针对瓜类枯萎病毒筛选拮抗菌剂及菌肥

1、针对瓜类枯萎病筛选拮抗菌剂及菌肥一、研究现状枯萎病是由尖孢镰刀菌引起的一种土传病害， 由于尖孢镰刀菌不 断进化出新的生理小种， 并且其厚垣孢子能够长期在土壤中存活， 使 得枯萎病的防治十分困难。 近年来， 利用有益微生物或枯抗微生物对 瓜类枯萎病进行生物防治枯萎病成为研究热点， 根据生防菌诱导相关 植物产生系统抗性， 使其分泌相关酶及抗生素， 从而使病原菌繁殖受 到抑制，控制瓜类枯萎病的发生。主要采用芽孢杆菌、非致病性尖孢 镰刀菌等拮抗微生物降低病原菌的密度或削弱病原菌的致病力， 从而 到达控制病害的目的，是一种很有前景的生物防治方法。二、目的和意义我国拮抗微生物研究及应用的技术手段多样性方面

2、与国外相比， 差距较大。拮抗微生物的种类单一、 对农药的反响敏感， 抗菌谱较窄、 生防效果不稳定、 生防菌在植株上定殖较难， 对拮抗和促生的结合较 难、微生物防治措施不够完善、可利用的拮抗微生物资源太少，还需 进一步挖掘与应用。研究说明将广谱的拮抗菌剂应用到富含有机物质的土壤中， 能提 高防治效果， 将广谱拮抗菌和有机生物菌肥联合施用， 可以起到防病 和促生双重成效。 本工程以多年瓜类连作的根际土壤中别离筛选对瓜 类枯萎病具有拮抗活性的洁抗菌， 对筛选到的高效拮抗菌株进行深入 研究，以开发广谱高效的拮抗微生物资源； 并将筛选的微生物与有机 肥联合使用， 使其相互作提高防效和肥效， 为植物病害的

3、微生物防治 提供一定的参考。三、可行性分析 枯萎病主要危害西瓜、黄瓜、甜瓜等瓜类作物。目前，瓜类枯萎 病在国内瓜类主栽区普遍发生， 严重制约瓜类蔬菜产业开展。 通常情 况下由于枯萎病造成西瓜生长衰弱、结瓜少、瓜小、品质差、淡而乏 味，西瓜糖份含量少，产量损失达 15% 30% ，严重区域达 50% 85% ，甚至绝收。通常主要运用化学方法防治，但是由于化学农药 毒性大、污染环境，长期大量使用容易诱导病菌的抗药性，作物中农 残超标，影响人体健康，不符合农业可持续开展。采用拮抗微生物防 治植物病害， 已经研究了几十年， 人们陆续报道了细菌中的枯草芽孢 奸菌( Bacillus subtilis )

4、、放射土壤奸菌 (Agrobacterium radiobacter)、 突光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescenc)e 节朴菌(Arthobaeter)、梭 菌(Clostridium)、多粘芽抱杆菌(Panebacillus polymyxa)、木霄属真菌 (Trichoderma spp.) 、 青霄 菌 属 真菌 (Penecillium spp.) 、 绿 粘 帚 霉 (Gliocladium sp.)、大隔伏草菌(Peniophora gigantea)、放线菌属中的 链霉菌等对病原微生物的括抗效果， 但是这些研究大多报道单一拮抗 菌在实验室和温室条件下有较好的

5、效果， 很少有报道多种拮抗菌联合 使用及拮抗菌与有机肥复配使用。利用拮抗微生物防治瓜类枯萎病， 抑制尖孢镰刀菌， 控制病害发 生，是一种很有前景的生物防治方法。它具有对环境无污染、对人畜 无毒、对土壤中有益微生物没有影响、对瓜类无副作用、尖孢镰刀菌 不易产生抗性、使用本钱较低等优点，如与优质有机肥配合使用，效果更佳。林纬釆用芽孢杆菌和哈慈木霉单一防治西瓜枯萎病效果达35-50%，与有机肥混合使用效果可提高到 60-85%。因此，从土壤中 筛选出具有高效诘抗枯萎病菌的菌株， 并对筛选出的捨抗菌株进行分 类鉴定、括抗活性进行初步研究， 为生物防治西瓜枯萎病提供了具有 应用价值的微生物菌株。四、技术

