三种白酒中微量氰化物检测方法的比较

1、三种白酒中微量氰化物的检测方法的比较摘要：研究和分析了分光光度法、离子色谱法、自动顶空 -气相色谱法三种测定白酒中微量氰化物的方法， 比较了三种方法测定的线性相关性、 方法稳定性和加标回收率。经过实验研究表明，所建立的自动顶空 -气相色谱法方法较稳定，线性相关性较好， 操作简单， 结果精准，适用于白酒企业大量样品中微量氰化物的日常检测。氰化物是指带有氰离子（ CN-）或氰基（ -CN）的化合物，通常为人所了解的氰化物都是无机氰化物， 速称山奈或山埃。 白酒中的氰化物是由含有氰糖苷的原料在发酵过程中水解产生的， 其中氢氰酸（HCN）的毒性较强，最低致死量为 0.05g。目前，白酒中氰化物的检测方

2、法较多， 主要有滴定法、分光光度法、原子吸收法、荧光法、离子色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。对于蒸馏酒中氰化物的测定，国家标准分析方法为 GB/T 5009.48中的异烟酸 -吡唑酮分光光度法， 但是，在实际样品测定中出现了较多问题：在加入显色剂后，很多样品出现浑浊现象，甚至某些样品显黄绿色、 黄色，引起测定结果不准确或者是无法测定， 针对上述情况，我们研究了分光光度法测定白酒中氰化物的改进方法， 采用强碱固定白酒中的氰化物，以异烟酸 -巴比妥酸为显色剂对白酒中的氰化物进行测定。在采用离子色谱仪测定白酒中氰化物时，发现直接对白酒稀释过滤后进样分析不可行，稀释 10 倍样品中目标物峰面积与

3、稀释 20 倍样品中目标物峰面积不成倍数关系，针对离子色谱法中存在的问题， 我们研究了碱固定法和硫酸回流法对白酒样品进行前处理。针对白酒中微量氰化物的测定， 我们还研究了自动顶空 -气相色谱法，并对比分析了所建立的分光光度法、离子色谱法和自动顶空 -气相色谱法，通过测定相同白酒样品中的氰化物来考察这些方法的稳定性、 准确性、实用性，以为白酒中微量氰化物的测定提供参考。1 材料与方法1.1 仪器与试剂仪器水浴锅； CARY300紫外分光光度计；戴安3000 离子色谱仪；安捷伦7890 气相色谱仪（带自动顶空进样器） ；水浴锅；全玻蒸馏器；电炉标准溶液氰化物标准溶液（ 50mg/L，1 mg/L，

4、500g/L）试剂氢氧化钠溶液（ 2g/L，12g/L， 20g/L）；磷酸二氢钾缓冲溶液（136g/L）；氯胺 T（10g/L）；磷酸溶液（ v/v=1:5）异烟酸 -巴比妥酸溶液： 称取 2.0g 异烟酸、 1.0g 巴比妥酸，溶于 100mL 12g/L的氢氧化钠溶液中，避光低温（4）条件下可存放一个月。样品白酒样品： jc-11.2 实验方法分光光度法样品的蒸干处理准确吸取 10mL白酒样品于 100mL小烧杯中，加20g/L 的氢氧化钠溶液 5.0mL，95水浴蒸干后，以蒸馏水溶解定容至50mL。标准曲线的制作分别吸取 0、0.25 、0.5 、1.0 、 1.5mL、2.0mL氰化

5、物标准溶液（ 1mg/L）于 5个 10mL比色管中，加入 2g/L 的氢氧化物溶液至 5mL。样品及标准品的显色与测定取 5mL经处理后的样品于 10mL比色管中，在样品管及标准管中加入 2.5ml 磷酸二氢钾缓冲溶液和 0.25ml 氯胺 T 溶液 , 混匀后放置 5min ，然后加入 2ml 异烟酸 - 巴比妥酸显色剂 ，定容至 10ml，于室温（ 25）下显色 15min，以 0 号标准管为参比 ，用 4cm 比色管在 598nm波长下比色。以氰化物质量为横坐标 ，吸光度为纵坐标 ，绘制标准曲线 ，由曲线上查得样品中氰化物的质量 ，计算含量。离子色谱法样品的前处理方法一：准确吸取 10

