实验室常用溶液配制丁香通我的实验室采购专家

1、. 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine ）:溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。1mol/L精胺（Spermine）:溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L 乙酸胺（ ammonium acetate ）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜 过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA ）：力口 100mg的牛血清蛋白（组分 V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白）

2、 ，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。1mol/L二硫苏糖醇（DTT ）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20C。或转移100mg的 二硫苏糖醇至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（ potassium acetate ）：溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾（ KCl ）：溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到 100ml 。3mol/L 乙酸钠（ sodium aceta

3、te ）：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加 水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液（ 0.5mol/L ），混合后形成 EDTA 的三钠盐。或称取 186.1g 的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH （6.8-8.2 ）,然后用水定容至 100ml。 1mol/L HCl ：加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/m

4、l IPGT :溶解250mg的IPGT （异丙基硫代-3 -D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于 -20 C。 1mol/LMgCI2:溶解 20.3g MgCI2 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。分成小份并用铝箔 将装液管包裹或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K （ proteinase K ）:将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K完全溶解。 不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于 -20 C。10mg/mlR

5、nase （无 DNase ）（DNase free RNase ）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠 水溶液中（pH 5.0 ）。溶解后于水浴中煮沸 15min ,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5 ,于-20 C 贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCl）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N 氢氧化钠（ NaOH ）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中 （磁力搅拌器搅拌） ，氢氧化钠完全溶解后 用水定容至 1L。10 % SDS （十二烷基硫酸钠）：称取10

6、0gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶 解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）：溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为 100ml。100%三氯乙酸（ TCA ） :在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。 （稀释液 应在临用前配制）2.5 % X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚一3 -半乳糖苷）：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF ），用铝箔包 裹装液管，贮存于-20 C。100 x Denhardt 试剂（Denhardt ' s r

7、egent ）成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量2%聚蔗糖（ Ficoll ， 400 型） 2% 聚乙烯吡咯烷酮（ PVP-40 ） 2%BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮 液,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮 液,100mmol/L DTT:

8、1ml 1mol/L 贮 液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）：50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液，水：2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于 -20 C。100 mmol/L dNTP 溶液（ dNTP solutions ）可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少 6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10m

9、mol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml ，用磁力搅拌器搅拌溶解。20XSSC成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量300m

10、mol/L 柠檬酸三钠(二水)3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足 1L溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至 1L。DEPC (焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC 于100ml水中，使DEPC的体积分数为 0.1 %。在37 C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高压灭菌 20min ，以使残余的 DEPC 失活。 DEPC 会与胺起反应，不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺( deionized formamide )直接购买或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁

11、力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存(防止氧化)。磷酸缓冲液( phosphate buffer )按照下表所给定的体积，混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和 1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液，获得所需 pH 的 磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4 -H2O )贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷 酸氢二钠( Na2HPO4 )贮液 :溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠( ml) 1mol/L 磷酸氢二钠( ml) 最终

12、 pH 值877850815775735685625565510450390330280 123150185225265315375435490550610670720 6.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE (用于悬浮和贮存 DNA )成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCI ( pH7.4-8.0 , 25 C)200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )98.8mlTris 缓冲液( Tris-HCl buffer )将

13、121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH (25C下)加一定量的浓盐酸(11.6N ),用水调整终体积至 1L。浓盐酸的体积( ml) pH8.61428.5 3846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 x Tris-乙酸（TAE ）缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml 的冰乙酸（ 17.4 mol/L ）200ml 的0.5 mol/L EDTA （pH 8.0）补足

14、1L5 x Tris-硼酸(TBE )缓冲液成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )补足 1L染料1溴酚蓝( bromophenol blue )加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF (xylene cyanole FF )溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中，定容到 100ml 。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide )小心称取

15、1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4 C贮存。凝胶上样液( gel loading solutions )6 x碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18 聚蔗糖（ 400 型）0.15 溴甲酚绿0.25 二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.8g15mg25mg补足到 10ml 6 x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15 溴酚蓝0.

