4个香菇品种的AFLP分子标记研究

1、4个香菇品种的AFLP分子标记研究4个香菇品种的AFLP分子标记讨论 1.3.4 选择性扩增。将预扩增产物稀释后作为模板进行PCR扩增。反应体系：2×PCR Mix 10 L，Eprimer 1 L20 mol/L，Mprimer 1 L20 mol/L，模板DNA 5 L预扩产物稀释20倍，加ddH2O至20 L。PCR扩增程序：95 预变性5 min;95 变性35 s，65 复性35 s每循环降低0.7 ，72 延长1 min，12个循环;94 变性30 s，56 复性30 s，72 延长1 min，23个循环。 1.3.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析。选择扩增PCR产物和上样

2、缓冲液比例83，旋涡混匀，94 变性10 min后，于6%变性聚丙烯酰胺凝胶进行垂直电泳分析，银染后观看。利用Quantity One软件对4个样品、12对引物组合扩增产物测序仪得到的原始数据进行分析，依据无带和有带状况转化为0和1数据矩阵。接受NTSYSpc 2.11软件包进行个体相像系数计算，并接受UPGMA法进行聚类分析，利用popgene和NTSYS软件对样品进行遗传多样性分析。2 结果与分析2.1 聚丙烯酰胺凝胶分析利用12对随机引物组合对4个香菇品种的基因组DNA进行扩增，AFLP扩增产物长度介于100500 bp之间，条带清晰。扩增电泳图谱见图1。扩增条带总数为239条，其中多态

3、性条带为100条;引物组合P5扩增出的多态性条带最多，多态百分比为65.38%;引物组合P9扩增出的多态性条带最少，多态百分比为15.38%。2.2 品种多态性分析由表3可知，香菇LB-21扩增出的条带总数为180条，其中多态性条带41条，多态比率最低，为22.78%，特有条带2条;香菇L808、香菇215分别扩增出195、188条，多态性条带分别为52、49条，其中特有条带分别为12、2条;香菇B15-1扩增出的条带总数为196条，多态性条带57条，多态比率最高，为29.08%，含特有条带7条。2.3 遗传相像性系数分析由表4可知，4个香菇品种之间的遗传相像性系数改变范围为0.669 50.

4、878 7。香菇LB-21与香菇L808、香菇215之间的遗传性系数较小，说明遗传距离较远;与香菇B15-1之间的遗传相像性系数较高，为0.874 5。香菇L808与香菇215之间的遗传相像性系数较高，为0.878 7;与香菇B15-1之间的遗传性系数较小，说明遗传距离较远。2.4 聚类分析接受UPGMA法进行聚类分析，得到4个香菇品种的亲缘关系树状图。从图2可以看出，4个香菇品种被分为了2组，其中香菇LB-21与香菇B15-1为一组，说明这2个品种亲缘关系相对较近，遗传相像性系数为0.874 5;香菇L808与香菇215为一组，两者亲缘关系较近，遗传相像性系数为0.878 7。3 结论试验结果说明，接受12对随机引物组合扩增4个香菇品种基因组DNA，香菇B15-1擴增条带总数为196条，多态性条带57条，多态比率最高29.08%，含有特有条带7条香菇L808、香菇215扩增条带总数分别为195、188条，多态性条带分别为52、49条，其中特有条带分别为12、2条;香菇LB-21扩增条带总数为180条，其中多态性条带41条，多态比率最低22.78%，特有条带2条。4个香菇品种之间的遗传相像性系数改变范围为0.669 50.878 7。接受UPGMA法进行聚类分析，结果发觉，4个品种被分成了2组，其中香菇LB-21与香菇B15-1为一组，说明