细菌多重耐药外排泵抑制剂研究进展

1、细菌多重耐药外排泵抑制剂研究进展【摘要】细菌耐药性，尤其是多重耐药性(multidrugresistance,MDR)己经成为超级严峻的医疗问题，而多种类型细菌外排泵(effluxpumps)的存在是细菌多重耐药的重要机制，因此寻觅有应用前景的外排泵抑制剂(effluxpumpinhibitors,EPI)是十分必要且迫切的。目前己经发觉外排泵抑制剂的作用机制分为：(1)干扰外排泵组装；(2)阻断外排泵能量来源；(3)阻碍底物通过外排通道；(4)机制未知。本文依照作用机制对己经发觉的细菌多重耐药外排泵抑制剂的特点进行分述。【关键词】细菌多重耐药性外排泵抑制剂Advancesintheresea

2、rchonbacterialmultidrugresistanceeffluxpumpinhibitorsABSTRACTBacterialresistancetoantibiotics,especiallythemultidrugresistance(MDR)hasbecomeaseriousproblemofhealthcare.Theexistenceofvariouskindsofeffluxpumpsisoneoftheimportantmechanismsofbacterialresistance.Itisexigenttodiscovertheeffluxpumpinhibito

3、rswhichcouldbeusedinclinic.Sofar,variouskindsofeffluxpumpinhibitorshavebeendiscovered.Theirmechanismsofactionare(1)interferingtheassemblingofeffluxpumps,(2)blockingtheenergysupplyofeffluxpumps,(3)hinderingthetransitofsubstratesthroughtheeffluxtunneland(4)unknownmechanism.Accordingtothemechanismsofac

4、tion,thecharactersofbacterialmultidrugresistanceeffluxpumpinhibitorsdiscoveredbyfarweresummarizedinthisreview.KEYWORDSBacterialmultidrugresistance;Effluxpump;Inhibitor伴随着抗生素的普遍利用，各类类型的耐药菌不断显现，抗感染医治面临着严峻的挑战。细菌外排作用是细菌产生耐药性的重要途径。目前己经发觉了5个外排泵类型，它们是：ATP结合盒超家族(ATPbindingcassettesuperfamily,ABC),小多重耐药家族(sm

5、allmultidrugresistancefamily>SYR),要紧易化子超家族(majorfacilitatorsuperfamily,MFS),多药及毒性化合物外排家族(multidrugandtoxiccompoundextrusionfamily,MATE)和耐药节结化细胞分化家族(resistance/nodulation/celldivisionfamily,RND)Llo从底物特异性上看，外排泵又分为特异性外排泵和多重耐药外排泵。前者如包括肠杆菌和铜绿假单胞菌在内的多种革兰阴性菌表达的TetAE,G,H外排泵，对四环素类抗生素有特异外排作用；后者散布更为普遍，如铜绿假单

6、胞菌MexABOprM外排泵，金葡菌NorA外排泵2等等。多重耐药外排泵底物谱广，而且可之外排大量的结构迥异的抗生素及其他有毒物质，例如铜绿假单胞菌MexABOprM外排泵的外排底物有大环内酯类、唾诺酮类、四环素类、3内酰胺类抗生素和氯霉素、林可霉素、新生霉素等等。多重耐药外排泵普遍存在于各类病原菌中，对细菌的药物灵敏性和细菌性感染的临床医治阻碍专门大。例如过量表达MexABOprM外排蛋白的铜绿假单胞菌菌株比MexABOprM的基因敲除菌株的左氧氟沙星M1C高64倍3,临床分离的高表达orA外排泵的金葡菌株较野生菌株对诺氟沙星和环丙沙星MIC别离提高了16倍和816倍4o同时，外排泵的存在降

