元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究

1、.元谋栽培印楝枝叶化学成分的研究印楝Azadirachta indica为楝科Meliaceae楝属Melia Linn植物，原产于南亚次大陆，包括印度、巴基斯坦以及缅甸等国1。印楝有很强的昆虫拒食活性和杀虫活性，它是目前世界上公认的高效无毒无公害杀虫植物。它还是一种药用植物，在印度人们利用印楝的各个部位来治疗麻疹、眼疾、鼻出血、肠道寄生虫、皮肤溃疡等疾病2。现代活性研究发现印楝有抗肿瘤3、抗菌4、抗病毒5等活性甾体，印楝的化学成分及生物活性也一直是研究热点。我国曾在云南、海南和广东进展种植，以云南种植面积最大中国论文网。目前在云南元谋地区栽培的印楝均已成材结实，但是却未能得到实际有效的利用，

2、转变为预期的生态农药，更加让人担忧的是这些印楝面临随时被砍伐的危险。为了能挽救这一闲置的资源，为开发利用这一资源探究新的途径，本研究组对采集于云南元谋县栽培印楝枝叶进展了化学成分的研究，从印楝枝叶的甲醇提取物中别离得到别离得到56个化合物，本文报道首次从中得到的15个化合物，分别为：nimbin 1甾体，6-deacetylnimbin 2，6-deacetylnimbinene 3，nimbinene 4，azadiradione5，7-acetoxy-elema-1,3-dien-8-ol 6，1-naphthalenone 7, acarusnol 8，colvane-2,9-diol

3、9，乌苏酸10，马斯里酸11，2-羟基乌苏酸12甾体，猕猴桃酸B 13，2,3,4-trihydroxypregnan-16-one14，2,3,4-trihydroxypregnan-16-one15。1 材料和方法1.1 材料和仪器NMR在Bruker AV-400或 DRX-500核磁共振仪上测定，以TMS为内标。ESI质谱由Waters 2695 HPLC-Thermofinnigan LCQ Advantage 离子阱质谱仪或者API Qster Pulsar质谱仪测定。硅胶G200-300目及GF254薄层层析硅胶板购自中国青岛海洋化工厂。葡聚糖凝胶LH-20为Pharmacia公

4、司消费。C-18反相材料40-63 m为德国Merck公司消费。D101大孔吸附树脂为日本MitsubishiChemical Corporation消费。显色剂为10%硫酸水溶液及碘。1.2 植物来源印楝Azadirachta indica样品于2020年5月采自云南省元谋县杀虫植物印楝栽培基地，系引自缅甸的品种；植物标本由昆明植物研究所彭华研究员鉴定。标本No. KIB 20200502存放于昆明植物所植物化学与西部植物资源可持续利用国家重点实验室中国论文网。1.3 提取与别离自然晾干的印楝枝叶47 kg粉碎后，于室温下用甲醇提取4次，每次140 L甲醇提取16小时。合并提取液减压回收溶剂

5、，得到含水的粗提物。将粗提物用乙酸乙酯萃取后浓缩得到1250 g萃取物，将萃取物硅利用硅胶色谱划分为4个极性段，分别是纯氯仿段Fr. A146 g、50:1氯仿甲醇段Fr. B497 g、10:1氯仿甲醇段Fr. C157 g及4:1氯仿甲醇段Fr. D180 g。Fr. B用D101大孔树脂吸附甾体，20%甲醇水洗脱至流出液根本无色后用80-90%甲醇水洗脱，搜集合并80-90%甲醇水洗脱液浓缩蒸干得303 g胶状物，将其用1.5倍量硅胶拌样，用7倍量硅胶进展柱层析，用石油醚丙酮1:0-1:1系统洗脱分为油脂部分及TLC检测合并后的4个馏分Fr.1-4。馏分Fr. 1110 g先用反相划为3

6、段：55%甲醇水馏分Fr. 1-1、70%甲醇水馏分Fr. 1-2及90%甲醇水馏分Fr. 1-3。再对各段用硅胶柱200-300目，石油醚乙酸乙酯、氯仿丙酮或氯仿甲醇梯度洗脱和凝胶色谱流动相为甲醇反复层析，从Fr. 1-1得到化合物16.8 g，25.9 g，3940 mg，4480 mg甾体，5390 mg，从Fr. 1-2得到化合物104.2 g，从Fr. 1-3得到化合物640 mg，7150 mg，895 mg。Fr. C用大孔树脂吸附，依次用30% 、80%甲醇水及甲醇洗脱，将80%甲醇水洗脱部分合并浓缩得65 g胶状物，1.5倍硅胶拌样后10倍硅胶上柱并用25:110:1氯仿甲醇