6、方案和技术路线1、技术方案通过系列稀释涂布平板、 对峙培养等方法， 从长期连作的健康瓜 类的根际土壤中别离筛选得到瓜类枯萎病枯抗菌株，通过形态特征、 生理生化特征及 rRNA 基因序列相似性分析，鉴定菌系。研究别离得到的瓜类枯萎病致病菌的拮抗菌生物学特性， 包括菌 株的生长情况，最适温度、pH、接种量、装液量，以及抗性谱、耐 药性等，对枯萎病的高效防治和田间应用等都具有重要作用。将去除菌体的发酵液对瓜类枯萎病菌的抑制率作为判定发酵条 件优劣的主要指标， 筛选出最适合菌株产生抗生物质的发酵培养基和 发酵条件， 为生产及应用奠定根底。 并进一步对菌株产生的抗生物质 进行别离纯化，并对其理化性质进行

7、研究。将别离的拮抗菌株进行盆栽试验， 设置两组， 一组将拮抗菌株直 接注入到土壤中， 另一组将拮抗菌株接种中微生物肥中， 进行病情调 查，确定拮抗菌株的防治效果。2、技术路线瓜类枯萎病高效拮抗菌株的别离筛选及鉴定拮抗菌株所产抗生物质的分离纯化及初步鉴定促进设施蔬菜高品质专用肥料研发一、农作物有机物料发酵有机肥固态基肥+追肥生产高品质蔬菜1、研究现状农业有机物料农作物秸秆、豆箔、油料饼、黄豆粉等是农作 物生产的主要副产品，约占作物生物量的50%,是农作物生产系统中 一项重要的生物资源。据统计，2022年中国农作物桔秆总量约8.0亿 t，油料饼1.34亿t，豆箔1.21亿t，黄豆粉0.8亿t。这些

8、秸秆资源量 约占桔秆总资源量的80%。采用好氧发酵技术，将有机物料堆肥化处 理后，施用于农田，有利于改进土壤结构，提高土壤肥力和产量。是 农业有机物料资源化利用最直接、有效的方式。2、目的与意义近年来，随着我国现代农业集约化和规模化的开展， 农业机械化、 良种化的普及，农作物产量的不断提升，化学肥料不合理使用，不仅 增加了农业生产本钱、浪费资源，造成耕地板结、土壤酸化、对生态 环境平安构成了严重威胁； 也打破了传统农业有机物料 农作物秸秆、 豆箔、油料饼、黄豆粉等的循环利用环节，造成了农业有机物料的 大量积累，进而产生了较为严重的环境、资源浪费等问题。开展农业 有机物料的资源化利用以及微生物菌

9、肥的开发利用， 即可减轻农业面 源污染、促进节能减排，也能促进粮食增产、农民增收和农业生态环 境平安。3、可行性分析设施农业开展中， 设施栽培由于受高度集约化、 复种指数高等因 素影响，作物CO2亏缺普遍存在。蔬菜病虫害加重，喷施农药又使其 残留增加， 过量施用不仅不能提高产量， 反而会造成产量和品质的下 降，肥效递减的问题日益突出。 尤其是过量施用氮素化肥和酸性和生 理酸性肥料， 如氯化钾、 过磷酸钙、 硝酸按等， 使土壤养分比例失衡， 极易产生次生盐渍化。由此造成蔬菜减产和品质下降幅度逐年增大， 增加生产本钱，同时增大环境污染风险等。而目前国内外均关注土壤一作物一环境系统的协调与可持续发

10、展问题，也逐步重视新型生物有机肥和有机肥料的开发、 生产与应用。 农业有机物料农作物秸秆、 豆箔、油料饼、黄豆粉等营养成分高、 有机质含量丰富等特点，而适宜作为新型有机肥料研发。综上，以大 幅度地减少设施蔬菜生产中化学农用品的投入、 实现食品平安为主要 原那么，开发新型有机肥料。并在有机肥料根底上，配施无机肥料，实 现有机无机复合使用，可促进作物生长，提高品质和产量。4、技术方案与路线4.1 技术方案进行微生物菌剂的筛选及利用有机物料农作物秸秆、豆箔、油 料饼、黄豆粉等为原料，设施蔬菜高品质有机肥研发，形成有机固 态肥料：1基肥 2追肥，并进行两者结合实施，改进设施蔬菜 生长环境。设施栽培，用