6、mL 白酒样品于 100mL 小烧杯中，加 20g/L 的氢氧化钠溶液5.0mL，95水浴蒸干后，以蒸馏水溶解定容至 50mL。样品的前处理方法二：准确吸取 100mL 于蒸馏烧瓶中，加入浓硫酸10mL 后迅速连接蒸馏装置，用 100mL 容量瓶接取冷凝液体约70mL，用蒸馏水定容至100mL。标准曲线的制作采用蒸馏水稀释浓度为1mg/L 的氰化物标准溶液，分别配制浓度为 25g/L 、50g/L 、100g/L、 200g/L的标准溶液，进离子色谱仪分析。的氰化物标准溶液样品的分析采用 Metrosep A 作为分离柱，以 0.1mol/L 氢氧化钠为淋洗液，淋洗速度 1mL/min ，安培

7、检测器工作电压为 80mV。经前处理后的样品过 0.2m 后进样分析。自动顶空 -气相色谱法实验条件顶空条件：孵化温度： 50；孵化时间： 10min；震动频率： 250rmp/min;进样针温度： 60；进样量： 500uL，吸样速度： 250 L/s，进样速度： 500L/s。色谱条件：HP-5毛细管色谱柱（30m×3.0mm×0.25 m），进样口温度：150；不分流进样；载气流速：30mL/min；柱温箱： 35持续 4min后以 20/min 升至200，持续 4min；检测器温度： 260。工作曲线-吸取 50mg/L的CN标准溶液 0.25mL于25mL容量瓶

8、中，用蒸馏水定容，得到浓-度为 500g/L 的 CN标准溶液。分别吸取9.55mL、 9.5mL、9.4mL、 9.2mL、8.8mL蒸馏水于 5个 20mL的顶空瓶中，依次加入50 L、100 L、200 L、400L、800- L的 500g/L 的CN标准溶液，再分别向每只顶空瓶加入200L磷酸溶液和200 L氯胺 T溶液，迅速拧紧瓶盖，轻轻晃动顶空瓶使得瓶内液体混匀后放入进样盘。样品的测定向20mL顶空瓶中加入 9.2mL蒸馏水，加入待测酒样400 L，再分别加入 200 L磷酸溶液和 200L氯胺 T溶液，迅速拧紧瓶盖，以下同标准曲线操作。2 结果与分析2.1 线性相关性分光光度法

9、线性相关性分别对质量浓度为 50g/L 、100g/L、200g/L、300g/L、400g/L的氰化物按照操作步骤处理后进行分析，以被测组分在598nm下的吸光值为纵坐标（Y），以质量浓度（ X）为横坐标，得到相关曲线 Y=0.0219X-0.00954 ，相关系数 R=0.9996。表明氰化物在质量浓度 0.050.4mg/L之间有良好的线性关系。离子色谱法线性相关性采用离子色谱仪，分别对质量浓度为25 g/L、50 g/L、100 g/L、200 g/L的氰化物标准溶液进行分析，得到相关曲线Y=0.0219X-0.00954 ，相关系数R=0.9996。表明氰化物在质量浓度0.050.4

10、mg/L 之间有良好的线性关系。自动顶空 -气相色谱法线性相关性CN-浓度在 2.540g/L之间呈线性，一元线性回归方程为Y= 20.944 X-278.43，相关系数 r=09995。2.2 方法精密度及加标回收率分光光度法的精密度及加标回收率取白酒样品 jc-1 8 份，每份各 10mL，向其中 3份中分别加入 50mg/L的氰化物标准溶液 50L、100L、200L，按步骤和处理后测定方法精密度和加标回收率，其结果见下表：表1分光光度法精密度编号Jc-1-1Jc-1-2Jc-1-3Jc-1-4Jc-1-5RSD（%）含量501.5541.5538505.05213.52（g/L ）表

11、2分光光度法加标回收率加标量（ g/L ）2505001000测定值（ mg/L ）76910931453.5回收率（ %）99.5114.093.2改进后的分光光度法效果较好，在加入异烟酸 -巴比妥酸显色剂后，样品没有出现浑浊现象， 且所有的样品均呈蓝紫色。 从表 1 和表 2 可以看出，改进后的分光光度法精密度较好，加标回收率高，回收率在 93.2%-114%之间。离子色谱法的精密度取白酒样品 jc-1 8 份，每份 10mL，向其中 3 份中分别加入 50mg/L 的氰化物标准溶液 50L、100L、 200L，8 份样品均按处理；另取酒样 jc-1 8份，每份 100mL，向其中 3

