食科093班食品生物技术B复习参考资料

1、1、食品生物技术：食品生物技术是食品科学技术与生物技术相互渗透而形成的一门新兴学科。现代生物技术在食品领域中的应用，是指以现代生命科学的研究成果为基础，结合现代工程技术手段和其他学科的研究成果，设计新型的食品和食品原料。2、生物技术的构成：由多学科综合而成的一门交叉学科，涉及微生物学、生物化学、细胞生物学、免疫学、遗传学、分子生物学和化学工程等学科。目前认为生物技术主要由基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和发酵工程组成。3、食品生物技术的主要研究内容：基因工程：核酸的分离提取、拼接重组以及扩增等技术。蛋白质工程：对现有蛋白质加以定向改造。微生物发酵工程：微生物发酵生产特定产品的技术。细胞工

2、程：细胞的离体培养融合，细胞核等的移植改建。酶工程：借助固定化酶，生物反应器等生产特定产品。生物工程下游技术：通过以上技术生产液为原料，经提分离纯化、加工等步骤形成的产品。生物芯片和生物传感器：通过微加工技术将信息集成达到对基因、抗原和活体细胞等分析和检测（应用于食品安全检测）。4、食品生物技术的成就及前景展望：一、生物技术的地位：生物技术是解决全球性经济问题的关键技术促进传统产业的技术改造和新兴产业的形成，对人类社会生活将产生深远的革命性的影响。生物技术将是21世纪高新技术革命的核心内容。二、食品生物技术的作用：（一）改善农业生产，解决食品短缺（1）培育抗逆的作物优良品系；（2）植物种苗的工

3、厂化生产；（3）提高粮食品质；（4）生物固氮，减少化肥用量；（5）动物的大量快速无性繁殖；（6）培育动物的优良品系。（二）提高生命质量，延长人类寿命（1）开发新型药品 （2）疾病的预防和诊断（3）基因治疗（4）人类基因组计划（三）解决能源危机，治理环境污染（1）解决能源危机（2）环境保护（四）制造工业原料，生产贵重金属（1）制造工业原料（2）生产贵重金属。（五）食品生物技术对人类的作用：解决食品短缺，缓解由于人口增长带来的压力；丰富食品种类，满足不同层次消费人群的需求；开发新型功能性食品，保障人类健康；生产环保型食品，保护环境；开发新资源食品，拓宽人类食物来源。三、我国在21世纪应重点开发的食

4、品生物技术：1.加强遗传育种研究，加强基因改造生物为主的应用研究，培育更适合食品加工的优良品种，开发现代生物技术新产品。（如提取番茄红素用的番茄品种）2.食品工业用新酶种开发。纤维素酶、木聚糖酶等3.酶或细胞的固定化技术和酶催化反应装置的结构优化等。（果葡糖浆的生产）4.继续名优白酒传统酿造技术的改造。酒类呈香成分的剖析和主体香气成分确定、名优白酒微量成分与风味关系的解析等。四、生物技术的发展趋势：基因重组操作技术将更进一步完善。高效、定位更准确基因操作技术的研究;高效表达系统的研究;定时、定位表达技术的研究等新技术、新方法将会推动生物技术的发展。基因工程药物和疫苗的研究与开发将会突飞猛进,高

5、效、低副作用的新型生物治疗药剂将在基因工程技术、发酵工程和生物工程下游技术发展的基础上不断出现,人类目前许多疑难杂症无法用药物治疗的局面将被克服。转基因动植物将会取得重大突破。生命基因组计划将在许多生命领域展开，后基因组学和蛋白质组学将是研究与开发的重点。基因治疗将会取得重大进展。蛋白质工程、酶工程、发酵工程将在基因工程的基础上达到长足发展。信息技术渗透到生物技术的领域中。5、基因工程：又称重组DNA技术，是将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也成分子克隆技术。四大要素：供体、受

6、体、载体、外源基因（来自供体基因）。6、基因工程理论上三大发现：1.40年代发现了生物的遗传物质是DNA 。1944年Avery通过肺炎球菌转化实验,不仅证明了DNA是遗传物质,而且也证明了DNA可以把一个细菌的性状转给另一个细菌,确定了遗传信息的携带者(即基因)的分子载体是DNA而不是蛋白质,从而明确了遗传的物质基础问题,具有十分重大的理论意义。2.50年代清楚DNA的双螺旋结构和半保留复制机理。1953年，二人发现DNA双螺旋结构时，沃森年仅25岁，克里克也只有37岁。1962年，沃森、克里克与威尔金斯因研究DNA双螺旋结构模型的成果，共同荣获了诺贝尔生理学或医学奖。3.遗传密码的破译和遗