16、15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA15 聚蔗糖（ 400 型）水 1.5ml 1 溴酚蓝1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）1.5g 补足到 10ml6 x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.25 溴酚蓝0.25 二甲苯青 FF15 聚蔗糖（ 400 型）水 2.5ml 1 溴酚蓝2.5ml 1 二甲苯青 FF1.5g补足到 10ml 6 x甘油凝胶上样液（4 C贮存） 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15 溴酚蓝0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L

17、EDTA50甘油水 1.5ml 1 溴酚蓝1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）3ml3.9ml 6 x蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量0.15 溴酚蓝0.15 二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40 聚蔗糖水 1.5ml 1 溴酚蓝1.5ml 1 二甲苯青 FF100ul 0.5mol/L EDTA （ pH8.0 ）4g补足到 10ml10 x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.2溴酚蓝0.2 二甲苯青 FF200 mmol/L EDTA0

18、.1 SDS50甘油水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）100ul 10 SDS5ml补足到 10ml三 .常用培养基I D拉美苴LB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。SOB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 5g氯化钠 0.5g1 mol/L 氯化钾 2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在

19、每 100ml的小份中加1ml灭过菌 的 1mol/L 氯化镁。SOC 培养基成分、方法同 SOB 培养基的配制， 只是在培养基冷却到室温后， 除了在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖（ 18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml ，用 0.22um 的滤膜 过滤除菌)。TO拉差苴TB 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中： 蛋白胨 12g酵母提取物 24g甘油 4ml各组分溶解后高压灭菌。 冷却到60 C,再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液(

20、2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中，使终体积为 100ml 。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌) 。2 X YT培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 16g酵母提取物 10g氯化钠 4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L 。YPD 培养基将下列组分溶解在 0.9L 水中：蛋白胨 20g酵母提取物 10g葡萄糖 20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。 建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g 色氨酸，因为YP

21、D 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g 琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素( ampicillin )( 100mg/ml )溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素( carbenicillin )( 50mg/ml )溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林( methicillin )( 100mg/ml )溶解1g甲氧西林钠于足量

22、的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。卡那霉素( kanamycin )( 10mg/ml )溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。氯霉素( chloramphenicol )( 25mg/ml )溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。链霉素( streptomycin )( 50mg

23、/ml )溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。萘啶酮酸( nalidixic acid )( 5mg/ml )溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。四环素( tetracyyline )( 10mg/ml )溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中， 或者将无碱的四环素溶于无水乙醇， 定容至 10ml 。分装成小份用铝箔包 裹装液管以免溶液见光，于 -20 C贮存。常以10ug/ml50u

24、g/ml的终浓度添加于生长培养基。几种溶液的配制方法1 、 PBS:取 ZLI-9061 PBS 溶于 1000ml 的蒸馏水中， 混匀， 测 pH 值应在 7.27.4 之间， 若偏离此范围， 请用 0.1N 的 HCL 或 NaOH 调整。2、TBS：2.1 Tris 缓冲液配方： (0.5 M pH7.6 )Tris (三羟甲基氨基甲烷)60.57g1N HCL约 420ml双蒸水加至 1000mlTris 缓冲液配制方法：先以少量双蒸水(300500ml )溶解Tris，加入HCI后，用HCI ( 1N )或NaOH( 1N )将pH调至7.6 , 最后双蒸水加至1000ml。此液为储

25、备液，4C冰箱中保存。2.2 TBS 配方：Tris-HCI 缓冲液( 0.5MNaCI双蒸水pH7.6 )100ml8.59g (0.15mol/L)加至 1000mlTBS 配制方法：先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer )：3.1 储存液：A. 0.1M 枸橼酸溶液：称取 21.01g枸橼酸(C6H8O7H20)溶于1000ml蒸馏水中。B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7 2H20)溶于1000ml蒸馏水中。3.2 工作液：取 9ml A 液和

26、 41ml B 液加入 450ml 蒸馏水中，溶液 pH 值应为 6.0 0.14、胰酶( Trypsin )：4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液：常用浓度为 0.125% ，即使用前将一滴试剂 1胰酶溶液和三滴试剂 2胰酶稀释液均匀混合( 1:3稀释)，则可 直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%(1:10 稀释)至0.25%(1:1 稀释)。4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶：取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05% 或 0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。5、胃酶( Pepsin )：4%胃蛋

