高效液相色谱法测定维生素C注射液含量(精)

1、·药品鉴定 ·2011年 9月第 8卷第 27期高效液相色谱法测定维生素C 注射液含量刘国如，刘永锁，陈振玲，王伟，丰廷宗，周毓瑾中国民用航空局民用航空医学中心（民航总医院），北京100023摘要 目的：建立高效液相色谱法测定维生素C 注射液中维生素C 含量的方法。方法：采用 Phenomenexluna-NH2分析色谱柱（ 4.6mm×250mm，5m），流动相为磷酸二氢钾缓冲液 -乙腈（ 11，磷酸调至 pH3.0）；流速： 1.0ml/min ；检测波长： 245nm。结果：维生素 C 的线性回归方程为 Y=29560X-21310（r=0.9995），线性

2、范围为 5 30g/ml，平均回收率为 98.30%（ n=9，RSD 为 2.1%）。结论：该方法操作简便，结果准确，可用于测定维生素 C 注射液中维生素 C 的含量。关键词 高效液相色谱法；维生素C 注射液；维生素C；含量测定 中图分类号R917 文献标识码 A 文章编号 1673-7210（ 2011） 09（c）-050-02DeterminationofVitaminCInjectionbyHPLCLIUGuoru,LIUYongsuo,CHENZhenling,WANGWei,FENGTingzong,ZHOUYujinCivilAviationMedicineCentre(Civ

3、ilAviationGeneralHospital),CAAC,Beijing100023,ChinaAbstractObjective:TodevelopaquantitativemethodforthedeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.Methods:Phenomenexluna-NH2column(4.6mm× 250mm,5m)wasusedaschromatographiccolumn,amixtureofacetonitrileanddibasicpotassiumphosphatebuffersolution(11,v

4、/v)wasusedasmobilephase,whichwasadjustedtopH3.0byphosphoricacid,andthedetectionwavelengthwasat245nmwithaflowrateof1.0ml/min.Results:TheregressionequationwasY=29560X-21310(r=0.9995),whichwaslinearoverarangefrom5 g/mlto30 g/ml.Theaveragerecoverywas98.30%(n=9,RSD=2.1%).Conclusion:Thismethodissensitive,

5、rapidandaccurate,whichiscanbeusedfordeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.KeywordsHPLC;VitaminCInjection;VitaminC;Determination维生素 C 在临床上不仅用于心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗，而且在眼科、口腔科和外科系统疾病的药物治疗中也十分常用 1 。维生素 C 注射液的 pH 偏酸性，且具有较强的还原性，在某些条件下氧化型结构和还原型结构可以互变，但是它们均有生物活性，氧化剂、光及金属离子等，均可加速其失效 2 。因此，加入抗氧化剂、温度为 25、 pH

6、为 5.66.0 时，维生素 C 注射液在此条件下最为稳定 3 。维生素 C 注射剂含量的测定方法有很多，例如，滴定分析法4 、分光光度法 5 、荧光法 6 、电极法 7 等，常见的滴定法存在滴定终点难以准确判断，分光光度法操作耗时。因此，本研究以维生素 C 注射液为研究对象，建立维生素 C 含量测定的高效液相色谱法。1 仪器与试剂度99.5%）；去离子水（由超纯水仪 Millipore 纯水系统制备）。其余试剂均为色谱纯。2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱为 Phenomenexluna氨基柱（ 4.6mm×250mm， 5m）；流动相为磷酸二氢钾液和乙腈的混合液（体积比 11

7、），浓度为 0.02mol/L，pH 由磷酸调至 3.0；柱温为 25；系统流速为 1.0ml/min ；检测波长为 245nm。2.2 标准曲线的制备精密称取 0.10g 维生素 C 对照品，用流动相溶液溶解并定容至 100ml ，得 1mg/ml的储备液，避光保存。稀释储备液得浓度分别为 5、 10、15、 20、25、30g/ml的溶液，用 0.45 m滤膜过滤，进行 HPLC 色谱分析。以维生素 C 对照品峰面积（Y ）对相应的浓度（ X ）进行线性回归，从而得到维生素 C 的标准曲线方程为： Y=29560X-21310（r=0.9995，n=6）。 2.3 精密度试验取维生素 C

8、标准曲线项下低（ 10g/ml）、中（ 20g/ml）、高（ 30g/ml）三种浓度，日内精密度分别连续进样 5 次；日间精密度分别于第 1、 3、 5 天测定，各进样 5 次。结果维生素 C 三种浓度的日内 RSD 分别为 0.17%、0.53%和 0.21%，日间1.1 仪器美国 Waters公司的高效液相色谱仪（附2998 光电二极管矩阵检测器）；瑞士梅特勒 -托利多酸度计（上海斯坦福生物科技发展有限公司）；德国赛多利斯 BT25S 十万分之一天平（上海台衡仪器仪器表有限公司）。 1.2 试剂 CDEZ-VIT-004N 维生素 C 对照品（美国；批号： 18976；规格： 1g/瓶）；

