保健食品毒理和功能

1、保健食品毒理和功能保健食品毒理和功能检验及评价检验及评价仲 伟 鉴上海市疾病预防控制中心2010.10主要内容提纲主要内容提纲v 中国保健食品简介中国保健食品简介v 保健食品安全性毒理学检验与评价保健食品安全性毒理学检验与评价v 保健食品新原料安全性毒理学评价原则保健食品新原料安全性毒理学评价原则v 保健食品安全性毒理学评价中存在的问题保健食品安全性毒理学评价中存在的问题v 保健食品功能性检验与评价保健食品功能性检验与评价v 保健食品功能评价方法更改情况保健食品功能评价方法更改情况第一部分第一部分中国保健食品简介中国保健食品简介第二部分第二部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价

2、检验及评价主主 要要 内内 容容q 检验评价依据检验评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q 审评结论的判定审评结论的判定毒性及功能检验评价依据毒性及功能检验评价依据19961996年年3 3月卫生部月卫生部保健食品的管理方法保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法19961996年年7 7月

3、月GB15193GB15193食品安全性毒理学评价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了仅包含了1212项功能检验及评价方法项功能检验及评价方法20012001年年7 7月月 卫生部卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到可受理和评价的功能调整到3131项项20032003年年2 2月卫生部月卫生部保健食品检验与评价技术规范保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价

4、方法三者合一审评的基本要求审评的基本要求1. 1. 配方配方 原（辅）料、用量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2. 2. 剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3. 3. 工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺、质量标准符合配方、工艺、质量标准4. 4. 批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致, ,益生菌、奶制品等保质期短的除外益生菌、奶制品等保质期短的除外1. 1. 毒理学评价的四个阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：经口急性毒性试验：LD50LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶

5、段：遗传毒性试验，第二阶段：遗传毒性试验，3030天喂养试验，传统致畸试验天喂养试验，传统致畸试验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合AmesAmes或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验第三阶段：亚慢性毒性试验 9090天喂养试验、繁殖试验、代谢试验天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则2.2.无需进

6、行毒性试验的保健食品无需进行毒性试验的保健食品q以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产以普通食品和卫生部规定的药食同源物质为原料生产的；的； 1 1）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同的 2 2）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料未提示具有不安全性未提示具有不安全性q用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素化用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单的营养素化合物为原料的，如其原料来源、生产工艺和产品质量合物为原料的，如其原料来源、生产工艺和产品质量均符合国家有关要求；均符合国家有关

7、要求；选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则3. 3. 需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品需进行一阶段和三项致突变毒性试验的保健食品 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：提以外的其它常用工艺生产的：（1 1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2 2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用量 还需加做还需加做3030天喂养试验，必要时进行传统致畸试天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验验和第三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本

8、原则选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则4.4. 需进行一、二阶段毒性试验的保健食品需进行一、二阶段毒性试验的保健食品r 以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允以普通食品和卫生部规定的药食同源物质以及允许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提取许用作保健食品的物质以外的动植物或动植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，物、微生物、化学合成物等为原料生产的保健食品，原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进原则上须进行第一、二阶段的毒性试验，必要时进行下一阶段的毒性试验。行下一阶段的毒性试验。r卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物

9、卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物为原料的。为原料的。5.5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则6.6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先例7.7.敏感指标

10、及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则对受试保健食品的要求对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配方产品，应提供配方多种原料的配方产品，应提供配方q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使q 用说明

11、书等有关资料用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物应符合动物应符合实验动物管理条例实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水为溶剂，推荐（若以

12、水为溶剂，推荐 20 ml/kg20 ml/kgBWBW） 小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW样品的预处理原则样品的预处理原则1.1.介质的选择介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。与受试物不发生反应、稳定性好。 常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。纤维素等。2.2.液体类液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。受试物浓缩倍数应符合试验要求。 浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有浓缩方法不应破坏

