广西桂郁金对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

1、广西桂郁金对小鼠免疫性肝损伤的保护作用                            作者：秦华珍，李彬，时博，李世阳，郑作文，邓家刚【摘要】  目的观察广西桂郁金（GGYJ）对卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法采用BCG+LPS尾静脉注射造成免疫性肝损伤动物模型，观察GGY

2、J对各组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）的含量及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平的影响。结果GGYJ可明显降低免疫性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、GLO水平，升高血清ALB水平，提高A/G的比值；减少肝组织匀浆的MDA含量，升高肝匀浆SOD、GSH-Px含量。结论GGYJ对BCG+ LPS尾静脉注射造成的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用，其作用与抗脂质过氧化有关。 【关键词】  GGYJ； 免疫性肝损伤； 保护作用广西桂郁金（GGYJ）是商品郁金的品种之一，为姜科植物广

3、西莪术Curcuma  kwangsiensis S. G. Lee et C.F. Liang的块根。主产于广西，近几年产量约占全国郁金总产量的60%以上1，对我国市场有较大的影响力。郁金具有活血化瘀、行气解郁、清心开窍、利胆退黄的功效，临床常用于各种肝胆疾病24。据统计，目前我国大约有1.2亿乙型肝炎病毒（HBV）感染者，慢性乙肝病人超过3000万，国内乙型肝炎病毒感染的人数远远高于其他肝炎病毒感染人数。在我国法定报告传染病中，乙肝发病数和发病率一直高居前列5。广西是乙肝的高发区，19962005年乙肝报告发病率始终处于全区各类传染病报告发病的前3位6。为了筛选肝炎的药物，本实验

4、对GGYJ抗免疫性肝损伤的作用进行了观察，现报告如下。1  材料与仪器1.1  动物清洁级昆明种小鼠72只, 体质量(20±2)，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK 桂 2003-0003。1.3  试剂BCG：生物技术集团公司上海生物制品研究所生产，批号：2004060501；大肠杆菌LPS：Sigma公司产品，进口分装；联苯双酯(BPD)：广州市星群药业有限公司，批号： 20050422；ALT、AST测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：050423；SOD、MDA、GSH-Px：南京建成生物工程研究所，批号：05

5、0606。1.4  仪器半自动生化分析仪（德国），型号Chem300；高速低温离心机（德国），Biofuge stratos；超声波细胞粉碎机，宁波新芝科器研究院，型号JY92-2D；Agilent8453紫外可见分光光度计；722-紫外光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。2  方法2.1  分组动物随机分为6组，即空白对照组，模型对照组，BPD对照组（研末，以蒸馏水配成一定浓度的混悬液，剂量为600 mg/kg），GGYJ高、中、低剂量组（28，14，7g/kg），每组12只。各组按体重分别以0.2 ml/10g剂量给药，1次/d，连续给药12 d。2.2

6、60; 造模给药第1天造模，除空白对照组外，其余5组小鼠均尾静脉注射BCG溶液（用生理盐水配置BCG溶液，使每ml约含108个活菌）0.2ml/只。12 d后经尾静脉注射7.5g LPS生理盐水溶液，空白对照组同法给予等量的生理盐水，禁食（自由饮水）10 h后各组经眼球后静脉丛取血，常规分离血清。然后处死小鼠，取肝脏，用生理盐水配10%肝组织，用超声波细胞粉碎机匀浆，低温离心，按试剂盒说明书所述方法检测血清ALT、AST的含量（赖氏法），按试剂盒说明书所述方法用Agilent8453紫外可见分光光度计测定肝匀浆中SOD，MDA，GSH-Px的含量。2.3  统计学处理各项数据均以&#

7、177;s表示，统计分析采用SPSS13.0软件进行。3  实验结果3.1  对血清ALT、AST含量的影响实验结果见表1。表1  GGYJ对免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响（略）     表1显示，与空白组相比较,模型组血清ALT、AST水平升高, P<0.01，说明模型建立成功。与模型组比较，BPD组及GGYJ高、中剂量组均能非常显著地降低小鼠血清中升高的ALT水平（ P<0.01）；GGYJ低剂量组则显示无效；在降低小鼠血清ALT水平上，GGYJ高剂量组与BPD组作用相当；而GGYJ中、低剂量组的作

