MMP-9与2型糖尿病大血管病变的关系及辛伐他汀治疗的影响

1、MMP-9与 2 型糖尿病大血管病变的关系及辛伐他汀治疗的影响目的：大血管病变是 2 型糖尿病 (DM)最常见的慢性并发症， 也是导致其死亡的首要原因。 其突出的病理变化是动脉粥样硬化(AS) ，近年的研究表明， 基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)对血管壁基底膜主要结构成分型胶原的过度降解是血管性疾病发生的起始， 与 AS的发生有密切的关系， 该基因理应成为研究AS的侯选基因。分子生物学研究发现在MMP-9基因启动子区 -1562bp 发生的 CT 可引起启动子转录活性的改变，被证实是有意义突变。辛伐他汀是内源性胆固醇合成限速酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂， 是目前应

2、用最为广泛的降胆固醇的药物，大量流行病学调查研究表明辛伐他汀除有降脂作用外，还具有抗AS作用。因此本研究的目的是通过检测了 2 型 DM患者血清中 MMP-9的水平，确定其基因型，以明确MMP-9在 2型 DM大血管病变发生中所起的作用及 MMP-9 C-1562T基因多态性与大血管病变的关系，为阐明 DM大血管病变发生的病理生理学机制提供理论依据；观察辛伐他汀治疗前后血清中 MMP-9的变化，以探讨辛伐他汀血管保护的作用机制。方法：在本研究中， 按 1997 年 ADA提出的 DM诊断和分型标准， 随机选择无任何亲缘关系的 2 型 DM患者共 220 例，根据其有无大血管病变分为单纯2 型糖

3、尿中文摘要病组 100 例和 2 型糖尿病大血管病变组” 120 例，正常对照组：为同期我院医务人员及常规体检人群中选择的健康个体门名。受试者过夜禁食12h后，均于晨起空腹抽取肘静脉血7M ，其中3用2乙二胺乙酸 uD”rA ）抗凝，保存在七 0C下，用于抽提基因组DNA，余 4m 常规分离血清，保存在 0。C 以下，用于临床生化指标的检测。对DM组中合并有高胆囵醇血症的思者在血糖良好控制的基础1 丁 给予口服辛伐他汀（默沙东人 sing ，每晚一次，四周后抽血复合。l ）MMP 9 基因型检测：基因组 mA的提取： EDTA抗凝血 3m ，用酚氯仿抽提法提取外周血R 细胞DNA ，紫外分光光

4、度法测定DNA的浓度和纯度。聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCRRFIP）检测 WP9 基因型：以外周血白细胞基因组DNA为模板进行 PCR扩增，上。下游引物序列分别为：5 GCCTGGCACATAGATGGCCC3、5 CI ”TCCTAGCCAGCCGGCATA3， 25ill的反应体系中含基因组DNA00ng、Taq 酶刊、 10XPCR缓冲液、 dNIP、B、及上、下游引物各2 5UI。在 PCR循环仪上 9C 预变性 sin i n 后，95C 变性 20s，50C 退火 30s，72C延伸 40s，完成 35 个循环，最后在 72C 延伸 7min，然后以限制性内切酶 SPh

5、进行酶解消化，最后对酶解产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据电泳条带的类型判断 Whl。个基因型。 CC基因型只有 435hP 片段， 1C型可见 247hP、188 和 435 三个片段，”型可见 247 和 188 卜 两个片段。2 ）临床指标的测定：用酶联免疫吸附的方法测定2中文摘要血清中MMP刁的水平；血糖、血脂的测定在全自动生 化分析仪上进行； 用免疫比浊法测定糖化血红蛋白 mbA ；放免法测定空腹血胰岛素，计算胰岛素敏感 指数 （IS 人测量身高、 体重、腰围和臀围， 计算体 重指数 mM）和腰臀 mHR人 3 ）统计学处理：所有数据均输入计算机，用 SPSS10 0 软件处理。胰岛素、

6、Lp 柏）呈非正态分布，经取自然对数后进行绞计处理，各组数据用均数士标准差以士 S）表 示，以 Hardy 丹 e i nberg 平衡法检验各组基因频率的群体 代表性，计量资料的组间比较用方差分析和 Q检验，治疗前后的比较采用配对t 检验；计数资料的组间比较用卡方 u 勺检验及秩和检验，相关分析用多元回归法分析， WPg基因型及其他各研究因素参与 2 型 DM大血管病变发生的危险性用 gistic回归分析。结果： DM组与正常对照组的年龄、性别构成比、 BM、WHR、吸烟史无显著性差别，具有可比性；糖尿病两组的Lp （a）、TG、TC、LDLCVLDLC 、ApoB、HbA显著高于正常对照组（ P0of ）， HDLC、 ISI 、APOA；低于对照组 u05 或0ofh2型糖尿病大血管病变组的Lp（a）、TG、 TC、LDLAI、 HbA高于单纯2型糖尿病组（K001），皿卜 C低于单纯 2 型糖尿病组（K0OI）；单纯2型皿组血清中删 P 个 的水平为 295gi士65 65ng。l ，显著高于正常对照组（ 13909 士6182n 召口二，