13、其有效成份，常用的有60607070减压或减压或常压蒸发、冷冻干燥。常压蒸发、冷冻干燥。 按工艺要求。按工艺要求。样品的预处理原则样品的预处理原则3.3.袋泡茶类袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：推荐用：80-90 80-90 常压用水浸泡常压用水浸泡30min30min 水量为受试物的水量为受试物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并浓缩至次提取液合并浓缩至所需浓度所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例标明该浓缩液与受试物的比例样品的预处理原则样品的预处理原则4.4.含乙醇类含乙醇类（1 1）不需浓缩的受试物）不需浓缩的受试物

14、乙醇浓度乙醇浓度151515 乙醇浓度应调至乙醇浓度应调至1515（2 2）需浓缩的受试物）需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 浓缩后调至浓缩后调至1515乙醇浓度乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基样品的预处理原则样品的预处理原则5.5.膨胀系数较高的受试物膨胀系数较高的受试物 选择可溶性介质选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100100倍，倍，按采用实际达到的倍数按采用实际达到的倍数 标明受试物的膨胀系数标明受试物的膨胀系数样品的预处理原则

15、样品的预处理原则6.6.益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品 在进行在进行 AmesAmes试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。 需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）。法、技术参数）。7.7.以食品为载体的受试物以食品为载体的受试物 （1 1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。明。 （2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允

16、许去除。如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。 如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。毒理学试验项目要点介毒理学试验项目要点介绍绍q 急性经口毒性试验急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（AmesAmes）试验）试验q 骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验q 3030天喂养试验天喂养试验急性经口毒性试验急性经口毒性试验目的：目的：测定测定LDLD5050，毒性分级。了解毒性强度、性质

17、和可能的靶，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：原理：急性毒性：经口一次性、急性毒性：经口一次性、24h24h内多次给予，短时间内的毒性反内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数致死剂量应。致死剂量通常用半数致死剂量LDLD5050表示。表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同

18、的作用。确定这三种不同的作用。急性经口毒性试验急性经口毒性试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天，大、小鼠适应期天，大、小鼠适应期 7-147-14天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统的异常表现（中枢、自主神经、呼毒性反应症状：各器官系统的异常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。死亡情况：死亡的时间、数量、性别、

19、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物大体尸检结果：如果发生死亡动物急性毒性（急性毒性（LDLD5050）剂量分级表）剂量分级表级级 别别大鼠口服大鼠口服LD50， mg/kg相当于人的致死量相当于人的致死量mg/kgg/人人极毒极毒150005000002500急性经口毒性试验急性经口毒性试验试验结果的判定：试验结果的判定：1. LD501. LD50人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，放弃；反之继续下倍，放弃；反之继续下一步试验。一步试验。2. LD5010g/kgbw2. LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。

20、物死亡的，可继续下一步试验。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验目的：目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。能性。 时间周期：时间周期：一般为一般为2 2周周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养第二周，染毒，培养48h48h，菌落计数，菌落计数剂量设计：剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为最低剂量为0.2ug/0.2ug/皿；最高剂量为皿；最高剂量为

21、5mg/5mg/皿，或最大溶解剂量，最大皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过5 5倍。倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验观察及评价指标：观察及评价指标： 各受试物组及三个对照组的四种菌株（各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分别在加和不加）分别在加和不加S9S9情况下的菌落计数。情况下的菌落计数。结果评价

22、（掺入法）：结果评价（掺入法）： 受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数22未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。的阳性反应，即可判试验阳性。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验目的目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。价受试物致突变的可能性。原理原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体

23、或染色体的形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片无着丝点断片 。末期之后，单独形成一个或几个规则的。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验时间周期时间周期：一般为：一般为2 2周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口染毒，小鼠经口染毒，30h30h给受试物法给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计剂量设计：至少设置：至少设置3 3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中个剂量，最高剂量组为

24、动物出现严重中毒表现和毒表现和/ /或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取性反应。一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作为三个剂量。当受试作为三个剂量。当受试物的物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw时，最高剂量通常采用时，最高剂量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同。同时设阳性对照组和溶剂对照组。时设阳性对照组和溶剂对照组。骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物计数每只动物计数10001000个嗜多染红细胞个嗜多染红细胞 ，记录含有微核的

25、细，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成胞数，并计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。熟红细胞的比例。 结果评价结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。有统计学意义，试验结果为阳性。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。突变性，以评价其致突变的可能性。原理原理：当受试物作用于细胞周期：当受试物作用于细胞周期