7、传信息传递方式的确定。以Nireberg等为代表的一批科学家经过艰苦努力，确定了遗传信息以密码方式传递，每三个核苷酸组成一个密码子，代表一个氨基酸，到1966年，全部破译了64个密码子，并提出遗传信息传递的“中心法则”。1958年Crick提出，1971年又进行了补充。7、基因工程技术上三大发明：1.限制性核酸内切酶的发现2.DNA连接酶的发现3.基因工程载体的研究与发现。1946年起，Lederberg开始研究细菌的性因子F因子;20世纪60年代，相继发现其他质粒;（pBR,pUC）；1973年，Cohen将质粒作为基因工程的载体使用。8、基因工程研究的基本步骤：1、从生物体中分离得到目的基

8、因（或DNA片段）2、在体外，将目的基因插入能自我复制的载体中得到重组DNA分子。3、将重组DNA分子导入受体细胞中，并进行繁殖。4、筛选得到含有重组DNA分子的细胞克隆，并进行大量繁殖，从而使得目的基因得到扩增。5、进一步对获得的目的基因进行研究和利用。比如，序列分析、表达载体构建、原核表达以及转基因研究和利用等。9、食品基因工程研究的主要内容：蛋白质工程：提高食品中蛋白质的含量或提高蛋白质中必需氨基酸的含量。碳水化合物工程：改变淀粉或糖的含量；改变淀粉的组成。油脂工程：控制脂肪酸的链长；控制脂肪酸的饱和度。其他：新品种研发，如疫苗食品，防肝炎病毒香蕉。10、DNA提取原理：（1）浓盐法：利

9、用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M NaCl抽提,得到的DNA粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA钠盐沉淀出来。（2）阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。（3）苯酚抽提法：苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,

10、蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。（4）水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液。在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M，加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出。然后分别用66% 、80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品。此法提取的DNA

11、中蛋白质含量较高,故一般不用。11、DNA的检测：1. 分光光度法：DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，吸收峰在260nm处；波长为60nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。经验值：纯DNA：OD260/OD2801.8(1.9,表明有RNA污染；1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 OD260/OD2802.0（1.7时表明有蛋白质或酚污染；2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。2. 电泳检测：分离原理： DNA（RNA）是多聚

12、阴离子，带有负电荷，在电场中会想正极迁移，相同数量的DNA移动速度也一样，DNA的迁移率随DNA片段长度的增加而减少，从而达到分离的目的。通过同已知分子量的标准DNA片段的迁移位置进行比较，可测定电泳DNA的片段大小。显色原理：溴乙锭（EB）是一种嵌入型染料，其上的一个扁平的基团可插入到DNA或RNA链的堆积碱基之间。DNA吸收254nm的紫外辐射并传递能量给EB，释放出荧光。EB结合量的多少与DNA的大小和构型有关。对于单一构型的同种DNA样品来说，溴化乙锭的嵌入量与样品溶液DNA含量成正比。12、限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶(Restriction endonucleases)，是一

13、类能够识别双链DNA分子中某种特定的核苷酸序列，并能精确特异地切割双链DNA分子的核酸内切酶。可分为I型、II型和III型。13、DNA连接酶：DNA连接酶的发现及机理：（1967年)一种能够催化在2条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶DNA连接酶（ligase）。这种酶需要一条DNA链的3末端具有一个游离的羟基(OH)，和另一条DNA链的5末端具有一个磷酸基团(P)，才能发挥其连接DNA分子的功能作用。DNA连接酶的种类（来源或底物不同）：（1）大肠杆菌DNA连接酶（2）T4 DNA连接酶（3）T4噬菌体RNA连接酶。14、DNA聚合酶：在引物和模板的存在下，把脱氧核苷酸连续地加到双链DNA分子

14、引物链的3OH末端，催化核苷酸聚合作用的酶。15、修饰性工具酶：1、末端转移酶（terminal transferase）2、核酸酶SI（SI nuclease）3、碱性磷酸化酶（Alkaline phosphatase）16、载体(vector)：是将外源DNA(目的DNA)片断引入宿主细胞的运载工具，其化学本质为DNA 。17、载体的选择标准： 能独立自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点；分子量小，以容纳较大的外源DNA。18、质粒的生存：在寄主细胞中“友好”地“借居”，离开了寄主它本身无法复