7、低了胞内抗生素浓度，低浓度抗生素环境中易产生耐药突变株。目前已经发觉了一些具有细菌外排泵抑制活性的化合物,但目前尚未一种能够用于临床医治，外排泵抑制剂类药物的研发工作任重而道远。本文概述了迄今发觉的具有细菌多重耐药外排泵抑制活性的化合物和它们的作用特点。1干扰外排泵组装的外排泵抑制剂Globomycin是一种链霉菌来源的环肽结构的抗生素，它是脂蛋白信号肽酶LspA的抑制剂，通过抑制LspA从而抑制含有LspA剪接位点的膜融合脂蛋白前体的加匚。大肠埃希菌(Escherichiacoli)和产气肠杆菌(Enterob软cteraerogenes)组成性表达RXD型外排泵AcrABTolC的组件Ac

8、rA前体含有LspA的剪接位点，在globomycin的作用下不能形成成熟的AcrA,也不能和外排泵的其他组分结合形成外排泵，抑制了外排泵的作用。文献报导75nmol/Lglobomycin能够使表达AcrABTolC的产气肠杆菌的氯霉素MIC降低至原值的1/4,其外排泵抑制能力与CCCPdOOUmol/L)fflR,低于PAPN(100umol/L,MIC降低至原值的1/8)5o2阻断外排泵能量来源的外排泵抑制剂(图1)除ABC型外排泵是依托ATP水解驱动外，其余四种外排泵SMR、MFS、MATE和RXD均由质子动力势驱动1。对细菌多重耐药外排泵抑制剂的研究发觉，以阻断外排泵能量来源为机制的

9、外排泵抑制剂要紧针对证子动力势，依照作用机制又分为解偶联剂和离子载体两种类型。这种抑制剂在抑制细菌外排泵的同时也会抑制机体正常的质子动力势驱动的生理反映，缺乏特异性，因此难以用于临床医治。解偶联剂化学合成来源的抑制剂谈基氟间氯苯腺(carbonylcyanidemchlorophenylhydrazone,CCCP）。分子解离状态下，负电荷散布于分子中的多个原子，分子周围的电场很弱，可在磷脂膜双侧自由扩散，传递质子以破坏跨膜电化学梯度，因此它是很强的解偶联剂。CCCP作为外排泵抑制剂对SMR型外排泵（如大肠埃希菌QacE）、MFS型外排泵（如金葡菌NorA）、MATE型外排泵（如多形拟杆菌No

10、rM）和RND型外排泵（如铜绿假单胞菌MexABOprM,大肠埃希菌AcrAB和AcrEF,产气肠杆菌AcrABTolC,空肠弯曲杆菌CmeABC）等均有抑制作用510。例如，100Umol/L的CCCP能够使表达AcrABTolC的产气肠杆菌的氯霉素MIC降低至原值的1/45o（2）临床药物来源的抑制剂兰索拉噗（lansoprazole）和奥美拉哇（omeprazole）临床上用于医治消化性溃疡。己证明它们能够抑制金葡菌NorA外排泵，在100Ug/ml浓度下可使XorA高表达株的诺氟沙星、环丙沙星和左氧氟沙星MIC降低至原值的1/41/8,推测其机制与CCCP相似4。另外，兰索拉畦还能够抑

11、制和NorA同源的粪肠球菌（Enterococcusfaecalis）EmeA外排泵11。离子载体由链霉菌产生的valinomycin和nigericin均为钾离子载体。Valinomycin能与K+配位结合形成脂溶性复合物，穿过质膜，将膜外K+输送到膜内，从而破坏膜电位力oNigericin能够使H+和K+互换,破坏pH梯度。二者均能够干扰跨膜电化学质子梯度，抑制外排泵。文献报导它们能够抑制金葡菌QacA外排泵，在4Umol/L浓度下使细胞内乙啡咤的积存量提高约3倍12,它们还能够抑制肺炎链球菌(Streptococcus阻断外排泵能量来源的外排泵抑制剂pneumoniae)对氟喳诺酮类等化