12、份中分别加入 50mg/L 的氰化物标准溶液50L、100L、200L，8 份样品均按处理；所有样品经0.2 m滤膜过滤后进样分析，计算方法精密度，结果如下：表 3方法精密度一编号12345含量50.10020.637.8( g/L)表 4方法精密度二编号12345含量43.227.958.156.328.4( g/L)经碱固定法前处理后的样品在进入离子色谱仪分析后，有两个样品中目标物没有出峰，另外三个样品中目标物虽有出峰，但峰面积相差较大； 采用硫酸回流法处理后的酒样经分析后，虽然所有样品均有出峰，但是峰面积同样相差较大，从表 3 和表 4 可以看出，经标准曲线计算后， 两种方法处理后的酒样

13、中氰化物含量差别都较大，方法精密度差，无法对酒样中微量氰化物进行定量分析。自动顶空 -气相色谱法的精密度及加标回收率在顶空条件和色谱条件不变的情况下，对酒样jc-1在不同时间进行测定5次，结果见表 5；对酒样 jc-1分别加入 25g/L、50g/L 、75g/L 的标准溶液，进样分析后计算加标回收率，结果见表6。表 5 自动顶空 -气相色谱法精密度试验结果测量次数12345RSD(%)氰化物含量52514948474.20表 6 顶空 -气相色谱法 加标回收率加标量回收率（ %）25g/L73%50g/L80%75g/L84%从表 5可以看出，采用自动顶空- 气相色谱法 5次测定 jc-1

14、酒样中氰化物含量结果的 RSD为 4.20%，精密度较高；从表 6可看出，酒样 jc-1 的加标回收率在 73%-84%，加标回收率较高。从表 1和表 5可看出，虽然分光光度法和自动顶空 - 气相色谱法的精密度、加标回收率均较好， 但是测定出样品 jc-1 中的氰化物含量却相差巨大。 分光光度法原理是酒中的氰化物在弱酸性条件下与氯胺 T反应生成氯化氢，氯化氢与异烟酸反应经水解生成戊烯二醛， 再与巴比妥酸反应生成蓝紫色络合物。 白酒中微量组分较多，可能存在与戊烯二醛结构相类似的物质， 同样能与巴比妥酸反应生成蓝紫色络合物，从而引起测定结果偏高。而自动顶空 - 气相色谱法通过测定气相中的氯化氢来间

15、接对酒样中的微量氰化物进行定量分析，样品经过 50低温孵化，可挥发到气相中的组分较少， 且经过了色谱柱的分离， 目标物所受干扰较少。 相比分光光度法，自动顶空 - 气相色谱法测定结果更精准。3 结论本次试验研究了三种测定白酒中微量氰化物的方法：分光光度法、离子色谱法、自动顶空 - 气相色谱法，比较了这三种方法的线性、稳定性和准确性，经过实验研究表明，自动顶空气相色谱法方法较稳定， 线性相关性较好，操作简单，成本低廉，结果精准，适用于白酒企业大量样品中微量氰化物的日常检测。出师表两汉：诸葛亮先帝创业未半而中道崩殂， 今天下三分， 益州疲弊， 此诚危急存亡之秋也。然侍卫之臣不懈于内，忠志之士忘身于

16、外者，盖追先帝之殊遇，欲报之于陛下也。诚宜开张圣听，以光先帝遗德，恢弘志士之气，不宜妄自菲薄，引喻失义，以塞忠谏之路也。宫中府中，俱为一体；陟罚臧否，不宜异同。若有作奸犯科及为忠善者，宜付有司论其刑赏，以昭陛下平明之理；不宜偏私，使内外异法也。侍中、侍郎郭攸之、费祎、董允等，此皆良实，志虑忠纯，是以先帝简拔以遗陛下：愚以为宫中之事，事无大小，悉以咨之，然后施行，必能裨补阙漏，有所广益。将军向宠，性行淑均，晓畅军事，试用于昔日，先帝称之曰愚以为营中之事，悉以咨之，必能使行阵和睦，优劣得所。“能 ”，是以众议举宠为督：亲贤臣，远小人，此先汉所以兴隆也； 亲小人， 远贤臣，此后汉所以倾颓也。 先帝在时，每与臣论此事， 未尝不叹息痛恨于桓、 灵也。侍中、尚书、长史、参军，此悉贞良死节之臣，愿陛下亲之、信之，则汉室之隆，可计日而待也。臣本布衣，躬耕于南阳，苟全性命于乱世，不求闻达于诸侯。先帝不以臣卑鄙，猥自枉屈，三顾臣于草庐之中，咨臣以当世之事，由是感激，遂许先帝以驱驰。后值倾