11、有机肥做基肥，采用深翻机深翻、起垄后，直接定 植设施作物。采用滴灌方式，应用“高浓缩微肥营养液 ，以及有机 肥作为追肥，实现营养、水份一体化供应体系生产高品质设施蔬菜， 到达少施化肥，实现对环境无污染，保障人体健康、平安的水肥供应 体系。4.2 技术路线农业有机物料农作物秸秆、豆箔、油料饼、黄豆粉二、蚯蚓发酵液液体肥追肥生产高品质蔬菜1研究现状近年来，针对我国农业存在的问题，土壤质量退化、施肥过量的， 导致肥料利用低，品质较差，生产本钱高，农民收入低，甚至造成环 境污染。其次是国际肥料开展趋势，开发高品质设施蔬菜专用有机肥 和有机无机专用肥，并开发基肥+水溶性追肥的立体生态施肥模式， 实现水肥

12、一体化，从地下到地上满足优质蔬菜的生长与营养要求，从而为宁夏绿色、平安设施蔬菜的生产提供技术支撑。2、目的与意义蚯蚓发酵液体肥是蚯蚓肉体经过微生物菌剂发酵获得的高效有 机液体肥料，含有大量的有益微生物和养分。与固体有机肥相比，液 体肥料的养分和微生物更易被植物利用，它具有便于结合滴灌、微灌 和渗灌技术施肥等优点。 蚯蚓发酵液是一个易发挥种群优势的微生物 资源库、土壤微生物的营养源和促进生物质代谢库， 它能够调控土壤 微生物群落的代谢功能和结构， 改善土壤质量， 对作物的生长发育具 有促进作用， 并具有一定的防病效果， 因此蚯蚓发酵液具有重要的生 物效应和改善生态功能。3、可行性分析 蚯蚓发酵液

13、能提高植物生长、抑制病害、保持土壤健康，在促进 植物生长和抑制病害方面与利用化肥做追肥相比表现出了优越性。利用畜禽粪便等农业有机废弃物养殖蚯蚓， 将活体蚯蚓制备有机 液体肥料，步骤为：1将活体蚯蚓在电动搅拌器中均匀打浆，获得 蚯蚓浆液； 2将蚯蚓浆液放入发酵罐中，参加后，发酵； 3将发 酵后的蚯蚓浆液过滤， 得到固体渣和蚯蚓液， 固体渣作为固体蚯蚓肥； 4将步骤3获得的蚯蚓液与黄腐植酸、 氨基酸、 糖渣、发酵基、 尿素和麸料放入配肥罐里，发酵； 5发酵后，将产物过滤、滤液包 装。制备的蚯蚓液体有机肥提升泥土保存养分和水份的能力， 从而减 少使用肥料，并防止养分于地面流失，提升肥料利用率，提高植

14、物产 量和保质期。宁夏大学经过几年的研究， 已成功自主筛选出 10种用于发酵蚯蚓 液的微生物，在之前的根底上，经过优化，目前也已自主完成蚯蚓发 酵液体肥工艺研究： 将蚯蚓肉体在电动搅拌器中均匀打浆， 获得蚯蚓 浆液；将获得的蚯蚓液与菌剂及其它配料放入发酵罐里，发酵；发酵 后，将产物过滤、 得到蚯蚓发酵液。需进一步完善蚯蚓发酵有机液体 肥关键工艺及微生物发酵菌剂筛选与进一步优配， 缩短发酵时间， 增 加有益活性菌数量。肥料特性如下：铵态氮 500 mg/L800mg/L,硝 态氮 50 mg/L 100mg/L，速效磷 70 mg/L 130mg/L,速效钾 1600 mg/L2000 mg/L

15、,同时含有Ca、Fe、Zn、Mn、Mg等元素，还含有 氨基酸、多种水解酶、植物激素吲哚乙酸、乙烯等以及对病虫害 有抑制作用的活性成分。以养殖业产生的大量畜禽粪、秸秆及其他有机原料为根底原料, 通过功能菌剂筛选和优化配置, 明确不同菌剂的生物学特征及其与植 物的互作效应, 通过微生物菌剂的修饰改进, 使之与有机固体肥和液 态肥更好地融合与匹配, 形成功能性有机液态肥, 强化有机液态肥料 的抗病、促生、增产、提升枸杞风味和道地性。全面开发枸杞地上、 地下有机系列追肥,生产新型枸杞专用有机、有机无机速溶、易溶的 有机液态肥料根际追肥和叶面肥 ,实现追肥施用专用有机液态肥 料局部或全部替代化肥, 并结合滴灌设施设备实现水肥一体化, 地上 部施用专用叶面肥,并联合企业形成产业化生产线 1条。通过各项技 术的集成应用,实现宁夏枸杞绿色、平安生产,到达化肥、化学农药 施用减量。4、技术方案与路线4.1