15、制，它可以赋予寄主一些非染色体控制的遗传性状，以利于寄主的生存。比如，对抗菌素的抗性，对重金属抗性等。质粒的存在形式：有超螺旋、开环双螺旋和线状双螺旋三种。19、噬菌体的生物学特性：噬菌体的生长周期可分为溶菌周期和溶源周期两种类型。溶菌周期：（lytic pathway）指噬菌体感染细菌后，将DNA注入寄主细胞，借助其2个COS位点互补成环，在宿主菌体内连续复制，合成大量基因产物，进而装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌，释放出来大量的的子代噬菌体又可感染其他细菌。溶源周期：噬菌体感染细菌后，可将自身DNA整合到细菌的染色体中去，并整合到寄主细胞染色体上随之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不被裂解

16、 。20、基因工程包括五个环节： 目的基因的获取；重组体DNA的构建； 重组体的转化；重组体的筛选和鉴定； 克隆基因的表达。21、PCR（Polymerase Chain Reaction）法，又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术，是一种高效快速的体外DNA聚合程序。前提条件：已知待扩增目的基因或DNA片段两侧的序列，根据该序列化学合成聚合反应必需的双引物 。22、重组DNA分子构建好后必须转移到适当的受体细胞中才能得到扩增和表达。导入方式：转化、转染、 微注射技术、电转化法、基因枪技术、脂质体介导法、其他方法。23、启动子（promoter）：在基因序列中，标志着转录起始的可被RNA聚合酶识别

17、的位点(DNA区段)，一般位于基因的上游。终止子（terminator）：位于基因的编码序列之外（一般在下游）的一段标志着转录停止的RNA聚合酶识别位点。24、基因工程在食品产业中的应用：1、用利基因工程改造食品微生物改良微生物菌种、改良乳酸菌遗传特性、酶制剂的生产2、用利基因工程改善食品原料的品质改良动物食品性状、改造植物性食品原料3、用利基因工程改进食品生产工艺利用DNA重组技术改进果糖和乙醇生产方法、改良啤酒大麦的加工工艺、改良小麦种子贮藏蛋白的烘烤特性、改善牛乳加工特性4、利用基因工程生产食品添加剂及功能性食品生产氨基酸、生产黄原胶、超氧化物歧化酶的基因工程、应用于生产保健食品的有效成

18、分。生产食品或饲料添加剂。转基因烟草生产植酸酶。生产蛋白质和多肽类活性物质。25、发酵工程概念:利用微生物的特定性状，通过现代化工程技术产生有用物质或直接应用于工业化生产，来解决粮食、能源、化学制品、环境控制等全球性课题。现代发酵技术是将传统发酵技术与DNA重组、细胞融合、分子修饰和改造等新技术结合并发展起来的。主要指在最适发酵条件下，发酵罐中大量培养细胞和生产代谢产物的工艺技术。26、自然界中目的微生物分离原则:（一）菌种分离的一般过程：土样的采取预处理培养菌落的选择产品的鉴定；目的：高效地获取一株高产目的产物的微生物。（二）采样时要注意的问题：气候、水分、空气；结合产品的特点；标签：地点、

19、时间、气候等。（三）目的微生物富集的一些基本方法：目的：让目的微生物在种群中占优势，使筛选变得可能。富集的三种方案：定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的条件，进行培养；当不可能采用定向培养时，则可设计在一个分类学中考虑；不能提供任何有助于筛选产生菌的信息，这时只能通过随机分离的办法。定向培养的富集方法：1.底物2.pH条件3.培养时间4.培养温度。一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养(固体、液体；分批连续)后使目的微生物在种群中占优势。（四）菌落的选出：从产物角度出发，在培养时以产物的形成有目的的设计培养基，利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素；从形态的角度，菌落的外观形态，是微生

20、物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。27、细胞浓度的测量方法:（一）直接测定法：特点是直观精确，1.细胞干重法2.显微计数法3.平板计数法4.浊度法；（二）间接测量法：1、测定细胞成份2.培养液中细胞虚体积的测定3.粘度4.利用培养过程中产生热量的多少5.利用发酵过程中营养物质的消耗量6.利用最终产物的合成数量7.利用荧光素测定细胞中ATP的数量。28、发酵动力学:定义：发酵动力学是研究发酵过程中菌体生长、基质消耗、产物生成的动态平衡及其内在规律。研究内容：包括了解发酵过程中菌体生长速率、基质消耗速率和产物生成速率的相互关系，环境因素对三

