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文档简介

焦磷酸测序法 (Pyrosequencing n n DNA 聚合酶、ATP 硫酸化酶(ATP sulfurylase 、 荧光素酶(luciferase 和三磷酸腺苷双磷酸酶 ( apyrase 。 原理：DNA 聚合酶在一种dNTP的存在下进 行引物延伸反应,而引物的成功延伸将伴随 焦磷酸的释放,焦磷酸在荧光素酶的存在下 能引一种发化学发光反应,通过发光计的实 时监测来达到检测的目的。 26 基本步骤 1.测序引物和DNA模板杂交（PCR扩增的、单链的），与 酶和底物孵育。 2.四种dNTP（dATPS，dTTP，dCTP，dGTP）之一被加 入反应体系，如与模板配对，与引物的末端形成共价 键，dNTP的焦磷酸基团（PPi）释放出来。 3.一系列的酶学反应，发出可见光信号。每个光信号的峰 高与反应中掺入的核苷酸数目成正比。 4. ATP和未掺入的dNTP由三磷酸腺苷双磷酸酶降解，淬 灭光信号，并再生反应体系。 5.然后加入下一种dNTP。 27 28 2连接酶 n n 联合链式反应 (combined chain reaction , CCR 连接-滚环扩增反应 (ligation-rolling ci

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