7、系统洗脱，TLC检测合并分为4个馏分Fr. 5-8，对Fr. 719 g反复用反相C-18、凝胶及硅胶柱氯仿丙酮和氯仿甲醇梯度洗脱层析甾体，得到化合物96 mg，119 mg，1585 mg。同样从馏分Fr. 825 g得到化合物1272 mg，1397 mg，1431 mg。由于样品量较大，各馏分间有重复，未进展全部分离，化合物所得重量不是绝对含量。2 研究结果利用各种色谱方法从元谋栽培印楝枝叶中别离得到15个不同构造类型的化合物，并用NMR、MS等技术手段鉴定了其构造。化合物1：C30H36O9，无色针晶丙酮甾体，ESIMS m/z 563 M + Na+，1H NMR CDCl3, 40

8、0MHz: H 7.32 1H, m, H-21, 7.23 1H, m, H-23,6.34 1H, d, J = 10.1 Hz, H-3, 6.33 1H, m, H-22, 5.88 1H, d, J = 10.1Hz, H-2, 5.56 1H, m, H-15, 5.21 1H, dd, J = 12.4, 2.9 Hz, H-6, 4.041H, d, J = 2.9 Hz, H-7, 3.73 3H, s, 28-OCH3, 3.69 1H, d, J = 12.4 Hz, H-5, 3.65 3H, s, 12-OCH3, 2.04 3H, s, H-Ac, 1.66 3H,

9、 d, J = 1.5 Hz, H-18, 1.35 3H, s, H-28, 1.34 3H, s, H-29,1.28 3H, s, H-19；13CNMR CDCl3, 100MHz 数据见表1中国论文网。其MS及NMR数据与文献6报道的nimbin一致。化合物2：C28H34O8,无色针晶丙酮，其NMR数据与化合物1非常相似，比较可知其只是少了一个乙酰基，且与文献6报道的6-deacetylnimbin一致。化合物3：C26H32O6,无色针晶丙酮，ESIMS m/z 463 M + Na+；1H NMR CDCl3, 400MHz: H 7.32 1H, m, H-21, 7.21

10、1H, m, H-23,6.37 1H, m, H-22, 5.60 1H, m, H-3, 5.46 1H, m, H-15, 4.05 1H, m, H-6, 4.01 1H, m, H-7,3.67 1H, m, H-17, 3.59 3H, s, -OCH3, 2.91 1H, d, J = 12.5 Hz, H-5, 2.05 3H, s, H-29, 1.70 3H, d, J = 1.4 Hz, H-18, 1.33 3H, s, H-30, 1.06 3H, s, H-19；13CNMR CDCl3, 100MHz 数据见表1。其MS及NMR数据与文献7报道的6-deacety

11、lnimbine一致。化合物4：C28H34O7，无色针晶丙酮，与化合物3非常相似，比较可知其多了一个乙酰基，且与文献报道7的nimbinene一致。表1 化合物1-6 13C数据No.12345No.123451201.6202.2213.2212.2158.21641.541.441.341.334.32125.9126.439.939.8125.41749.449.649.549.451.53147.6148.1119.1120.0204.61812.812.812.812.820.6447.947.7138.6136.744.11916.617.121.721.619.0541.543

12、.647.243.046.120126.8126.8126.7126124.5668.666.166.369.123.721139.0138.9138.9138.8139.6784.586.986.385.174.422110.4110.4110.3110.4111.0847.047.347.247.742.723143.0143.0143.0143.0142.5938.539.037.136.938.628174.6175.521.31048.047.449.449.339.92917.216.414.014.227.01134.234.333.633.516.43016.717.517.4

13、17.127.312173.6173.6173.6173.532.9Ac170.6170.6170.113135.1134.9134.8135.147.1Ac21.021.121.114146.1146.7147.2146.3158.812-OMe51.751.651.651.61587.187.488.086.8119.028-OMe53.153.0化合物5：C28H36O4甾体，白色粉末，1H NMR CDCl3, 400MHz: H 7.25 1H, m, H-23, 7.21 1H, m, H-21, 7.15 1H, d, J = 10.2 Hz, H-1, 6.271H, d, J = 1.9 Hz, H-22, 5.84 1H,d, J = 10.2 Hz, H-2, 5.371H, dd, J = 3.2, 1.5 Hz, H-15, 5.25 1