27、白酶，用0.1mol/L HCL 配制。(我公司备有 ZLI-9013 胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购)6、DAB：6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit ：使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得 1ml DAB工作液，简单易用。6.1 ZLI-9030 DAB ：6mgDAB溶于10mlTBS (0.05MpH7.6 ),再加入 0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物，即可。7、AEC：4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液 （pH5.2）,然后加入0.15ml 3%H 2O2

28、,过滤掉沉淀物。8 RIPA:1 x PBS, 1%NP 40 , 0.5 sodium deoxycholate , 0.1% SDS （此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入 RIPA中。8.1 10mg/ml PMSF 异丙醇溶液（用量为 10 l/ml ）8.2 Aprotinin （Sigma 产品，用量为 30 l/ml）8.3 1000mM sodium orthova nadate 冷冻液（用量为10 l/ml ）9、Blotto A :常规使用 1 x PBS, 5% milk , 0.05% Tween 20。10、Blotto B :与Phosphot

29、yrosine抗体共用，1 x PBS, 1% milk , 0.05% Tween 20。部分实验中 milk可完全去除，但可能引起背 景增高。实验室常用贮存液的配制参数一、核酸及蛋白质常用数据化合物 分子量 入max（pH7.0） 1摩尔溶液（pH7.0 ）中入max时的最大吸收值OD 28。/006。ATP507259154000.15CTP48327190000.97GTP523253137000.66UTP484262100000.38dATP494259152000.15dCTP46727193000.98dGTP507253137000.66dTTP48226796000.712

30、.常用核酸的长度与分子量核酸核苷酸数分子量入DNA48502 （双链环状）3.0 x 107pBR3224363 （双链）2.8 x 10628SrRNA480061.6 x 1023SrRNA370061.2 x 1018SrRNA190056.1 X 1019SrRNA17005.5 X 1055SrRNA12043.6 X 10tRNA （大肠杆菌）7542.5 X 103 常用核酸蛋白换算数据(1) 重量换算1 卩 g=10-6g1pg=10-12g1n g=10-9g1fg=10-15g(2) 分光光度换算：1A260 双链 DNA=5Qg/ml1A260 单链 DNA=3(0 g/

31、ml1A260 单链 RNA=4(0 g/ml(3) DNA摩尔换算：1g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端1g pBR322 DNA=0.36pmolIpmol 1000bp DNA=0.66(ig1pmol pBR322=2.8(ig1kb双链DNA(钠盐)=6.6 X 105道尔顿1kb单链DNA(钠盐)=3.3 X 105道尔顿1kb单链RNA(钠盐)=3.4 X 105道尔顿(4) 蛋白摩尔换算：100pmol分子量100, 000蛋白质=10进100pmol分子量50, 000蛋白质=5速100pmol分子量10, 000蛋白质=1速氨基酸的平均分子量=

32、126.7道尔顿(5) 蛋白质/DNA换算:1kb DNA=333个氨基酸编码容量=3.7 X 104MW蛋白质10, OOOMWf白质=270bp DNA30, OOOMWf白质=810bp DNA50, OOOMWf白质=1.35kb100, OOOMWf白质=2.7kb DNA4 常用蛋白质分子量标准参照物(1)咼分子量标准参照(2)中分子量标准参照(3)低分子量标准参照肌球蛋白分子量磷酸化酶B97, 400碳酸酐酶31, 00肌球蛋白212, 000牛血清白蛋白66, 200大豆睫蛋白酶21, 5003-半乳糖甘酶B116, 000谷氨酶脱氢酶55, 000抑制剂磷酸化酶B97, 40