26、G1G1期和期和S S期时，可诱发期时，可诱发染色体型畸变，而作用于染色体型畸变，而作用于G2G2期时则诱发染色体单体型畸期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。和形态。哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠或大鼠经口染

27、毒小鼠或大鼠经口染毒2-42-4次，每次间隔次，每次间隔24h24h，在，在末次染毒末次染毒18-24h18-24h进行取材（取材前进行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水，腹腔注射秋水仙素）。仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，每个剂量组不少于，每个剂量组不少于10001000个。记录染色体数目及结构的改变。个。记录染色体数目及结构的改变

28、。结果评价结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。关系并有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验目的目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。内生殖细胞的致突变作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及色体及X X、Y Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，

29、已知精子的畸形是决定精子形成的要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。其蛋白产物的改变。小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，于首次给样后的天，于首次给样后的3535天处死动物天处死动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验观察及评价指标观

30、察及评价指标：每只动物检查每只动物检查10001000个精子个精子 ，记录精子畸形数目及，记录精子畸形数目及类型。类型。结果评价结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验目的目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感：不同周期的雄性生殖细胞对

31、化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过须经过DNADNA复制期，故在前细线期处理。第复制期，故在前细线期处理。第121214d14d采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。体畸变效应。小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-53-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，与首次给样后天，与首次给样后的的12-1412-14天处死动物取材，（取材前天处死动物取材，（取材前6h6h，腹腔注，腹腔注

32、射射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，记录染色体数目，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价结果评价：受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染

33、色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。义，试验结果为阳性。遗传毒性试验组合遗传毒性试验组合试验结果的判定试验结果的判定：如三项致突变试验（如三项致突变试验（AmesAmes试验，微核或骨髓细胞染试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品。受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验。试验。

34、30天喂养试验天喂养试验目的目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性。入的危害性。原理原理： 以不同剂量受试物每日经口给予各组实验以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续动物，连续3030天。染毒期间每日密切观察动物的毒天。染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不

35、同剂量的受试物对动物检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。引起的有害作用。30天喂养试验天喂养试验时间周期时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为：在获得了急性毒性数据后，一般为2 2月月 3-53-5天，大鼠适应期天，大鼠适应期 3030天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 再进行大体解剖、血液、生化、器官病再进行大体解剖、血液、生化、器官病 理检查。理检查。30天喂养试验天喂养试验剂量设计剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应：至少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡。低剂

36、量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。组。 对于能获得对于能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为：最高剂量为10102525的的LD50LD50，最低剂量组至少为人可能摄入量的，最低剂量组至少为人可能摄入量的3 3倍。倍。 对于不能获得对于不能获得LD50LD50的受试物的受试物：最高剂量为人可能摄：最高剂量为人可能摄入量的入量的100100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量。入量。30天喂养试验天喂养试验观察及评价指标观察及评价指标：一般情况观察一般情况观察：每日的表

37、现、行为、中毒和死亡情况。每周：每日的表现、行为、中毒和死亡情况。每周1 1次体重及次体重及2 2次食物摄入量，计算食物利用率。次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检查病理检查：大体解剖、脏器称重、组织

38、病理学检查。：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查。30天喂养试验天喂养试验试验结果的判定试验结果的判定： 对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，综合其它试验结果可初倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。步做出安全性评价。 最小观察到有害作用剂量最小观察到有害作用剂量人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，或倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例1010，放弃。放弃。 在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应

39、综合在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。其它试验结果判断其它试验结果判断q 传统致畸试验传统致畸试验： 需大于或等于人摄入量的需大于或等于人摄入量的100100倍。在倍。在5050倍至倍至100100倍之间需倍之间需进行安全性评价，小于进行安全性评价，小于5050倍需放弃。倍需放弃。q 9090天喂养试验、繁殖试验天喂养试验、繁殖试验：1.1.仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的分，需大于或等于人摄入量的100100倍。倍

40、。2.2.国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的入量的300300倍。在倍。在100100倍至倍至300300倍之间需进行慢性毒性试验，倍之间需进行慢性毒性试验，小于小于100100倍需放弃。倍需放弃。其它试验结果判断其它试验结果判断q 慢性毒性试验慢性毒性试验： 以以LD50LD50或或3030天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。物各剂量组，未见有毒性作用。q 致癌试验阳性判定依据致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。