8、用弱于BPD组与GGYJ高剂量组（P<0.01，P<0.05）；GGYJ中、低剂量组与高剂量组之间降低ALT水平的作用存在量效关系。与模型组比较，BPD组、GGYJ高、中剂量组均能显著降低小鼠血清中AST的水平（P<0.01，P<0.05），GGYJ低剂量组则显示无效；GGYJ高、中剂量组降低小鼠血清AST水平的作用与BPD组相当；而GGYJ高、中剂量组组间比较无统计学意义，GGYJ低剂量组与高剂量组之间存在量效关系。3.2  对血清ALB及GLO含量的影响实验结果见表2。表2  GGYJ对免疫性肝损伤小鼠血清ALB及GLO含量的影响（略） 

9、;    表2显示，与空白组比较，模型组ALB含量明显降低（P0.01），各给药组均能明显提高ALB含量（P0.01），其中GGYJ高剂量组已经接近正常组水平。与空白组比较，模型组动物血清中GLO含量明显升高（P0.01），GGYJ高剂量组GLO含量无明显变化，与空白组相近；BPD组与GGYJ中、低剂量组GLO含量也升高，但不及模型组；而各给药组均能明显提高A/G比值，GGYJ高、中剂量组有非常显著性意义（P0.01），低剂量组有显著性意义（P0.05）。1         3.3&#

10、160; 对肝匀浆SOD、MDA、GSH-Px水平的影响实验结果见表3。表3  GGYJ对免疫性肝损伤小鼠肝匀浆SOD、MDA、GSH-Px水平的影响（略）表3显示，与空白组比较，模型组、BPD组、GGYJ高、中、低剂量组肝匀浆SOD、GSH-PX水平显著降低（P<0.01），MDA水平显著增高（P<0.01）。BPD组、GGYJ高、中、低剂量组均能升高模型小鼠肝匀浆SOD、GSH-Px的水平（P<0.01），降低MDA的水平（P<0.01）。GGYJ高、中剂量组升高SOD的作用与BPD组相近，GGYJ低剂量组的作用不及BPD组（P<0.01）；GGYJ

11、高、中、低剂量组在升高小鼠肝匀浆SOD水平方面呈一定的量效关系。GGYJ高剂量组降低MDA水平、升高GSH-Px的水平的作用与BPD组相近，GGYJ中、低剂量组的作用不及BPD组（P<0.01）；GGYJ高剂量组与中、低剂量组在降低MDA水平方面有量效关系（P<0.05），GGYJ高、低剂量组之间在升高GSH-Px的水平方面存在量效关系（P<0.05）。4  讨论     肝脏是含酶丰富的脏器,在肝脏出现组织损伤或细胞破坏、坏死时,酶从细胞内逸出进入血液。因此，血清ALT，AST的升高是肝损伤的重要标志。肝脏是合成蛋白质的重要

12、场所，在蛋白质代谢中起着重要的作用，肝功能受损可以使蛋白质的合成、细胞内运输和释放发生障碍，从而导致血清ALB减少，GLO升高，A/G比值降低。MDA是脂质过氧化的最终产物,其含量与脂质过氧化反应呈正比；而作为抗氧化酶系统主要物质之一的SOD含量的高低反映了机体清除氧自由基的能力。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解的酶，一般认为它在细胞内能清除有害的过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。     给小鼠注射BCG可使巨噬细胞和中性多核粒细胞聚集于肝脏,使肝脏处于致敏状态，继而用低毒剂量的LPS攻击，可激发这些细胞释放对肝细胞有毒性的可溶性因子,造成免疫性肝损伤7。     本实验结果表明，BCG与LPS联用可以引起小鼠血清中ALT