食品中动物用药残留量检验方法

1、99年12月31日署授食字第0991904853虢公告言丁定101年10月15日署授食字第1011903506虢公告修正1 .遹用靶圉：本树方法遹用於畜禽水11品肌肉及乳品中安比西林(ampicillin)>安默西林(amoxicillin)>H抱氨节(cefalexin)、西革比林(cefapirin)、节青黛素(benzylpenicillin)、氯嗯嚏西林(cloxacillin)、苯嚏青黛素(oxacillin)及H抱味辛(cefuroxime)之横瞬。2 .串方法：横萃取及浮化彳爰，以液相眉析串聊(liquidchromatograph/tandemmassspectro

2、meter,LC/MS/MS)分析之方法。2.1. 装置：2.1.1 .液相析串IHOmet：2.1.1 .1.It子源：窗！It子化(electrosprayionization,ESI)。2.1.2 .2.)1析管：PhenomenexSynergiPolar-RP4心内彳§12.0mmx25cm,80?,或同级品。2.1.2 .蹄心B(Centrifuge):可逵3000x£上者。2.1.3 .均(Homogenizer')。2.1.4 .氮氟蒸彝装置(Nitrogenevaporator)。2.1.5 .固相真空萃取装置(Solidphaseextracti

3、onvacuummanifolds)。2.1.6 .旋涡混合器(Vortexmixer)。2.2. 甲酸、甲醇及乙睛均探用液相析级；氢氧化金内及磷酸二氧金内均探用特级；安比西林、安默西林、抱氨节、西革比林、节青黛素、氯嗯嚏西林、苯嚏青黛素及抱味辛封照用檄型品；配尼西林V(penicillinV)内部檄型品。2.3. 器具及材料：2.3.1 .容量瓶：10mL、50mL及500mL。2.3.2 .固相萃取匣(Solidphaseextractioncartridge:OasisHLB,6mL,500mg,或同级品。2.3.3 .滤膜：孔彳空0.22心PVDF材11。2.3.4 .蹄心管：50mL

4、,PP材1.1.1 .50%乙腈溶液：取乙睛50mL,加去蹄子水使成100mL。1.1.2 .5N氢氧化金内溶液：耦取氢氧化金内20g,以去蹄子水溶解使成100mLo1.1.3 .0.2N氢氧化金内溶液：耦取氢氧化金内0.8g,以去蹄子水溶解使成100mLo1.1.4 .0.05M磷酸彳蓟溶液：耦取磷酸二氮金内6.9g,溶於去蹄子水700mL,以5N氢氧化金内溶液整pH值至8.5,再加去雕子水使成1000mLo2.5. 移勤相溶液之配裂：2.5.1 .移勤相溶液A:乙睛。2.5.2 .移勤相溶液B:取甲酸50心1,加去蹄子水使成1000mL,以滤膜谩滤，取滤液供作移勤相溶液B。2.6. 内部檄

5、型溶液之配裂：配尼西林V内部檄型品条勺10mg,精碓耦定，以50%乙睛溶液溶解3t定容至10mL,作悬内部檄型原液，於-20C吩存。陶用日寺取遹量内部檄型原液以去蹄子水稀释至10ag/mL,供作内部檄型溶液。2.7. 檄型溶液之配裂：取B-内醯胺抗生素封照用檄型品各条勺10mg,精碓耦定，分别以50%乙睛溶液溶解3t定容至10mL,作尚票津原液，於-20C避光吩存。陶用日寺分别取通量糕津原液混合，以去蹄子水稀释至0.0010.5心g/mL,供作檄型溶液。2.8. 横液之2.8.1 .萃取：2.8.1 .1.肌肉：符椀田切均II彳爰，取余勺5g,精碓耦定，置於蹄心管中，加入内部檄型溶液25aL,