41、肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早。符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。为致癌试验阳性。安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性安全性评价的艺术性：1.1.动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；2.2.安

42、全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；3.3.安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性。结论结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据。际指导意义的依据。应综合考虑的问题应综合考虑的问题1.1.试验指标的统计学意义和生物学意义试验指

43、标的统计学意义和生物学意义 在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则对照值范围比较的原则, ,来综合考虑指标差异有无来综合考虑指标差异有无生物学意义。生物学意义。2.2.生理作用与毒性作用生理作用与毒性作用 对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。应综合考虑的问题应综合考虑的问题3.3.时间时间- -毒性效应关系毒性效

44、应关系 对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。情况。4.4.特殊人群和敏感人群特殊人群和敏感人群 对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。免疫毒性。应综合考虑的问题应综合考虑的问题5.5.人的可能摄入量较大的保健食品人的可能摄入量较大的保健食品 应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物

45、利用率，从而导致某些毒理学素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致。表现，而非受试物本身的毒性作用所致。6.6.含乙醇的保健食品含乙醇的保健食品 对实验中出现的某些指标的异常改变，在结对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。分的作用。应综合考虑的问题应综合考虑的问题7.7.动物年龄对试验结果的影响动物年龄对试验结果的影响 对实验中出现的某些指标的异常改变，要考对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致。虑是否因动物年龄选择不当所致。8.8.安全

46、系数安全系数 鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为异，安全系数通常为100100。应综合考虑的问题应综合考虑的问题9.9.人体资料人体资料 在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。食用受试物后反应的资料。10.10.综合评价综合评价 在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的蓄积性、接触的人群

47、范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性。安全性。应综合考虑的问题应综合考虑的问题11.11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价。适用需重新评价。12.12.若受试物掺入饲料的最大加入量（若受试物掺入饲料的最大加入量（1010）或液体）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综

48、合其量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价。它的毒性试验结果进行安全性评价。审评结论的判定审评结论的判定1.1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性。结果能够证明受试物的安全性。2.2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：（1 1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。毒理学试验报告。（2 2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。（

49、3 3）未提供某些试验数据，需要补充提供。）未提供某些试验数据，需要补充提供。审评结论的判定审评结论的判定3.3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：（1 1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除法评价产品的安全性，需要做除3030天天/90/90天喂养天喂养试验以外的毒理学试验；试验以外的毒理学试验；（2 2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。结论，需要重复试验。（1 1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下

50、对人体）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题。具有一定的毒性，存在安全性问题。（2 2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有方含有“可用于保健食品的原料可用于保健食品的原料”名单以外的原名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。（3 3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。相应阶段的毒理学试验。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：（

51、4 4）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。的批号不一致。（5 5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。（6 6）3030天天/90/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。常，结果不可信。4.4.对产品的安全性不予认可的情况如下对产品的安全性不予认可的情况如下( (二二) )：第三部分第三部分保健食品新原料安全性毒理学评价原则 保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于

52、保健食品、国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。围内，拟用于保健食品的原料。 国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。为新原料。保健食品新原料定义保健食品新原料定义 在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新

53、原料进行管理：理：q未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；品的物品名单；q尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；品名单内；q卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。明的申报单位不一致。保健食品新原料定义保健食品新原料定义评价新原料安全性的基本原则评价新原料安全性的基本原则v符合国家标准和卫生要求，无

54、国家标准的应当符合国家标准和卫生要求，无国家标准的应当提供行业标准或自行制定并在相关部门备案的提供行业标准或自行制定并在相关部门备案的质量标准；质量标准；v新原料的名称、物种（基源）、生物学或生态新原料的名称、物种（基源）、生物学或生态学特征、来源及使用部位应确切；学特征、来源及使用部位应确切；v加工工艺安全合理，质量稳定、可控；主要成加工工艺安全合理，质量稳定、可控；主要成分（或组成）、化学结构明确，含量稳定；分（或组成）、化学结构明确，含量稳定；v适宜人群范围和可能摄入量明确，确定依据充适宜人群范围和可能摄入量明确，确定依据充分；分；评价新原料安全性的基本原则评价新原料安全性的基本原则v国

