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文档简介

1、YLNB 5.81. 依据 GB/T5413.11 -19972. 范围 用荧光法测定维生素 B的方法，适用于乳粉中维 生素B1的测定。3. 方法提要样品在稀盐酸溶液中消化，过滤，除去蛋白质等物质。女口 果样品中维生素B1系游离态，可直接在碱性铁氰化钾中氧化 成噻嘧色素，在紫外光照射下发出荧光，其荧光强弱与噻嘧 色素成正比；如果维生素 B!系结合态，则须经酶解转为游离 态，作荧光检测。检测所使用的激发波长E1为365nm发射波长EM为435nm。4. 试剂和设备所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如 未注明其他要求，均指三级水。4. 1 盐酸：c (HCI)为 O.1mol/L。

2、4. 2 氢氧化钠：c ( NaOH 为 150g/L。4. 3正丁醇：重蒸馏。4. 4 乙酸钠：c (NaAc)为2mol/L。4. 5酸性乙醇：体积分数为20%用盐酸调节pH为3.54.3 <4. 6淀粉酶(生化试剂)溶液：100g/L。4. 7 铁氰化钾：cK3Fe（CN）6为10g/L，使用当天配制。4. 8标准溶液4. & 1维生素B1标准贮备液，浓度为100卩g/mL。准确称取50.0mg （在五氧化二磷干燥器内至恒量的）分析纯 维生素B1盐酸盐，溶解于400ml#积分数为20%的酸性乙醇溶 液（4.5 ）中，并定容于500mlL棕色容量瓶中，于10 C左右贮 存。4

3、. 8. 2维生素B1中间液，浓度为10卩g/mLo吸取上述标准贮备液 5mL,用0.1mol/L盐酸（4.1 ）稀释至50mL,于10 C左右贮存。维生素b标准工作液吸取上述中间液1mL,稀释至50mL,现用现配。4. 9碱性铁氰化钾：取4毫升10g/L的铁氰化钾（4 .7 ），用 150g/L的氢氧化钠溶液（4.2 ）稀释至100mL,配好后置于暗 处4h内使用。4. 10荧光分光光度计。5. 方法5. 1抽提于150mL三角瓶中准确称取 2g左右样品，加盐酸（4.1 ）60mL,用铝箔纸盖住瓶口， 在137.2161.7kPa压力（125C） 下消化半小时，冷却后，用乙酸钠（ 4.4 ）

4、调pH值为4.5，然 后加5ml酶溶液（4.6 ），在37 C条件下保温过夜，过滤。5. 2氧化在两支25mL的试管中，分别5mL标样，在其中一个试管中，立即加入3mL碱性铁氰化钾（4.9 ），混匀，立即加入10mL正 丁醇，猛烈振摇15s以上，静止分层，待荧光测定，另一管 不加氧化剂，以3mL勺氢氧化钠（4.2 ）代替，作为空白。 同时吸取样液5mL于另两支试管中，作法同上。5. 3荧光测定从每一试管中吸上层清液于另一试管中，加少量无水硫酸钠 使溶液澄清，作荧光测定。6. 结果计算样品中维生素B1 （ug/100g ） = c U 口00（Isd I sb 产 m式中：I s样品荧光值；Ib样品空白荧光值；I sd标样荧光值；Isb标样空白荧光值；c标样

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