21、者的影响，以及影响其反应速度的条件。29、研究发酵动力学的目的:1.确定最佳发酵工艺条件2.建立发酵过程中菌体浓度、基质浓度、温度、pH、溶氧等工艺参数的控制方案3.为试验工厂数据的放大、为分批发酵过渡到连续发酵提供理论依据。4.利用电子计算机，根据发酵动力学模型来设计程序，模拟最优化的工艺流程和发酵工艺参数，从而使生产控制达到最优化。30、发酵动力学的研究内容:见课件生长得率:是指每消耗1g(或mo1)基质所产生的菌体重(g) 。产物得率:是指每消耗1g(或mo1)基质所合成的产物g数(或mol数)。这里消耗的基质是指被微生物实际利用掉的基质数量，即投入的基数减去残留的基质量(S0-S)。

22、转化率：指投入的原料与合成产物数量之比。 31、发酵工程在食品中的应用（自己总结）32、细胞工程:细胞工程是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或者组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物。核心技术：细胞培养/繁殖/细胞融合。目的：获得新性状、新个体、新物质。33、细胞全能性:是指细胞经分裂和分化后仍具有产生完整有机体的潜能或特性。细胞分化:指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。34、灭菌:人为因素（工作人员本身）：穿工作服、戴帽子、口罩、酒精擦手；物品因素：1.器皿和用具 ：培养

23、皿：洗热压；玻璃器皿：洗干热（干热箱）或晾干；接种用具：用CCL4布擦湿布擦泡75%95%酒精烧；2.培养基：湿热灭菌；3.培养材料：外部细菌：用水冲洗化学药剂处理；内部细菌：茎尖培养或加抗生素：青霉素、利福平；4.操作的空气：洗刷地板、95%酒精擦超净工作台、用化学试剂薰蒸。35、细胞培养操作过程:1.取材和除菌；2.根据各类细胞的特点,配制细胞培养基并进行灭；3.将生物材料接种于培养基中；4.将接种后的培养基放人培养室或培养箱中培养；5.当细胞达到一定生物量时应及时收获或传代。36、细胞冻存和复苏的原则:慢冻快融；当细胞冷到零度以下，产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在

24、细胞内形成冰晶，造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂，如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。37、动物细胞培养细胞类型及特点:1.贴附型：贴附于支持物表面，生长中形成汇片。大多数细胞属此型，失去了在体内特有形态，成纤维细胞型、上皮细胞型、游走型、多形型；2.悬浮型：悬浮生长，单个分散或者成团，各种源自血液的细胞、骨髓、脾细胞。38、动物细胞培养条件和环境:温度35-37；气体95%空气/5%CO2；酸碱度pH 7.2-7.4 （酚红指示）；渗透压血浆渗透压 290 Osm/kg；支持物玻璃、塑料、饲养层、微载体；培养细胞浸

25、浴于培养液，生长在置于恒温、恒湿二氧化碳孵育箱中的玻璃或塑料容器中。39、原代细胞:是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。传代细胞:适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。细胞系:原代细胞经第一次传代后，形成的细胞群体，即具有增殖能力，类型均匀的培养细胞，一般为有限细胞系。细胞株:细胞系经过克隆或其他方法而得的单一类型的细胞群体。40、动物细胞培养方法:1.悬浮培养：细胞在培养器中自由悬浮生长的培养方法；主要用于非贴壁依赖性细胞的培养。2.贴壁培养：将细胞贴附在固体介质表面上才能进行细胞培养的方式，主要用于非淋巴组织等贴壁依赖

26、性细胞的培养。3.固定化培养：属于一种既适用于贴壁依赖性细胞，又适用于非贴壁依赖性细胞的包埋培养方式，常用的细胞固定化方法主要有吸附、共价贴附、离子共价交联、包埋和微胶囊化等。41、细胞融合技术:指用自然或人工方法、使两个或更多不同的细胞融合成一个细胞的过程，又称为体细胞杂交。细胞融合过程:包括3个主要阶段：1.凝聚作用阶段，其间两个或两个以上的原生质体的质膜彼此靠近；2.在很小的局部区域质膜紧密粘连，彼此融合，在两个原生质体之间细胞质呈现连续状态，或是出现桥；3.由于细胞质桥的扩展，融合完成，形成球形的异核体或同核体。细胞融合意义:1.有性杂交变无性杂交,加快育种速度。2.进行体细胞融合可培

