仪器分析 第三次讨论

1、1、高效液相色谱法的概述、高效液相色谱法的概述2、液相色谱法测邻苯二甲酸酯、液相色谱法测邻苯二甲酸酯高效液相色谱（高效液相色谱（HPLC)HPLC)是现代分析化学中最重要的分离是现代分析化学中最重要的分离方法之一。方法之一。 近几年由于化学工业的发展和天然化合物的开发近几年由于化学工业的发展和天然化合物的开发, ,使得环境污染越来越严重。高效液相色谱由于其高灵使得环境污染越来越严重。高效液相色谱由于其高灵敏度、高效、分析速度快等优点而广泛应用于环境中敏度、高效、分析速度快等优点而广泛应用于环境中各物质的监测。本文介绍了高效液相色谱的组成、基各物质的监测。本文介绍了高效液相色谱的组成、基本原理，

2、列举了目前利用高效液相色谱法测定环境样本原理，列举了目前利用高效液相色谱法测定环境样品中多环芳烃、酚类化合物、多氯联苯、邻苯二甲酸品中多环芳烃、酚类化合物、多氯联苯、邻苯二甲酸脂、有机农药等有机污染物的测定条件及分离结果。脂、有机农药等有机污染物的测定条件及分离结果。展示了这项技术在该领域的应用并展望了液相色谱分展示了这项技术在该领域的应用并展望了液相色谱分析技术的发展前景。析技术的发展前景。危害 化妆品中邻苯二甲酸酯会通过女性的呼吸系统和皮肤进入体内，如果过多使用，会增加女性患乳腺癌的几率，还会危害到她们未来生育的男婴的生殖系统。在高剂量邻苯二甲酸酯环境中的啮齿动物，激素水平发生改变且导致先

3、天畸形。 邻苯二甲酸酯类是指邻苯二甲酸（Phthalate acid） 的酯化衍生物，是塑胶工业中最为常见的塑化剂。在日常及工业上被广泛添加于高分子塑胶产品的生产，如聚氯乙烯（PVC）、聚丙烯（PP）、泡棉，亦可添加于胶合剂、涂料、油墨中。此外应用于地毯衬垫、驱虫剂、头发喷雾剂、指甲油与火箭燃料等。 检测方法EN 14372 EN 14372 儿童产品安全要求及测试方法儿童产品安全要求及测试方法( (欧洲欧洲标准，采用索氏提取法标准，采用索氏提取法) ) EN 15777 EN 15777 纺织品纺织品. .邻苯二甲酸酯测试方法邻苯二甲酸酯测试方法( (欧欧洲标准，采用索氏提取法洲标准，采用索

4、氏提取法) )CPSC-CH-C1001-09.3 CPSC-CH-C1001-09.3 邻苯二甲酸酯测试标准邻苯二甲酸酯测试标准作业程序作业程序( (美国标准，采用溶解凝固法美国标准，采用溶解凝固法) )Health Canada Method C34 Health Canada Method C34 聚氯乙烯产品中聚氯乙烯产品中邻苯二甲酸酯的测定邻苯二甲酸酯的测定( (加拿大标准，采用溶出法加拿大标准，采用溶出法) )GB/T 22048 GB/T 22048 玩具及儿童用品玩具及儿童用品 聚氯乙烯塑料中聚氯乙烯塑料中邻苯二甲酸酯增塑剂的测定邻苯二甲酸酯增塑剂的测定( (中国标准，采用索氏

5、中国标准，采用索氏提取法提取法) )液相色谱仪工作原理储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内， 由于样品溶

6、液中的各组分在两相中具有不同的分配系数， 在两相中作相对运动时， 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程， 各组分在移动速度上产生较大的差别， 被分离成单个组分依次从柱内流出， 通过检测器时， 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 目前化妆品卫生规范未有制定邻苯二甲酸酯的测定方法。本方法建立高效液相色谱法测定化妆品中的7种邻苯二甲酸酯,方法操作简单,分离效果好,准确度和精密度高。适用于化妆品中邻苯二甲酸酯的测定。前处理方法中针对口红、指甲油等基体复杂样品,实验发现用乙酸乙酯提取的效果较甲醇为好。特点高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必

7、须对载液加高压。 高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在L数量级。 应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。 分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在1530分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。 高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进

8、样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。 高效液相色谱法测定化妆品中高效液相色谱法测定化妆品中邻苯二甲酸酯邻苯二甲酸酯高效液相色谱法测定化妆品中高效液相色谱法测定化妆品中邻苯二甲酸酯邻苯二甲酸酯样品制备 对香水、花露水、香波、沐浴露、乳液、膏体类样品取015g,甲醇定容至10mL,用旋涡振荡器振荡混匀,超声提取15min,必要时离心10min(6000r/min)。取上清液用0145m过滤膜过滤后待测。对于口红、指甲油等基体复

9、杂样品,取015g,用乙酸乙酯定容至10mL,用旋涡振荡器振荡混匀,超声提取15min,必要时离心10min(6000r/min)。取上清液用0145m过滤膜过滤后待测。 结果与分析 检测器和检测波长的选择紫外色谱图中有许多干扰的色谱峰,如果从峰的保留时间来定性,就很容易将目标化合物与杂质峰混淆在一起。所以我们选择二极管阵列检测器,用保留时间和光谱图来进行判断,提高了样品分析的准确性。将含PAEs标准溶液在200300nm范围作光谱扫描,发现邻苯二甲酸酯类化合物在225nm处均有较大紫外吸收。故选择225nm作为检测波长。流动相比较 单一配比的甲醇和水的流动相,对7种目标物达不到良好的分离效果

10、。如采用纯甲醇为流动相,只有邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二辛酯和邻苯二甲酸二乙基已基酯4种邻苯二甲酸酯可完成分离。实验中改用梯度洗脱方法,逐渐减少水相的比例,并在13min甲醇溶液升至100%,促使邻苯二甲酸二辛酯和邻苯二甲酸二乙基已基酯完成分离。 柱温的选择实验发现柱温升高至40时,7种邻苯二甲酸酯达到很好的基线分离,且在20min内分析完成。色谱条件色谱柱为C18柱,5m,250nm416mm(SU2PELCOLC-18-DB);柱温40;流动相为甲醇-水,梯度洗脱程序见表1;检测波长为225nm。工作曲线与检出限 将配制好的系列浓度混合标准溶液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 g/mL通过HP