FDA大肠菌群和大肠杆菌检测方法

1、大肠菌群的定义大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌。大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠杆菌的定义大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。大肠杆菌指革兰氏阴性无芽抱杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViCIMViC 试验（靛基质、MRV-PMRV-P、柠檬酸盐试验）为+-或-+-的细困

2、。与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETECETEC、致病性大肠杆菌（EPECEPEC、出血性大肠杆菌（EHECEHEC、侵袭性大肠杆菌（EIECEIEC）、黏附性大肠杆菌（EAECEAEC。卫生学意义大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认

3、的卫生监测指示菌。近年来，有些国家在执行 HACCPtHACCPt 理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和 HACCHACC 续施效果的评估指标。大肠杆菌的生物学特性基本形态:此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约 0.5-0.80.5-0.8g gm*1.0-3.0m*1.0-3.0am,多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%50%勺菌株有周生鞭毛，但多数只有 1-41-4 根，一般不超过 1010 根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽抱，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、镂盐、葡萄糖的普通培养基上生长良

4、好。最适生长温度为 37C,37C,在 42-42-4444C C 条件下仍能生长，生长温度范围 15-46C15-46C。大肠菌群及大肠杆菌测定MPKMPK 检验流程（FDABAMFDABAM1 1、检样 50g+450ml50g+450ml 稀释液2 2、适当十倍稀释样品3 3、选择 3 3 个适宜的连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种三管 LSTLST 肉汤（每管 9mlLST9mlLST 肉汤并加有导管），每管接种 1mL1mL 在 35c35c 下，培养 2424 士 2h2h4848 士 2h2h。4 4、（1 1）没有产气管-报告阴性（2 2）有产气管：接种 BGLBBGLB

5、肉汤管-查 MPNaMPNa 报告结果（大肠菌群）接种 ECEC 肉汤在 44.544.50.50.5（水浴培养）24242h2h48482h2h。-产气管接种 EMEM 抨板（35C35C、181824h24h）, ,从 EMEM 抨板上挑取 5 5 个可疑菌转接到 PCAPCA 斜面，进行革兰氏染色、IMVCIMVC 生化鉴定、接种 LSTLST 复检产气-查 MPNaMPNa 报告结果（大肠菌群）。大肠菌群测定一一 MPNSMPNS 检验几点说明MPMP 湍索表：MPNMPN 检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加 1010 倍。初发酵和证实试验：1 1）

6、两步法进行了两次乳糖发酵试验。初发酵和证实实验所用培养基不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在 37c37c 分解乳糖产酸产气”。2 2）初发酵阳性管，不能肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能成为阴性。有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实试验相差较大。因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的产气量与倒管：在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡（有时比小米粒还小），有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明，大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的

7、乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。大肠杆菌测定一一 EMEBEMEB 择性分离鉴别EMEM 抨板典型大肠杆菌菌落特征：中心黑色或紫红色，有或无绿色金属光泽大肠杆菌测定一一 EMEM 琏择性分离鉴别EMEM 盟一种弱选择性培养基，一些球菌也可在该培养基上生长；l l 高压灭菌可使得美蓝还原从而使培养基的颜色呈不均一橘黄色，轻轻摇动培养基可以恢复原有的正常紫色，倾注平板前应先摇匀；大肠杆菌在该培养基上并不一定总是呈现绿色的金属光泽；该培养基受可见光易使其中的成分氧化，储存及培养细菌时都应在避光条件。大肠杆菌测定一一革兰氏染色基本步骤：将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染 1min,1min,水洗；滴加革兰氏碘液，作用