27、育远缘杂交新种。3.创造新细胞质杂种，杂交的细胞具有很强的生命力。4.制备单克隆抗体、植物育种中的核质替换和细胞器的互作研究。如癌症：化疗“地毯式轰炸”“精确制导导弹”。42、细胞融合方法:1.生物法仙台病毒法；2.化学法PEG结合高Ca、高pH诱导法；3.物理法电融合诱导法。细胞固定化:一、有载体固定化细胞：1.凝胶包埋法2.交联固定化3.细胞的吸附法固定化；二、无载体固定化细胞：1.细胞自絮凝（self-flocculating)形成颗粒2.适当条件，通过一定处理使酶固定在细胞内（葡萄糖异构酶加热固定化）。43、细胞工程在食品工业中的应用:一、动物细胞工程在食品工业中的应用：1.主要集中于

28、疫苗、干扰素、激素、酶、单克隆抗体等医药制品的生产，如商业化的产品开发；2.在食品工业及畜牧业生产等其他领域的应用正逐步扩大，例如培育优良食用动物品种、生产生物活性物质及新型功能性保健食品以及以培养细胞代替实验动物进行食品检验等；3.培育优良动物品种。二、植物细胞工程在食品工业的应用：1.植物中含有极为可观的次生代谢物，是重要的食物成分，如色素、生物碱、酶等；2.通过植物细胞培养已能高效地生产多种碳水化合物、蛋白质、糖、氨基酸、酶、黄酮类、酚类、色素、生产香料等食物成分。三、微生物细胞工程在食品工业中的应用：微生物细胞工程在食品工业中的应用主要为单细胞蛋白的生产，其他还包括微生物育种以及食用真

29、菌生产等。44、蛋白质工程:指在蛋白质空间结构和结构与功能研究的基础上，借助计算机图象显示和辅助设计来确定某一蛋白质分子的改造方案，通过人工直接合成蛋白质(多肽)，或利用基因工程手段，对已知或未知蛋白质进行定向改造，获得比天然蛋白更优良、更符合人们需要的新型蛋白质的过程。45、蛋白质工程与基因工程的区别:基因工程是通过基因操作把外源基因转入适当的生物体内，并在其中进行表达，产品还是该基因编码的天然存在的蛋白质。蛋白质工程则更进一步根据分子设计的方案，通过对天然蛋白质的基因进行改造，来实现对其所编码的蛋白质的改造，它的产品已不再是天然的蛋白质，而是经过改造的，具有了人类所需要的优点的蛋白质。 思

30、路不同：基因工程是遵循中心法则：从DNAmRNA蛋白质折叠产生功能，基本上是生产出自然界已有的蛋白质。蛋白质工程：确定蛋白质的功能蛋白质应有的高级结构蛋白质应具备的折叠状态应有的氨基酸序列应有的碱基排列，可以创造自然界不存在的蛋白质。两者比较：基因工程和蛋白质工程都要改造基因，都属于分子水平；但是基因工程产生新的基因型，无新基因，蛋白质工程产生新的基因（型）；基因工程产生的蛋白质是原有的，蛋白质工程产生新的蛋白质；联系：蛋白质工程以基因工程为基础，是基因工程的应用和延伸。46、蛋白质工程的步骤:一、蛋白质工程的操作步骤：1.从预期的蛋白质功能出发2.设计预期的蛋白质结构3.推测应用的氨基酸序列

31、4.找到相应的脱氧核苷酸序列；二、蛋白质工程的主要步骤：从生物体中分离纯化目的蛋白；2.测定其氨基酸序列；3.借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构；4.设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响；5.设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变；6.分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。蛋白质组成的测定方法:1.茚三酮法：是经典的蛋白质氨基酸组成测定方法。基本原理：是将蛋白质完全水解成游离氨基酸后，用离子交换层析法将不同的氨基酸分开，茚三酮除与脯氨酸、羟脯氨酸反应形成黄色化合物外，与其他氨基酸反应均形成紫色化合物，测定溶液在440和570nm波长处的OD值，根据记录峰面积可计算出各氨基酸的含量。2.柱前-HPLC衍生化技术：将蛋白质完全水解成游离氨基酸后，首先与化学偶联试剂反应生成各种氨基酸衍生物，然后再用层析柱将各种衍生物分离，直接测定各种衍生物的OD值或荧光强度。特点：灵敏度高，可用HPLC进行分析，但有的衍生物不稳定等。47、酶工程：利用酶的催化作用进行物质转化的技术，是酶学理论、基因工程、蛋白质工程和发酵工程相结合的一门新技术。48、酶的生产与改造：酶工程的整个过程包括酶的生产、提取、分离、纯化、修饰、固定化和应用等步骤。一、酶的生产：酶的生