蒲公英多糖的超滤分离及其清除自由基的作用研究

1、蒲公英多糖的超滤分离及其清除自由基的作用研究杨晓杰，陈静，程加春，李学花【摘要】目的研究蒲公英多糖的超滤分离和自由基的清除作用。方式采纳不同孔径的超滤膜分离蒲公英多糖，用Fenton反映体系和邻苯三酚自氧化法测定对羟自由基和超氧阴离子的清除作用。结果超滤分离取得蒲公英多糖3个组分，测定了组分DPI和DP2对自由基的清除作用，两组分对羟自由基清除作用强，且DPI高于DP2；两组分清除超氧阴离子的成效不明显，DPI略高于DP2o结论超滤膜能较好地分离蒲公英多糖，其中DP2组分多糖含量较高，占。DPI和DP2组分均能清除羟自由基和超氧阴离子，对羟自由基清除能力较强，且DP2高于DPI,当浓度达到5m

2、g/ml时，DP2的清除率达到。【关键词】蒲公英多糖；超滤分离；羟自由基；超氧阴离子Abstract：ObjectiveToresearchontheabilitytoscavengefreeradicalofdandelionpolysaccharidebyultrafiltrationpolysaccharidewereultrafiltratedbyultrafiltrationmembraneofdifferentaperture,andthescavengingeffectonhydroxylfreeradicalandsuperoxideanionfreeradicalwerede

3、terminedbyFentonsystemandthepyrogallolautoxidationpartswereobtainedbyultrafiltrationabilitytoscavengefreeradicalofDPIandDP2werepartscouldscavengehydroxylfreeradicalpowerfullyandDP2hadstrongeractivitythantheabilitytoscavangesuperoxideanionfreeradicalofdandelionpolyscccharidewasnotobvious,DPIhadslight

4、lystrongeractivitythanpolyscccharidecanbewellseparatedbyultrafiltrationhashigherpolysaccharidecontentaccountingfor%.HydroxylfreeradicalandsuperoxideanionfreeradicalcanbescavengedwithDPIandDP2,buttheabilityismorepowerfultoscavengehydroxylfreeradicalandDP2isbetterthanrateofDP2isupto%,whentheconcentrat

5、ionofpolyscccharideisupto5mg/ml.Keywords：Dandelionpolysaccharide;Ultrafiltrationseparation;Hydroxylfreeradicals;Superoxideanionfreeradicals多糖具有普遍的药理作用，如作为免疫调剂剂，激活巨噬细胞、T淋巴细胞、LAK细胞等多种免疫细胞，增进细胞因子生成，活化补体，可抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗消化性溃疡、抗氧化、防衰老、降血糖血脂等，而且毒性相对较低，因此愈来愈受到研究人员的重视lo超滤作为一种新型的分离技术，用于多糖、酶等活性物质的分离与纯化，收率高且极少破坏

6、，是当前天然多糖分离研究中十分活跃的领域2o蒲公英Taraxacummongolicum是菊科舌状花亚科连年生草木,全草都可入药,有清热解毒、止痛散淤等功效,是中医临床上经常使用的中草药。蒲公英根、叶、花3种器官的多糖都有必然的清除自由基的活性3o本文要紧通过超滤分离将蒲公英根多糖分为两个组分，研究并对照了其清除羟自由基和超氧阴离子的活性。1材料与仪器材料蒲公英，采自黑龙江省五大连池市。器材UEIP503、UE0S503型中空纤维膜组件，752N紫外可见分光光度计。2方式多糖提取工艺流程蒲公英根干粉f热水浸提f离心分离f微滤一超滤分离f乙醇沉淀f脱蛋白f真空干燥一蒲公英粗多糖。超滤及其预处置浸

7、提液在超滤前用Um微滤膜除去粗提液中的固形物以降低对超滤膜的污染。操纵超滤压力为MPa,将蒲公英多糖的浸提液先用孔径10KDa的超滤膜进行超滤处置。滤过液继续采纳6KDa的超滤膜进行超滤处置，别离测定10KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的截留液、6KDa超滤膜的滤过液中的总糖、还原糖含量,计算各部份多糖含量，分析蒲公英多糖的大致分子量散布情形。图1显示了各部份的比例和含量。多糖含量的测定总糖含量的测定采纳慈酮一浓硫酸法4；还原糖含量的测定采纳3,5一二硝基水杨酸比色法4,50多糖含量二总糖含量-还原糖含量6蛋白含量的检测蒲公英粗多糖溶液经木瓜蛋白酶和三氯乙酸(TCA)脱蛋白后，测定其在26

