正确安装毛细管柱

1、正确安装毛细管柱毛细管色谱柱安装步骤1 检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等；2 将螺母和卡套装在柱上，并将色谱柱两端口小心切平;3 将色谱柱连于进样口上；4 接通载气；5 将色谱柱连于检测器上；6. 进行气体捡漏；7 确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查；8. 色谱柱的老化；9. 设置确定载气流速；10. 柱流失检测；11. 分析测试实验混合样品。需要的安装工具和附件1. 切割工具如金刚石头或碳头笔、宝石笔头或瓷楔；2. 放大镜10 20X；3. 标尺；4. 扳手；5. 卡套；6. 溶剂瓶；7. 干净的注射针；8. 适用的非柱保存化合物样品；9. 色谱柱测试混合样品；10. 流量计；11.

2、 其他附件：进样垫、干净的衬管、衬管卡套 /O形环等。步骤1 :检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查进样垫和气体过滤器，保证辅助气和检测器用气通畅有效。如果以前做 过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口衬管清洗或更换。步骤2：将螺母和卡套装在柱上，小心切平柱子两端口在色谱柱的一端装上相应的螺母和卡套， 此时色谱柱端口无前后之分，色谱 柱支架的支撑局部应总是朝向着柱箱门。 安装好螺母和卡套后，将色谱柱端口切 平，并用放大镜进行检查。熔融石英毛细管和切割将色谱柱所要切割的局部用一根手指顶住，用合 适的切割工具见需要的安装工具和附件列表在外壁轻轻的划上一个标记，不 要直接进行切割。然后捏柱子

3、在标记处折断。再使用放大镜对切割后的端口进行 检查，以确定切口和管壁成直角，并且没有残留的碎屑，没有毛边或不平的切割 面见图2。如果没有问题，最好在切割一次。卡套常用的色谱柱卡套有两种：石墨和石墨/Vespel。如果应用的是ECD 或GC/MS系统，不能使用石墨卡套。色谱柱的直径决定所用卡套的内径见表1。 使用不适宜的卡套不仅难于安装，而且很难保证连接处的密圭寸性，注意；Agile nt 的6890/5890型GC所用的卡套比常规的要短。表1。套的内径柱内径mm 0.1 0.5mm0.32mm0.53mm卡套内径mri0.4mm0.5mm0.8mm步骤3：色谱柱连于进样口上色谱柱在进样口中的嵌

4、入溶度根据所使用的 GC不同而不同。正确适宜的嵌 入能最大可能地保证实验结果的重现性。通常来说，色谱柱的顶端应保持在进样 口衬管中的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后， 如果针尖与衬管中的 色谱柱顶端相差1-2cm,这就是较为理想的状态具体的嵌入浓度和方法参见所 使用GC的随机手册。从色谱柱架上取出需要连接的足够的长度，并按步骤2切割柱子，连接到进 样口。防止用力弯曲压挤毛细柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与色 谱柱接触摩擦，以防柱身断裂或受损。连接螺母的安装：将色谱柱正确嵌入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧 后用手拧不动了用钣手再多拧1/4-1/2圈，如果色谱柱还有松动，在拧

5、1/4 圈，保证安装的密封程度。因为不紧密和安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有 可能对色谱造成快速永久的损害。在螺母完全连接后，小心不要再将色谱柱柱上 下移动。注意：如果在进样口或检测器有一定温度时安装色谱柱，安装效果可能会更好，因为卡套，特别是那些材质为石墨/Vespel的，在一定温度下会软化，易变形， 也就更容易封住所要密封的部位。 色谱柱装好后，等进样口或检测器的温度降下 来，再安装其他部件。步骤4：接通载气当色谱柱与进样口连接好后，接通载气。调节柱前压力得到适宜的载气流速 见表2。在色谱柱的另一端空端，插入装有己烷的样品瓶中，正常情况 下，我们可以看见瓶中稳定持续的气泡，如果没有气泡，

6、就要重新检查一下整个气路有无泄漏。等所有问题解决后，将色谱柱端口从瓶中取出，擦拭干净，保证 柱端口无溶剂残留，再进行下一部安装。警告：当空气中氢气的含量在4-10%时，这样的混合气体就有爆炸的危险。 虽然气体本身的扩散会降低爆炸的可能，但还是有一定的危险性，所以一定要保证实验室有良好的通风系统，防止氢气过分的聚集。表2。柱前压设置pisig 柱长m柱内径mri0.25mm0.32mm0.53mm15m8-125-101-225/30m15-2510-202-450/60m30-4520-305-1075m5-10105m7-15以上仅为建议的起始设置，具体数值要依据实际的载气速率，或如步骤9中