12、合物的外排泵。3阻碍底物通过外排泵通道的外排泵抑制剂(图2)化学合成来源的此类抑制剂二胺类化合物LPheLArgBnaphthylamine(PAPN,即MC207110)是发觉最先的铜绿假单胞菌MexAB0prM>MexCDOprJ和MexEFOprN等RND型外排泵抑制剂，40Ug/ml的PABN可将上述三种外排泵高表达株的左氧氟沙星MIC降低至原值的1/60,其机制是结合外排泵相应位点以阻止其他底物与该位点的结合3oPABN除能抑制铜绿假单胞菌RND型外排泵，还可抑制其他一些革兰阴性菌的RND型外排泵，如沙门菌属AcrAB、大肠埃希菌、产气肠杆菌AcrABTolC等1317。固然，

13、并非所有革兰阴性菌的R疝型外排泵都能够受到PABN的抑制，例如其不能抑制类鼻疽伯克菌(Burkholderiapsetidomallei)的RND型外排泵18,也不能抑制嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)的SmeDEF外排泵对环丙沙星和四环素的外排作用19,乃至还会增加铜绿假单胞菌MexXYOprM外排泵对氨基糖苗类药物的外排作用，其确切的作用机制有待证明20。DOrnDhPhe3aminoquinoline(MC02595)是另一种具有抑制铜绿假单胞菌RND型外排泵活性的二胺类化合物，活性和PA8N相似，在510Ug/ml均能够使左氧氟沙星MIC降低至

14、原值的1/8倍，可是这两种二胺类化合物对小鼠表现出明显的毒性，因此不能直接用于临床医治21。通过结构优化，取得了诸如MC04124的活性不减，毒性更小(毒性降至原值的1/4以下)的化合物21。对MC04124己经进行了小鼠急毒和大鼠药动学实验22,但未见后续研究报导。某些喳咻(quinoline)衍生物对产气肠杆菌和肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)临床分离株的AcrABTolC外排泵具有抑制活性，如某些喳咻的吐咤23、烷氧氨基24、烷氧基25和硫代烷氧基26衍生物。通过构效关系研究推测这种衍生物的作用机制可能是结合或遮盖外排泵中的底物结合位点，阻止底物的运输27。目前未

15、见关于此类化合物的临床研究报导。临床药物来源的此类抑制剂利血平(reserpine)是一种生物碱，临床上用于医治高血压。从目前报导显示，利血平关于MFS和ABC型外排泵具有抑制作用28。Ahmed等通过特定位点氨基酸取代推测出了利血平在枯草芽狗杆菌(Bacillussubtilis)Bmr夕卜排泵上的结合位点29,其作用机制为竞争性抑制。己有的报导证明利血平能够抑1：二胺类(MC207110,MC02595,MC04124)；2：部份具活性的喳咻衍生物；3：利血平；4：维拉帕米图2阻碍底物通过外排泵通道的外排泵抑制剂制多种多重耐药外排泵，如MFS型外排泵枯草芽狗杆菌Bmr、金葡菌NorA、肺炎

16、链球菌PmrA和ABC型外排泵粪肠球菌EfrAB、Non01霍乱弧菌VcaM等28,3034。利血平活性良好,20ug/ml浓度时能够使表达NorA外排泵的金葡菌诺氟沙星MIC降低至原值的1/164。但是关于人体而言，它实现外排泵抑制活性所需要的浓度可致使神经毒性，因此未能直接用于临床医治35。维拉帕米(verapamil)在临床上属于IV类抗心律失常药,为钙离子内流阻滞剂。对维拉帕米抑制P糖蛋白(Pglycoprotein)的研究说明，维拉帕米与外排泵有相应的结合位点。文献报导其能够抑制多种MFS型(如粪肠球菌EmeA和金葡菌NorA)及ABC型(如粪肠球菌EfrAB,结核分枝杆菌DrrAB

