琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程

1、琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1. 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5ug

2、的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。琼脂糖加样时候注意事项：1 、 用移液抢将样品加至点样孔

3、。每孔点样的体积一般少于25ul，因此吸取每一个样品时，操作要稳当且细心。2 、常加一定量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。3 、在样品中加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝），用以看出样品移动的距离。4 、在一个或几个孔中加入标准分子质量样品，电泳结束后，根据已知分子质量的带的相应位置可用来做出标准曲线。5 、电泳一般是在追踪染料泳动到胶的80%部位时停止。注意电泳期间，电泳槽盖要安全盖好，以防止液体蒸发，又可以降低电击的可能性。6、电泳结束后，将胶浸没在1mg/L的澳化乙锭（EB）中，5min后即可看到DNA带，EB通过插入在双螺旋的配对核苷酸之间同NDA吉合。另一

4、种方法是电泳时，在胶中加入EBo7 、在紫外灯下，由于EB发出强烈的橘红色的荧光，所以可以看到DNA带。利用这种方法检测的界限是每条带约10ngDNAo带上塑料安全眼镜可防止紫外光对眼睛的伤害。可用尺子来测量每条带至点样孔的距离。同样，禾U用特制的照相机和调焦器，也可以对凝胶拍照。8 、如果要对某一条带（如质粒）进一步分析，可用小刀将含该带的凝胶切割下来，从带中回收DNA。琼脂糖核酸电泳实验操作流程1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般2. 根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝

5、胶：准确称量琼脂糖干2030ml）；3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；4. 室温下3045分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；6. 在DNA羊品中加入10X体积的载样缓冲液（loadingbuffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；7. 接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA羊品由负极往正极泳动（靠近加样孔的一端为负）。一般60?100V电压，电泳20?40min即可；8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；9. 电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围琼脂糖凝胶浓度线形DNA的最佳分辨范围（b