7、的流量设置而定。步骤5：将色谱柱连于检测器上其安装和所需注意的事项与以上色谱柱与进样口联接步骤 3局部所讲述 的大致相同。如果在应用中系统所使用的是 ECD或是NPD等，那么在老化色谱柱 时，使它不与检测器相接，那么这一类的检测器会更快地到达稳定， 关于色谱柱 老化请见步骤8的内容。步骤6:进行气体检漏在色谱柱加热前，一定要对 GC系统进行检漏，当我们对进样口和检测器进 行载气捡漏时，使用电子检漏是最为有效的方法之一。 建议不要使用Snoop等肥 皂泡，它有可能由被检测处进入色谱柱和其它装置中，从而对系统有所损害。而 且不能使用Snoop对正在加热的进样口和检测器装置进行检漏。如果一定要用液

8、体检漏，建议使用50/50的异丙醇/水的混合溶液。步骤7:确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查 警告：如果不通入载气就对色谱柱进行加热操作，就会快速并且永久性地损坏 色谱柱。当色谱柱安装好后，在依照步骤4对载气流量进行确定，或者使用非保存化 合物样品进行检测，我们可以通过分析得到的样品谱图来确定进样口和检测器的 安装是否正确。表3 中列出了常用的非保存化合物样品。实验过程：如果使用分流/不分流进样口，将色谱柱的温度保持在 35-40 C, 使用分流模式进1-2mL样品。如果使用的是不分流大口径进样口，由于样品不被 分流进样，进样前应先对样品进行稀释，以免得到饱和的平头峰形。这样，我们 应该得

9、到一张峰形锋利的谱图，而使用不分流大口径进样口，色谱柱可能会有轻 微拖尾。如果得不到色谱图，有可能是根本就没有载气通过系统。那就需检查一 下调节器、气体附件和流量控制器的设置是否正确。当然也可能是检测器、记录 仪和注射针等出了问题。如果色谱峰有明显的拖尾现象，可能是进样口有泄漏， 或是色谱柱安装不完整，也有可能是分流比设置得太低等。我们需要重新对色谱 柱进行安装并对进样口进行检漏。只有完全解决了这个问题，才能进行下一步。表3。常用的非保存化合物样品检测器化合物1FID甲烷，乙烷TCD甲烷，乙烷，氩气，空气ECD二氯甲烷 2，SR, CFC1NPD乙腈2, 3PID乙烯，乙快MS甲烷，乙烷，氩气

10、，空气1 对于PLOT柱，以上大多数化合物都有明显地保存吸附2 不要直接液体进样；建议使用顶空进样装置3 当温度小于是100C时，乙腈在大多数的色谱中都有保存。使用时需将色谱柱的温度提高到100C或设置更高的线速度步骤8:色谱柱的老化色谱柱安装和系统检漏工作完成后， 就可以对色谱柱进行老化了。对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高操作10-20 C左右。但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。升 温速度一定要快， 不要将程序声升温的速度设定的太慢。 当得到老化温度后， 记 录并观察基线。比例放大基线，以便容易观察。初始阶段，基线应持续上升，在 到达

11、老化温度后 5-10 分钟开始下降，并且会持续 30-90 分钟。当到达一个固定 的值后，基线就会稳定下来。 如果在 2-3 小时后基线仍无法稳定在 15-20 分钟后 仍无明显的下降趋势， 那么有可能系统装置有泄漏或污染。 遇到这样的情况， 应 立即将柱温降至40C以下，尽快地检查系统并解决相关问题。如果还是继续地 老化，不仅对色谱柱有损害，而且始终得不到正常稳定的基线。另外，老化的时 间也不宜过长，不然会降低色谱柱的使用寿命。一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间较长， 而弱极性固 定较厚涂层的色谱柱所需的时间较短。而 PLOTfe谱柱的老化方法又各不相同， 具体步骤请参阅随柱

12、子的操作说明书。如果在色谱柱没有与检测器连接就进行老化， 那么老化后， 色谱柱末端局部 可能已被破坏。要先把柱子末端 10-20cm 局部截去，再将色谱柱连接到检测器上。温度限定是指色谱柱能够正常使用的应用温度范围。 如果操作温度低于色谱 柱的温度下限， 那么别离效果和峰形都不会很理想。 但这样对色谱柱本身并无什 么损害。温度上限通常有两个数值， 数值较低的是恒温极限。 在此温度下， 色谱柱可 以正常使用， 而且无具体的持续时间限制。 较高的数值是程序升温极限。 该温度 的持续时间通常不多于十分钟。高于温度上限的操作那么会降低色谱柱的使用寿 命。步骤 9：设置确认载气流速对于毛细管色谱柱， 载

13、气的种类首选高纯氦气或氢气。 建议不要使用氮气做 载气。载气的纯度最好大于 99.995%，而其中的氧气含量越少越好。通常载气级 或超高纯度氦气和氢气中氧气的含量小于 2ppm。如果您使用的是毛细管色谱柱， 那么依照载气的平均线速度 载气流动的速 度cm/sec而不是利用载气流速载气流量 mL/min来对载气作出评价，这样 不仅简单而且非常方便。 因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度， 而不是体 积流速。我们进一针非保存样品见表3,确定它的保存时间。然后按以下公式计算平 均线速度VV = L/trV =平均线速度cm/sec L =平均线速度cm/sectr = 非保存样品色谱峰的保存时间s

14、ec 推荐平均线速度值：He, 30-40 cm/sec ； H2，5080cm/sec不要使用色谱仪上的流量计去设置载气流速，可能不准，表4中列出了非保留样品色谱峰的保存时间和对应的流速范围。大多数情况下，采用流速范围的中间值较为适宜，载气速度流速会随着柱温的改变而改变，请在温度恒定的情 况下测量其具体数值。表4。在几种推荐的线速度下非保存样品的保存时间min氦气He色谱柱长度m线速度cm/ses303540150.830.710.63251.391.191.04301.671.431.25502.752.382.08603.332.862.50754.173.573.311055.835.