33、0卵白蛋白42, 700马心肌球蛋白16, 900牛血清白蛋白66, 200醛缩酶40, 000溶菌酶14, 400过氧化氢酶'57, 000碳酸酐酶31, 000肌球蛋白(F1)8, 100醛缩酶40, 000大豆睫蛋白酶21, 500肌球蛋白(F2)6, 200抑制剂肌球蛋白(F3)2, 500溶菌酶14, 4005 常用DNA分子量标准参照物入 DNA/Hind川入 DNA/EcoR入 /Hind 川 +EcoFQpBR322/Haen2313021226212275871239416742151484051046557580449735048943615643426845880

34、2322484335304346420273530202726757564190423451125158421321137519218974184118311247564125续上表pBR322/Hinf IOx 174/Hinf IOx 174/Hae 川Ox 174/T ap I16317261401353291451771311810781175506553100872404396500826033273444176631023129841348281141221311422718722024940234541542002419433751511182072二、常用缓冲液1分子克隆常用缓

35、冲液2 磷酸缓冲液(1) 25C下O.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制1mol/L KH 2PQ(ml)pH1mol/L K 2HPO(ml)5.88.591.56.013.286.86.219.280.86.427.872.26.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.47.890.89.28.094.06.2(2) 25C下O.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制pH1mol/L Na 2HPO(ml)1mol/L NaH 2PQ(ml)5.87.992.16.012.088.06.217.882.26.425.

36、574.56.635.264.86.846.353.77.057.742.37.268.431.67.477.422.67.684.515.57.889.610.48.093.26.8探：用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：pH=pK +1g(质子受体/质子供体)在此，pK' =6.86(25 C)。3. 电泳缓冲液测序凝胶加样缓冲液98泌离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，

37、一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与 Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70C。常用的电泳缓冲液缓冲液使用液浓贮存液(每升)Tris-乙酸(TAE1 x： 0.04mol/L Tris- 乙酸50 x： 242g Tris 碱0.001mol/L EDTA57.1ml冰乙酸100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-磷酸(TPE1 x :0.09mol/L Tris-磷酸10x :10g Tris 碱0.002mol/L EDTA15.5ml85%磷酸(1.679g/ml

38、)40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)Tris-硼酸(TBE a0.5 x 0.045mol/L Tris -硼酸5x： 54g Tris 碱0.001mol/L EDTA27.5硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)碱性缓冲液b1 x :50mmol/L NaOH1 x :5ml 10mol/L NaOH1mmol/L EDTA2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸c1 X :25mmol/L Tris5X ：15.1g Tris250mmol/L甘氨酸94g苷氨酸（电泳级）（pH8.3）0.1% SDS50ml 10% SDS(电泳

39、级)说明： TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存 5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以片都以1X TBE作为使用液（即1: 5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5 X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1 : 10稀释的贮存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1X TBE以提供足够的缓冲容量。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris -甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。2X SDS凝胶加样缓冲液：100mmol/L Tris HCI（6.8）200mmol/L 二硫苏糖醇

40、（DTT）4%SD（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘 油不含DTT的2X SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。4. 凝胶加样缓冲液缓冲液类型6x缓冲液贮存温度I0.25%溴酚蓝4C0.25%二甲苯青FF40% （ W/V）蔗糖水溶液n0.25溴酚蓝室温0.25%二甲苯青FF15嘛蔗糖(Ficoll400)0.25%溴酚蓝出0.25%二甲苯青FF4C30%甘油水溶液IV0.25%溴酚蓝4C40%(W/V)蔗糖水溶液碱性加样缓冲液：300mmol/L NaOH6mmol/L EDTAV18嘛蔗糖(Ficoll400)4C0.15%溴甲酚绿0.25%二甲

41、苯青FF使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA匀匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。 以0.5 X TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同,而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为 0.5%1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓 度变化的影响并不显著。选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为

42、鲜明。5.各种pH值的Tris缓冲液的配制各种pH值的Tris缓冲液的配制所需pH值(25C)0.1mol/L HCl 的体积7. 145 . 77. 244 . 77. 343 . 47. 442 . 07. 540 . 37. 638 . 57. 736. 67. 834. 57. 932. 08. 029. 28.126.28.222.98.319.98.417.28.514.78.612.48.710.38.88.58.97.0ml)的某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将 50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位:0.1ml/L HCl

