阶段。(4) 碘伏是碘与表面活性剂为载体形成的稳定的络合物，根据载体的不同，碘伏可分为许多种类，其中尤以聚维酮碘和聚醇醚碘应用最广泛。聚维酮碘无毒、无刺激、稳定性强、不致敏，是卫生部唯一进入国家药典的食碘消毒药，而聚醇醚碘有一定的刺激性和过敏反应。因此聚维酮碘在医院和日常生活中使用的比较广泛21。(5) 目前，全球每年至少有50%的抗生素是用于畜牧业和水产养殖业24。抗生素能在不同程度上起到抗菌、杀菌和抑菌作用，其作用机理主要包括：通过抑制细菌细胞壁的形成，使细菌因丧失细胞壁保护而死亡；影响胞浆膜通透性，使细菌屏障和运输物质功能受到障碍；影响蛋白质合成

34、，使细菌生长受到抑制；影响核酸代谢，使细菌生长分裂受到抑制等等。四环素类是由链霉菌产生的一类广谱抗生素，在化学结构上都属于多环并四苯羧基酰胺母核的衍生物，四环素类药物是临床上使用最多、最广泛的一类抗生素25。由于具有水溶性较好、体内代谢后大部分以原形排出以及在环境中不易发生生物降解等特点，从而成为容易在水环境中储存和蓄积的一类抗生素。同时，由于该类药物抗菌谱较广，可以预测其所产生的生态毒理效应是巨大的。抗生素主要是针对人或其他高等动物体内的微生物起杀灭或抑制作用的一类化学物质。环境中的抗生素残留并不对所有环境微生物都具有作用26。(6) SOD、CAT和GST是生物体中协同发挥保护作用的3种重

35、要的抗氧化酶27。CAT能清除细胞中形成的H2O2，生成氧气和水，从而防止氧自由基对机体中生物大分子(DNA、蛋白质等)的氧化损伤，CAT存在于动物的各种主要器官中，特别是肝脏和红细胞中最多。SOD是一种金属酶，能清除细胞内的O2·，自1969年McCond和Fridovich报道SOD学特性以来，以SOD为中心的生物活性氧代谢研究进展很快，迄今为止，已形成了生物活性氧伤害学说。SOD的主要作用是将超氧阴离子自由基通过歧化反应生成过氧化氢和氧分子，清除体内过多的自由基，保持体内自由基的代谢平衡，从而减轻自由基对不饱和脂肪酸的过氧化作用，保持细胞正常的代谢不受破坏。GST是一组具有解毒

36、和结合蛋白功能的同工酶，能保护脂膜防止被过氧化物、过氧化氢等氧化，维持红细胞内血红素的铁原子处于二价，GST可以促进SH基团与氧化型谷胱甘肽结合，保持还原型谷胱甘肽的浓度，因此GST也是抗氧化防御系统的重要组成部分之一。由前面的实验结果可以得出以下几条结论:(1) 由PVP-I暴露下草鱼的CAT活性测定结果可以看出，相同浓度不同暴露时间下CAT活性总体变化是先增后减的趋势，相同暴露时间不同浓度下CAT活性总体变化也是先增后减的趋势，也就是说，CAT活性随着暴露时间的延长和暴露浓度的增加呈现先被诱导后被抑制的整体变化趋势。(2)由PVP-I暴露下草鱼的SOD活性测定结果可以看出，在相同浓度不同暴

37、露时间下，SOD总体趋势是先被诱导后被抑制。(3)由PVP-I暴露下草鱼的GST活性测定结果可以看出，在相同浓度不同暴露时间下，GST总体趋势是先被诱导后被抑制，与SOD的现象相同。(4)CAT、SOD和GST都是生物体内抗氧化防御系统中的重要组成部分，其活性被诱导或是被抑制，可以间接反映出生物体内抗氧化防御系统的状况，表征生物体受氧化作用的程度大小。当酶活性升高时，表明生物体内自身防御系统在积极地清除过量的活性氧自由基保护生物细胞免受氧化损伤；当酶活性降低时，表明生物体内清除活性氧能力可能饱和，或是体内细胞已受到损伤。因此我们可以根据体内这些生化指标的水平高低来间接的了解鱼体内器官受作用程度

38、或是受氧化胁迫的情况。因此，聚维酮碘在一定浓度范围内，对草鱼体内CAT、GST、SOD活性的影响是先诱导后抑制。致谢经过几个月的实验研究工作，这篇论文最终定稿。在此首先感谢我的指导老师王春花老师，论文从选题，撰写，修改，到定稿，她都付出了大量的时间和精力。王老师对我的论文逐字逐句地进行审阅，并提出了具体的修改意见。我从她详细的评论中受益匪浅。王老师具有深厚的理论修养，严谨的治学态度，诚恳的待人方式，永远是我为人为学的典范。在此特别向王老师表示我最崇高的敬意和诚挚的谢意！同时对授予我专业知识的各位老师和在本实验中协助我工作的各位同学表示衷心的感谢！由于该论文涉及的问题较为复杂，加之本人学识较浅，

39、文中的缺点和错误在所难免，恳请各位专家不吝批评指正。参考文献1 黄辨非，阮国良，缪有玲2种碘制剂对异育银鲫鱼苗的急性毒性试验J 长江大学学报(自然科学版)，2005，11(4)：60-632 淘醄，管琼新型消毒剂聚维酮碘渔业致富指南2005，(19)：63 张海生，于晋建，李成建聚维酮碘的不良反应J 医药导报2002，21(5)：156-1574 中华人民共和国药典委员会中华人民共和国药典M 北京：化学工业出版社，2000：9975 杨华明，易滨现代医院消毒学M 北京：人民军医出版社，2002：110-1166 周燕，何效平高效杀菌剂聚维酮碘，Journal of Occupational H

40、ealth and Damage2004，19(2)：1447 赵厚均水产养殖业中应用的几种新型消毒剂J 科技信息，2000 ，(8)：45-468 蓝洪碘伏类消毒剂的研究现状J 中国动物保健，2004 ，(6)：43-449 Satyanarayan S ,Bejankiwar R S. Impact of some chlorinated pesticides on t he haematology of t he Cy p rinus carpio and Punt ius tictoJ .Journal of Environmental Sciences, 2004 ,(4) :631-63410 周建标 聚维酮碘在消毒和抗感染中的应用J . 药学实践杂志，1999 ，17 (5) ：271-27311 桂英爱，王洪军 碘伏对皱纹盘鲍的急性毒性试验J . 水产科学,2002 , (21) :22-23.12 李天保，赵增元 聚乙烯吡咯酮碘对中国对虾的毒性试验J .海洋科学,1998,(6):9-10.13 卢玲，沈英娃酚类、烷基苯类、硝