15、004.38氢气1-2色谱柱长度线速度cm/sec506080(m)150.500.420.31250.830.690.52301.000.830.63501.571.391.04602.001.671.25752.502.081.561053.502.922.19载气杂质过滤器：在载气的管线中参加气体过滤器装置不仅可以延长色谱柱 寿命，而且很大程度地降低了背景噪声。 参考以下图，建议最好安装一个高容量氧 气或一个可指标氧气过滤器。而在氧气过滤器前再安装一个水分过滤器，不仅可 以延长氧气过滤器的使用寿命，而且可以降低背景噪声，使用ECD系统时，最好 能在其辅助气路中安装一个氧气过滤器。步骤10

16、：柱流失检测在色谱柱老化过程结束后，利用程序升温做一次空白实验不进样。一般 是以每分钟10 C从50 C升至恒温极限，到达恒温极限后保持10min。这样我们就可以得到一张流失图见图3。我们可以看出到一定程度，基线会快速上升。 使用记录装置将基线记录下来，并记录下50 °C和恒温极限的信号值。这些数值可能对今后做比照试验和实验问题解决有帮助。色谱柱 DM-5 ，30m x 0.25mmx 0.25um货号 7221载气 He at 40cm/sec温度 50-325°C at 10/min325C for 5 min进样分流1 : 100, 250 C检测器FID, 300

17、CN 2 makeup gas at 30mL/min在空白实验的色谱图中，不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱 峰，通常可能是从进样口部位来的污染物。 如果在正常的使用状态下， 色谱柱的 性能开始下降，基线的信号值将会增高。另外，如果在很低的温度下，基线的信 号值明显大于初始值 与最初使用得到的结果比拟 ，那么最有可能的是色谱柱 和GC系统有污染。步骤 11：分析实验混合测试样品 最后，我们利用对混合测试样品的分析来确定色谱柱的安装和性能， 建议使 用我们提供的对色谱柱质量检定所提供的标准样品。 有时，对于一些比拟特殊的 分析，我们采用适宜鉴定系统性能的样品进行分析。 每一根新色谱柱都带有一张

18、 柱性能测试谱图， 在相同于图中实验条件和测试样品的情况下， 我们应该得到与 标准测试相同或相近的谱图。如果试验的重复性很差，有可能是色谱柱的安装， 实验的操作或仪器本身出现了问题。 那么在正式做其他样品之前， 要解决掉所出 现的问题。其他色谱柱的保存 ：用进样垫将色谱柱的两端封住，并放回原包装。再安装时， 要将色谱柱的两端截去一部份，保证没有进样垫的碎屑残留与柱中。毛细柱化学稳定性： 键合和交联固定相不会因为样品中有水或有机溶剂而受 到损坏。如果分析结果不理想，有可能是有其他一些溶剂和固定相产生了作用， 但对色谱柱一般没有什么损害。尽量不要使样品中含有机酸盐酸，硫酸，磷酸 和硝酸等和碱氢氧化

19、钾和氢氧化钠等，它们对固定相有很大的破坏。如果 出现了化学性的损害，截去柱前端 0.5-1 米，一般都可以确保柱性能的恢复。非键合相毛细柱在进样过程中极易流失，建议在色谱柱前加上 3-5 米的预 柱。这样可以最大限度地减少固定相的损坏， 特别是在采用柱上进样和不分流进 样时。毛细管柱分析故障排除1. 分流进样方式现象可能的原因解决方法峰面积低，峰丧失，产生进样口太热降低进样口温度50 C新峰进样口太脏清洗/更换衬管与金属接触用玻璃柱衬管化合物易变衍生化样品或冷柱头进样活性填充去除填充物活性衬管使用硅烷化衬管停留时间太长增加柱流量或增加分流量迟洗脱物的面积低溶剂沸点太低使用咼沸点溶剂针污染进样口温度太低增加进样口温度50 r针停留时间太长使用快速自动进样器进样口歧视进样口温度太高降温50 r进样口停留时间太短降低分流流量衬管中无玻璃毛更换衬管衬管位置不对衬管聚中分流太高降低分流流量进样量太大降低进样量宽峰分流速太低增加分流流量进样口脱附更换衬管移去填充物增加进样的温度色谱柱过载增加分流流量面积不重复分流比波动检