43、混合，加水将体积调至 100ml(2)温度对 50mmol/L Tris HCl液pH值的影响4C25 C37 C8. 17. 57 . 28. 27. 67 . 38. 37. 77 . 48. 47 . 87 . 58. 57 . 97 . 68. 68 . 07 . 78. 78 . 17 . 88. 88 . 27 . 98. 98. 38. 09. 08. 48. 19. 18. 58. 29. 28. 68. 39. 38. 78. 49. 48. 88. 5（6）常用缓冲液的pKa值缓冲液分子量pKa值缓冲范围Tris a12.18.087.1 /-7.9hepeS283.37.

44、477.2 /-8.2mpoS209.37.156.6 /-7.8PIPESd304.36.766.2 /-7.3MES195.26.095.4 /-6.8a：三羟甲基氨基甲烷；b:N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磷酸；c：3-（ N-吗啉代）丙磺酸；d :N,N'-双（2-乙磺酸）哌嗪；e： 2-（ N-吗啉代）乙磺酸。7.温度对常用缓冲液 pH的影响缓冲体系pKa(20C) pKa/10CMes6.15-0.110Ada6.60-0.110PiPes6.80-0.085Aces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.20

45、0Hepes7.55-0.014Tric ine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bici ne8.35-0.180Glycylglyc ine8.40-0.280三、常用酶的配制1溶菌酶用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20C。每一小份一经使用后便予丢弃。2 蛋白水解酶类贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理0.01mol/LTris(pH7.8)链霉蛋 白酶a20mg/ml-20C(溶于水)1mg/ml0.01mol/L EDTA37 C自消化b0.5% SDS0.01mol/LTris(pH7.8)蛋白酶20mg/ml-20C(溶于水)50g/m

46、l0.005mol/L EDTA3756 C无须预处理0.5% SDSa：链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。b:自消化可消除 DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./LTris HCI(pH7.5)、10mmol/L NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37C温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密 封试管中，保存-20C。c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber )中纯化得到。该酶有

47、两个Ca2+吉合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。 然而，如果从该酶中除去 Ca2+,由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入 EDTA(以抑制依赖于 Mg2啲核酸酶的作用)。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/L Ca2+而不含EDTA勺缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT(pH8.0)至终浓度为 2mmol/L,以鳌合Ca2+。3无 DNAB的 RNAB将胰 RNAB（ RNA酶 A）溶于 10mmol/

48、L Tris HCI（pH7.5）、 15mmol/L NaCI 中，配成 10mg/ml 的浓度，于 100C加热 15mi n,缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20C。四、常用抗生素溶液抗生素贮存液a工作浓度浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒氨苄青霉素50mg/ml（溶于水）-20C20 y g/ml60 y g/ml羧苄青霉素50mg/ml（溶于水）-20C20 y g/ml60 y g/ml氯霉素34mg/ml（溶于乙醇）-20C25 y g/ml170 y g/ml卡那霉素10mg/ml（溶于水）-20C10 y g/ml50 y g/ml链霉素10mg/ml（溶于水）-20C10

49、y g/ml50 y g/ml四环素b5mg/ml（溶于乙醇）-20C10 y g/ml50 y g/mla：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22 ym滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。b:镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。五、常用贮存液的配制1. 30%烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37C溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45 ym孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0

50、，置棕色瓶中保存于室温。【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1 Mallinckrodt ），搅拌过夜，然后用 Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。2. 40%丙烯酰胺【配制方法】把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N, N -亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600m

51、l的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。【注意】见上述配制30%烯酰胺的说明，40%f烯酰胺溶液用于 DNA序列测定。3. 放线菌素D溶液【配制方法】把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%醇中，1: 10稀释贮存液，用100%醇作空白对照读取 OD440值。放线菌素D（分 子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21,900,故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182 , 放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于 -20C。【注意】放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通

52、风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防 吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。4. 0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液【配制方法】在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容 1ml，分装成小份保存于-70C5. 10mol/L 乙酸酰溶液【配制方法】把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。6. 10%过硫酸铵溶液【配制方法】把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