17、、Rv2686cRv2687cRv2688c)外排泵4,11,28,32,36,37。100/g/ml维拉帕米能够使表达NorA外排泵的金葡菌诺氟沙星MIC降低至原值的1/44,但目前未见将对其进行临床研究的报导。4机制未知的外排泵抑制剂这种抑制剂机制尚未明确，也没有效于临床研究的报导(图3)0天然产物来源的此类抑制剂一些黄酮类化合物能够抑制金葡菌XorA外排泵的活性，如小桀属植物中的黄酮木脂素类化合物5,methoxyhydnocarpinD38,植物Daleaversicolor的代谢产物46'dihydroxy3',5'dimethyl2'methoxyc

18、halcon39,从老鹳草属植物Geraniumcaespitosum中提取的些polyacylatedneohesperidosides40,和天然产物epicatechingallate和epigallocatechingallate41o能够抑制金葡菌NorA外排泵的还有从麻风树属植物Jatrophaelliptic3中提取的生物碱2,6dimethyl4phenylpyridine3,5dicarboxylicaciddiethylester42,来源于小桀属植物的吓咻类化合物脱镁叶绿甲酯酸A(pheophorbidA)38,和从迷迭香属植物迷迭香中提取的松香烷二菇类化合物鼠尾草酸(c

19、arnosicacid)43。另外Daleaversicolor的代谢产物3,5,1：5'MethoxyhydnocarpinD；2：4',6'Dihydroxy3',5'dimethyl2'methoxychalcon；3：EpicatechingallateSamp;epigallocatechingallate；4：2,6dimethyl4phenylpyridine3,5dicarboxylicaciddiethylester；5：PheophorbideA；6：Carnosicacid；7：一种具活性的芳基哌嗪类化合物；8：吩塞秦、唾吨

20、类药物（氯丙嗪和顺式氟哌唾吨）图3机制未知的外排泵抑制剂trimethoxytransstilbene能够抑制蜡状芽孑包杆菌(Bacilluscereus)的外排泵能9。化学合成来源的此类抑制剂某些芳基哌嗪类化合物(arylpiperazines)被证明具有抑制大肠埃希菌RND型外排泵AcrAB和AcrEF的活性，其机制尚未明确8希在最近报导中发觉1(1naphthylmethyl)piperazine还能够抑制弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacterfreundii)产气肠杆菌、肺炎克雷伯菌等临床分离株的外排泵44。InfluxInc.通过对9600种结构各异的化合物进行挑选，发觉了数种金葡菌

21、NorA外排泵抑制剂35。这些抑制剂提高环丙沙星活性的能力超过了利血平，可是它们的机制均未研究清楚。临床用药来源的此类抑制剂吩塞秦(phenothiazine)、嘎吨类药物(thioxanthene)为多巴胺受体拮抗剂和钙调素抑制剂，临床上作为安宁药和止吐药。研究证明这两类药物(如氯丙嗪、氟奋乃静、丙氯拉嗪、顺式和反式氟哌嘎吨)能够抑制金葡菌NorA外排泵。尽管已经证明这些物质具有破坏质子动力势的能力，但实验推测这并非是这些物质外排泵抑制作用的要紧机制，要紧机制可能是与外排泵直接作用等其他机制45。另据最新报导，吩塞秦类药物硫利达嗪(thioridazine)也能够通过抑制外排泵提高甲氧西林耐

22、药金葡菌的药物灵敏性46。5展望尽管已经发觉了一些多重耐药外排泵抑制剂，但目前尚未用于临床医治的报导。许多在体外活性良好的外排泵抑制剂由于平安性、特异性、机制明确性等诸多问题未能用于临床医治。尽管外排泵抑制剂用于临床医治还有很长的路要走，但其应用前景仍是很乐观的。因为外排泵抑制剂不仅能够提高具有外排泵介导耐药性的病原细菌的药物灵敏性，恢复抗生素的抗菌活性，还有利于减少由外排作用增进的耐药突变株的产生。因此，寻觅有应用前景的外排泵抑制剂关于细菌性感染的医治而言有着深远的意义。【参考文献】1 Lomovskaya0,WatkinsWJ.Effluxpumps:theirroleinantibact

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