8、0nm和280nm处的吸光值7。多糖清除0H的测定清除-0H实验的方式：采纳Fenton反映体系8。清除率E晚)计算公式为：E(%)=A0-(Ax-Ai)/A0X100%式中：A0为空白对照液的吸光度；Ax为加入多糖溶液后的吸光度；Ai为不加显色剂H202多糖溶液的本底的吸光度。多糖清除02-的测定多糖清除02-的实验采纳邻苯三酚自氧化法9o清除率E晚)计算公式为:E(%)=(A对照一A样品)/(A对照一A空白)式中：A空白空白组的吸光度；A对照为对照组的吸光度；A样品为多糖液的吸光度。3结果蒲公英多糖的分子量散布称取30g蒲公英根粉末加入30倍的水80c浸提两次，3h/次。浸提液经抽滤后加水

9、定容至1500mlo浸提液中总糖含量为mg/ml,还原糖的含量为mg/ml,多糖含量为mg/mlo依照上述超滤方式取得蒲公英多糖不同组分多糖散布如图1所示。由图1可知，蒲公英多糖分子量大于10KDa(DPl)占蒲公英多糖的,分子量在6KDa与10KDa之间(DP2)占蒲公英多糖的%,而分子量小于6KDa(DP3)只占蒲公英多糖的九本实验采纳多糖散布量较大两个部份DPI、DP2继续研究它们的清除自由基的活性，DPI、DP2经木瓜蛋白酶和TCA脱蛋白后在260nm和280nm处检测无明显吸收。蒲公英多糖清除-0H的作用别离配5mg/mlDP一、DP2溶液，依照Fenton反映，其对0H的清除率见表

10、1及图2。由表一、图2可知，蒲公英多糖DP一、DP2对0H有清除作用，并随着多糖加入量的增加清除率上升，即清除率与多糖的用量之间存在必然的量-效关系。其中DP2的清除率高于DPI,当浓度达到5mg/ml时DP2的清除率达到而DPI为设表1不同组分多糖对0H的清除率（略）蒲公英多糖清除02-的作用依照邻苯三酚自氧化法，蒲公英多糖DP一、DP2清除02-的作用见表二、图3所示。表2不同组分多糖对02-的清除率（略）由表二、图3可知，蒲公英多糖DP一、DP2对02-具有必然的清除作用，并随着用量的增加清除率慢慢上升但清除能力不如对0H明显。这两个组分中DPI的清除能力略高于DP2,当浓度达到mg/m

11、l的时DPI清除率为略高于DP2的%。4结论目前人们己经提出各类学说来讲明机体的衰老、疾病等生理现象，如自由基学说、免疫功能下降学说、生物膜衰老学说、代谢失调学说等，其中被人们普遍同意的是氧自由基学说，最能说明机体衰老、生病的机理。研究说明，毒性氧离子包括02-，H202-0H等，这些毒性氧自由基能够使细胞膜脂质过氧化，增强细胞膜通透性，使细胞内容物流出，同时还损伤蛋白质和DNAo本文通过对蒲公英粗多糖超滤分离后，可取得3个组分即DP、DP2HDP3,其中DP2多糖含量最高，占蒲公英多糖含量的,对两个含多糖较多的要紧组分DPI和DP2清除羟自由基和超氧阴离子的能力进行了初步研究，显示两组分均能

12、清除羟自由基和超氧阴离子，且在本实验范围内随多糖浓度的升高，清除能力慢慢增强。其中对羟自由基的清除能力DP2高于DPI,在5mg/ml时达到,对羟自由基产生明显的抑制作用。而对超氧阴离子的清除能力DPI略高于DP2。从整体的清除成效看，二者对羟自由基有较强的清除能力。本实验为蒲公英多糖对人机体的作用提供了间接的依据，为蒲公英多糖的分离纯化及蒲公英多糖生物活性的研究提供基础资料。【参考文献】1周林珠,杨祥良,周并炎，等.多糖抗氧化作用研究进展J1中国生化药物杂志,2002,23(4):210.2韩永萍，何江川，缪刚.超滤提纯姬松茸多糖的研究J.中国食用菌,2004,24(2):44.3付学鹏，杨晓杰，李本丽，等.蒲公英不同器官多糖含量测定及抗氧化性研究J.食物研究与开发,2020,29(3):26.4张惟杰.糖复合物生化研究技术，第2版川.杭州:浙江大学出版社，2001：12.5陈毓荃.生物化学实验方式和技术M.北京：科学出版社,2002：97.6吴建中，郭开平，傅亮，等.采纳超滤