6、混合，静置15分金童。加入去蹄子水2mL,旋涡混合30秒金童，加入乙睛至ft稹悬20mL,再旋涡混合2分金童。於25c,以3000Xgit心15分金童，取上清液，於40c水浴中以氮氟彳宿至乾。残留物加入0.05M磷酸彳蓟溶液30mL,旋涡混合1分金童，以0.2N氢氧化金内溶液整pH值至8.5,供浮化用。2.8.2 .2.乳品：取糊H及勺10g,精碓耦定，置於蹄心管中，加入内部檄型溶液25口，混合，青争置15分金童。於25c,以1500Xgit心15分鼠取下席夜置於蹄心管中，加入乙睛至ft稹悬30mL,旋涡混合2分金童。於25c,以1500X琳心15分金童。取上清液，於40c水浴中以氮氟渡彳宿至

7、乾。残留物加入0.05M磷酸彳蓟溶液15mL,旋涡混合1分金童，以0.2N氢氧化金内溶液整pH值至8.5,供浮化用。2.8.2 .浮化：取2.8.1.1.或2.8.12供浮化用溶液，注入先以甲醇6mL、去蹄子水3mL及0.05M磷酸彳蓟溶液3mL润洗之固相萃取匣，再以0.05M磷酸彳蓟溶液3mL及去蹄子水1mL冲洗，集流出液。固相萃取匣真空抽乾彳爰，以乙睛6mL冲提，收集冲提液，於40c水浴以氮氟渡彳宿至乾，残留物以去蹄子水溶解3t定容至1mL,以滤膜谩滤，供作检液。2.9. 横量之裂作：精碓量取檄型溶液1mL,添加於空白椀Tit中，依2.8虚储1裂横液，3tll照下列修件迤行液相）1析串馨U

8、tt分析，就各B-内醯胺I®抗生素典内部檄型品波峰面稹比，舆封鹰之各B-内醯胺I®抗生素檄型品添加浸度，分别裂作横量液相析串分析测定修件：移勤相溶液：A液舆B液以下列修件迤行梯度分析日则min)A(%)B(%)0-3.00-0100f1003.0f19.00-90100f1019.0-21.090-9010f1021.0f21.190-010f10021.1f31.00-0100f100移勤相流速：0.2mL/min注射量：20aL。霜濯游(Sprayvoltage):5000V毛区田管温度(Capillarytemperature):386c。噫灌品氮氟力(N2sheat

9、hga§:40arbitraryunits录I除溶剜氮氟力(N2auxiliarygas):10arbitraryunits。侦测模式：多重反H侦测(multiplereactionmonitoringMRM)。各B-内醯胺抗生素之侦测It子封、碰撞能量(collisionenergy)及管鬻TMB(tubelensoffset)如下表：分析物重濯蹄子化模式蹄子封碰撞能量(V)(V)前子(m/z)>|g物蹄子(m/z)安默西林ESI+366>349*24127366>20820127安比西林ESI+350106*3111535019233115节青徽素ESI+335

10、160*20123335>17627123氯嗯n坐西林ESI+436277*1513643616034136苯嘎青黛素ESI+40224314141402>160*1514111抱氨卡ESI+348158*32883481741088西荤比林_+ESI424292*26187424>15237187!抱映辛ESI-423>31812154423>207*17154配尼西林V_+ESI351>16016107*定量蹄子封1£：上述测定僚件分析不遹日寺，可依所使用之倭器，定遹合之测定修件。2.10. 别封1就及含量测定：精碓量取检液及檄型溶液各20aL

11、,分别注入液相)1析串耳粉1111倭中，依2.9位到紧件迤行分析。就检液舆檄型溶液所得波峰之滞留日寺及多重反鹰侦测相封雕子弓金度It别之(te),她依下列言十算式，求出椀it中各B-内醯胺抗生素之含量(ppm):CxV椀Tit中各B-内醯胺i(抗生素含量(ppm)=MC:由横量求得横液中各B -内醯胺抗生素之浸度（心g/mL）V：椀Tit最彳爰定容之ft稹（mL）M:取檬分析椀Tit之重量（g）1£：相封蹄子弓金度由定性蹄子封典定量雕子断之波峰面稹比而得（三100%）,容靶圉如下:相封蹄子弓金度（。/%容%/%)>50±20>2050±25>1020士30三10±