上课4.3酵母细胞的固定化

1、课题3 酵母细胞的固定化温故知新： 1.洗衣粉中添加洗衣粉中添加_，可以更有效地清除顽渍。常，可以更有效地清除顽渍。常用的酶制剂有用的酶制剂有_四类。四类。 2.影响酶活性的因素有影响酶活性的因素有_、_和和_。酶制剂酶制剂蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、淀粉酶蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、淀粉酶温度温度 PH 酶的抑制剂酶的抑制剂 在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂，说明酶制剂使用有很多剂，说明酶制剂使用有很多优点优点，你能举出一些例，你能举出一些例子吗？子吗？ 催化效率高、低能耗、低污染等。催化效率高、低能耗、低污染等。 酶制剂的使用有酶制剂的

2、使用有缺点缺点吗？吗？ 你能举出一些例子吗？你能举出一些例子吗？3.反应后会混在产物中，可能影响产品质量影响产品质量。1.通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活容易失活；2.溶液中的酶很难回收，不能不能被再次利用再次利用，提高了生产成本；酶制剂存在的缺陷： 如果你是工程技术人员，你如何解决这个问题？ 阅读P49，并思考：1.解决酶应用中存在问题的方法是？2.这种方法的优点是什么？3.什么是高果糖浆？使用它有何好处？4.生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？5.了解高果糖浆生产过程。一、固定化酶的应用实例 1.固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术固定化酶技

3、术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。（如固定在不溶于水的载体上）。（1）使酶）使酶既能既能与反应物与反应物接触接触，又能与产物，又能与产物分离分离；（2）固定在载体上的酶可以被）固定在载体上的酶可以被反复利用反复利用。1.解决酶应用中存在问题的方法是？2.这种方法的优点优点是什么？3.什么是高果糖浆？使用它有何好处？什么是高果糖浆？使用它有何好处？ 果糖含量为果糖含量为42%左右的糖浆。作为蔗糖的替左右的糖浆。作为蔗糖的替代品，高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖代品，高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病，对人的健康有利。尿病、龋齿和心血管病，对人的健

4、康有利。 你能写出果糖的分子式吗你能写出果糖的分子式吗? 它属于什么糖它属于什么糖?4.生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？这种酶有何特点？ 生产高果糖浆需要生产高果糖浆需要葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶；其；其作用是将葡萄糖转化为果糖；这种酶作用是将葡萄糖转化为果糖；这种酶稳定性好，可持续发挥作用。稳定性好，可持续发挥作用。5.固定化酶技术生产高果糖浆的图示：固定化酶技术生产高果糖浆的图示： 注意反应柱的各部分名称。 你能说出反应柱的优点吗？ 反应柱能连续使用反应柱能连续使用半半年年，大大降低了生产成，大大降低了生产成本，提高果糖的产量和本，

5、提高果糖的产量和质量。质量。生产流程含淀粉的浆液-淀粉酶糊精糖化酶葡萄糖葡萄糖异构酶葡萄糖的异构化42%45%转化成果糖果葡糖浆果糖和葡萄糖分离葡萄糖再次异构化反复多次果糖含量70%90%高果糖浆1.研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ）A.温度 B.pHC.水分 D.营养D2.目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自（ ）A.化学合成 B.动物体内 C.植物体内 D.微生物体内 D 在生产实际中使用固定化酶技术有无不足?如有不足,怎么办?

6、 有。一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能进行，所以操作比较麻烦。 细胞中含有一系列酶，在细胞正常生命活动细胞中含有一系列酶，在细胞正常生命活动的过程中，通过代谢产生所需要的代谢产物。的过程中，通过代谢产生所需要的代谢产物。二、固定化细胞技术1、概念：、概念： 利用物理或化学方法将酶或细胞固定在利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间的技术。一定空间的技术。阅读阅读P50：思考第二段的问题：思考第二段的问题二、固定化细胞技术2.将酶或细胞固定化的方法将酶或细胞固定化的方法 将酶（或细胞）包埋在细微网格里将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞

7、）相互连接起来将酶（或细胞）相互连接起来将酶（或细胞）吸附在载体表面上将酶（或细胞）吸附在载体表面上包埋法包埋法化学结合法化学结合法吸附法吸附法酶和细胞固定方法的选择酶和细胞固定方法的选择酶酶适合采用化学结合和物理吸附法固定适合采用化学结合和物理吸附法固定细胞细胞适合采用包埋法固定适合采用包埋法固定（1）方法）方法（2）原因）原因细胞个大，酶分子很小细胞个大，酶分子很小 个体大的细胞难以被吸附或结合而个小个体大的细胞难以被吸附或结合而个小的酶容易从包埋的材料中漏出的酶容易从包埋的材料中漏出3、固定化细胞常用的载体、固定化细胞常用的载体常用的不溶于水的常用的不溶于水的多孔性多孔性载体有哪些？载体

8、有哪些？明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等聚丙烯酰胺等 如果反应底物是大分子物质，能否用固定化如果反应底物是大分子物质，能否用固定化细胞技术细胞技术?为什么？那应该采用何种技术为什么？那应该采用何种技术?1.酶的固定方法不包括( )。A.将酶吸附在固体表面上 B.将酶相互连接起来C.将酶包埋在细微网格里 D.将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶D2.固定化细胞对酶的活性影响最小，根本原因是( )。A.避免了细胞破碎、酶的提取纯化过程 B.固定化细胞在多种酶促反应中连续发挥作用C.促化反应结束后，能被吸收和重复利用D.细胞结构保证了各种酶在细胞

9、内化学反应中有效的发挥作用D（一）制备固定化酵母细胞（一）制备固定化酵母细胞阅读P5051思考下列问题：（1）制备过程包括哪几个步骤？（2）你认为哪个步骤的操作是最重要的一环？三、实验操作1.酵母细胞的活化思考：思考： 关于酵母菌你有哪些知识？关于酵母菌你有哪些知识？ 什么是活化？什么是活化？ 怎样活化？怎样活化？ 应注意什么？应注意什么？活性干酵母是由特殊培养的鲜酵母经压榨活性干酵母是由特殊培养的鲜酵母经压榨干燥脱水干燥脱水后后仍仍保持强的发酵能力保持强的发酵能力的干酵母制品。的干酵母制品。 活化：让处于休眠状态的微生物重新 恢复正常的生活状态； 本质：加快新陈代谢； 方法：加入适量的水。

10、取取1g干酵母，放入干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水的小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊酵母细胞混合均匀，成糊状，放置状，放置1h左右使其活化左右使其活化思考：你认为酵母的活化操作有哪些注意事项？所用容器要大一些；要保证酵母菌的活性；2.配制物质的量浓度为配制物质的量浓度为0.05mol/L的的CaCl2溶液溶液 称取无水称取无水CaCl2 0.83g。放入放入200mL的烧杯中，加的烧杯中，加入入150mL的蒸馏水，使其的蒸馏水，使其充分溶解，待用。充分溶解，待用。3.配制海藻酸钠溶液配制海藻酸钠溶液操作：操作： 称取称取0.7g

11、海藻酸钠，放入海藻酸钠，放入50mL小烧杯中小烧杯中.加人加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，注意，加热时要用加热时要用小火小火，或者，或者间断加热间断加热，反复几次，反复几次，直到海藻酸钠溶化为止直到海藻酸钠溶化为止4、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合、海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液将溶化好的海藻酸钠溶液冷冷却至室温却至室温，加入已活化的醉，加入已活化的醉母细胞，充分搅拌，使其混母细胞，充分搅拌，使其混合均匀，再转移至合均匀，再

12、转移至注射器注射器中。中。为什么海藻酸钠溶液要冷却？为什么海藻酸钠溶液要冷却？5、固定化酵母细胞 以以恒定的速度缓慢地恒定的速度缓慢地将注射器将注射器中的溶液中的溶液滴滴加到配制好的加到配制好的CaCl2溶液中，观察液滴在溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成溶液中形成凝胶珠凝胶珠的情的情形将这些凝胶珠在形将这些凝胶珠在CaCl2溶液溶液中中浸泡浸泡30 min左右。左右。加热使海藻酸钠溶化是操作中加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要最重要的一环的一环海藻酸钠的海藻酸钠的浓度浓度涉及到固定化细胞的质量。涉及到固定化细胞的质量。 浓度过浓度过高高：很很难形成难形成凝胶珠，凝胶珠，不是圆形或椭圆形不是