9、维生素 C 注射液（北京双鹤药业股份有限公司；批号： 1009301；规格：每支1.0g/5ml）；磷酸二氢钾（北京北化精细化学品有限责任公司；批号：20090810；分析纯，纯MEDICALRSD 分别为 2.98%、2.06%和 2.78%。2.4 回收率试验精密量称取已知含量的供试品溶液 0.5ml，共 9 份，分2011年 9月第 8卷第 27期·药品鉴定 ·的比值来计算加样回收率。结果其平均回收率为 98.30%， RSD 为 2.1%（n=9）。2.5 稳定性试验取维生素 C 对照品储备液，用流动相稀释成浓度为20.0 g/ml的溶液，分别在0.0、 0.5、

10、1.0、 1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、 6.0h 进样，记录色谱图。结果 0.03.5h，RSD 为 1.67%， 4h 后峰面积明显减小。 2.6 重复性试验取同一批号的样品 6 份，按含量测定的方法进行重复性试验，记录维生素 C 色谱峰面积。结果 RSD 为 2.3%。2.7 样品含量测定按“2.1项”下色谱条件，进样 3 个不同批次的样品含量，结果以标示量计， 3 批样品标示量含量分别为： 104.1%、100.1%、102.3%，均在 95.0% 105.0%之间。 3 讨论在 200 400nm 波长处扫描，维生素 C 在流动相中于 245nm 处有最大吸收，故把

11、检测波长定为 245nm。经稳定性试验测定，供试品溶液在实验温度（ 18 22）下置棕色量瓶中，分别于 0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、6.0h 测定含量，结果 0.03.5h，RSD 为 1.67%，4h 后峰面积明显减小。表明对照品溶液在3.5h 内稳定。由于维生素 C 见光不稳定，所以须避光操作，以提高该方法的准确性。与传统的滴定法、紫外分光光度法相比，该法操作简便、结果准确、专属性强，可用于维生素 C 含量的测定。参考文献 1 江明性 .新编实用药物学 M.2 版.北京:科学出版社 ,2005:536.2 陈新谦 ,金有豫 ,汤光 .新编药物学

12、M. 北京 :人民卫生出版社 ,2011:630.3郝志耘 ,夏惠娟 .维生素 C 稳定性实验研究 J.牡丹江医学院学报 ,1997,18 (1):13-15.4 库尔班江 ,赛丽曼 .碘量法测水果蔬菜中维生素 C 的含量 J. 伊犁师范学院学报 :自然科学版 ,2007,3:28-32.5 张捷莉 ,高雨 ,侯冬岩 .紫外分光光度法测定维多康中维生素 C 的含量J.食品科学 ,2004,25(11):235-237.6 童裳伦 ,项光宏 ,刘维屏 .间接荧光法测定维生素 CJ. 光谱学与光谱分析,2005,25(4):598-600.7 张秋灵 ,邹华 ,常文贵 .聚中性红修饰电极测定维生素

13、C 的方法研究 J.饮料工业 ,2007,72(11):33-36,40.（收稿日期： 2011-04-26）A ：维生素 C 对照品； B：维生素 C 注射液； C：维生素 C 注射液阴性样品图 1 维生素 C 对照品、注射液及阴性样品色谱图别加入维生素 C 低（ 10g/ml）、中（ 20g/ml）、高（ 30g/ml）三种浓度对照液0.5ml，每个浓度分别配制3 份。混合均匀后，按 “ 2.1项”下的色谱条件进行测定，通过测得量与加入量（上接第47 页）在诊断胃部早期癌中的作用越来越受到人们的重视，但由于其价格因素，限制了其在基层医院的应用，而醋酸亚甲蓝染色技术简便、花费少，能清晰显示病

14、变结构，镜下诊断符合率与窄带内镜相似，有极为广阔的应用前景。参考文献 1KudoS,TamuraS.DiagnosisofcolorectaltumorouslesionsbymagnifyingendoscopyJ.GastrictestEndosc,1996,44(1):8-14.2 佐野宁 ,掘松高博 ,片桐敦 ,等 .Narrowbandimaging(NBI)colonoscopy用大腸腫瘍微細血管診断学J消化器内視鏡 ,2005,17(1):2129-2138.3MachidaH,SanoY,HamamotoY,etal.Narrowbandimaginginthediagnosisofcolorectalmucosallesions:apilotstudyJ.Endoscopy,2004,36(12):1094-1098.4KuznetsovK,LambertR,ReyJF.Narrowbandimaging:potentialandlimitationsJ.Endoscopy,2006,38(6):76-81.5GonoK,ObiT,YamaguchiM,etal.AppearanceofenhancedtissuefeaturesinnarrowbandendoscopicimagingJ.JB