55、内外安全性毒理学文献资料、人体食用情况的检国内外安全性毒理学文献资料、人体食用情况的检索报告及流行病学资料显示，该新原料无食用中毒索报告及流行病学资料显示，该新原料无食用中毒或有害作用史；或有害作用史；v安全性毒理学试验结果显示，该原料在可能摄入量安全性毒理学试验结果显示，该原料在可能摄入量下对人体不产生急性、慢性或其它潜在的健康危害；下对人体不产生急性、慢性或其它潜在的健康危害；v微生物类新原料必须有食用习惯和安全食用历史，微生物类新原料必须有食用习惯和安全食用历史，培养基、菌种及其代谢产物必须无毒无害。培养基、菌种及其代谢产物必须无毒无害。新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学

56、试验项目的选择 无食用史无食用史 需做四阶段试验需做四阶段试验 局部地区有食用史局部地区有食用史 需做三阶段试验需做三阶段试验 可只做一、二阶段实验的包括可只做一、二阶段实验的包括 1 1）推荐食用量未超过人群常规用量的新原料，若根据有关文献资推荐食用量未超过人群常规用量的新原料，若根据有关文献资料及成分分析，未发现有毒或毒性甚微不至对健康构成损害，或者较大料及成分分析，未发现有毒或毒性甚微不至对健康构成损害，或者较大数量人群有长期食用历史且未发现有害作用的数量人群有长期食用历史且未发现有害作用的 2）已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价，且有资料证明所）已有权威机构进行系统的毒理学安全性评

57、价，且有资料证明所用原料与其一致用原料与其一致 如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求 新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 多个国家或国内多数地区广泛食用多个国家或国内多数地区广泛食用 1）推荐食用量未超过人群常规用量：先进行第一、二）推荐食用量未超过人群常规用量：先进行第一、二阶段毒性试验，根据试验结果决定是否进行下一阶段阶段毒性试验，根据试验结果决定是否进行下一阶段毒理学试验毒理学试验 2）推荐食用量超过人群常规用量：进行第一、二、三）

58、推荐食用量超过人群常规用量：进行第一、二、三阶段的毒性试验，根据试验结果决定是否进行第四阶阶段的毒性试验，根据试验结果决定是否进行第四阶段毒性试验。段毒性试验。 新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 根据新原料的特性、作用机制、已有的试验资料根据新原料的特性、作用机制、已有的试验资料及产品的适宜人群等信息，有针对性地选择敏感及产品的适宜人群等信息，有针对性地选择敏感试验、敏感动物、敏感指标，以全面了解新原料试验、敏感动物、敏感指标，以全面了解新原料的毒性。的毒性。 新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要

59、求新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 微生物类新原料除按上述要求进行安全性毒理微生物类新原料除按上述要求进行安全性毒理学试验外，还应进行以下试验：学试验外，还应进行以下试验： 1 1）菌种毒力试验；）菌种毒力试验； 2 2）耐药性试验；）耐药性试验； 3 3）有可能产生抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的菌）有可能产生抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的菌种，应进行有关抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的种，应进行有关抗菌素、真菌毒素或其他活性物质的检测；检测； 4 4）菌种代谢产物分析及其不产生有毒有害作用的试验。）菌种代

60、谢产物分析及其不产生有毒有害作用的试验。 新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验要求毒性试验的剂量设计毒性试验的剂量设计1 1、高剂量组应出现毒性作用但不引起动物死亡，、高剂量组应出现毒性作用但不引起动物死亡，低剂量组应不出现毒性作用，并求出未观察低剂量组应不出现毒性作用，并求出未观察到有害作用剂量（到有害作用剂量（NOAELNOAEL）。）。2 2、若根据已掌握的资料（包括第一、二阶段的、若根据已掌握的资料（包括第一、二阶段的毒性试验及预试验的结果等）判定新原料毒毒性试验及预试验的结果等）判定新原料毒性较小，或人体推荐量较大，则试验最高剂性较小，或人体推荐量较大，则试验最高剂量应为