13、圆形或椭圆形； 浓度过浓度过低低：凝胶珠：凝胶珠颜色过浅、呈白色，颜色过浅、呈白色，包埋的酵包埋的酵 母母细胞的数目少细胞的数目少，影响实验效果。影响实验效果。应当注意什么问题？ 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间浸泡一段时间，以便形成稳定的结构稳定的结构。 检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在桌上用手挤压挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。（二）用固定化细胞发酵（二）用固定化细胞发酵 1、将固定好的酵母细胞、将固定好的酵母细胞

14、(凝胶珠凝胶珠)用用蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗2-3次。次。 2、 将将150mL质量分数为质量分数为10%的的葡萄糖溶液葡萄糖溶液转移到转移到200mL的锥的锥形瓶中，再加入固定好的酵母细形瓶中，再加入固定好的酵母细胞，置于胞，置于25下下发酵发酵24h。这一阶段成功与否呢？怎样评价？这一阶段成功与否呢？怎样评价？ 观察发酵的葡萄糖溶液；利用固定的观察发酵的葡萄糖溶液；利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多了很多气泡气泡，同时会闻到，同时会闻到酒味酒味。 还有其他方法吗？还有其他方法吗？类型优点不足直接使用酶催化效率高，低耗能、催化效率高，低耗能、低污

15、染等。低污染等。对环境条件非常对环境条件非常敏感敏感，容易，容易失活失活；溶液；溶液中的酶中的酶很难回收很难回收，不能被再次利用，提，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能可能影响产品质量影响产品质量。固定化酶酶酶既能既能与反应物与反应物接触接触，又能又能与产物与产物分离分离，同，同时，固定在载体上的时，固定在载体上的酶还可以被酶还可以被反复利用反复利用。一种酶只能催化一种化学反应一种酶只能催化一种化学反应，而在生，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的。列的酶促反应才能得到的。固

16、定化细胞成本低成本低，操作更容易。，操作更容易。固定后的酶或细胞与反应物固定后的酶或细胞与反应物不容易接近不容易接近，可能导致反应效果下降等。可能导致反应效果下降等。1.制备固定化酵母细胞的过程中错误的是（制备固定化酵母细胞的过程中错误的是（ ）A.取干酵母，加入蒸馏水，使其活化取干酵母，加入蒸馏水，使其活化B.配制海藻酸钠时，加热用大火，直到海藻酸钠溶配制海藻酸钠时，加热用大火，直到海藻酸钠溶化为止化为止C.将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入已活化的酵母细胞化的酵母细胞D.将凝胶珠在将凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡溶液中浸泡30 min左右左右B随

17、学随练2.下列叙述不正确的是（下列叙述不正确的是（ ）A.从操作角度来考虑，固定化细胞比固定化酶容从操作角度来考虑，固定化细胞比固定化酶容易易B.固定化细胞比固定化酶对酶的活性影响更小固定化细胞比固定化酶对酶的活性影响更小C.固定化细胞固定的是一种酶固定化细胞固定的是一种酶D.将微生物的发酵过程变成连续的酶反应应选择将微生物的发酵过程变成连续的酶反应应选择固定化细胞技术固定化细胞技术C3.下列说法不正确的是（ ）A.葡萄糖与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成的是果糖B.从固定化酶反应柱下端流出的是果糖C.高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、龋齿和心血管病D.酶溶解于葡萄糖溶液，可以从糖浆中回收

18、D随学随练4.使用固定化细胞的优点是( )。A.能催化大分子物质的水解 B.可催化一系列化学反应C.与反应物易接近 D.有利于酶在细胞外发挥作用B随学随练5.如果反应物是大分子物质，采用那种方法催化受限制( )。A.直接使用酶 B.使用化学方法结合的酶C.使用固定化细胞 D.使用物理吸附法固定的酶C6、下列关于酶和细胞的固定叙述不正确的是( )。A.酶分子很小，易采用包埋法 B.酶分子很小，易采用化学结合或物理吸附法固定的酶C.细胞个大，难被吸附或结合 D.细胞易采用包埋法固定A7. 关于固定化酶的叙述不正确的是 ( )。A.既能与反应物接触，又能与反应物分离 B.固定在载体上的酶可被反复利用C.可催化一系列反应 D.酶的活性和稳定性受到限制C人有了知识，就会具备各种分析能力，人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。