植物检疫检验技术

1、植物检疫检验技术目录一二三常用的实验室检测方法现场检验技术植物检疫检验技术一、现场检验技术现场检查和抽样是现场检验的主要内容。1、现场检查主要是针对运输及装载工具及存放货物、携带物及邮寄物等应检物进行直观检查。检查对象：运输、装载工具、货物及存入场所、携带邮寄物等；检验场地：机场、码头、车站等。现场检查方法：（1）肉眼检查：现场快速检查。（2）过筛检查：植物籽粒的现场检查。（3）x 光机检查：旅客携带物的现场检查。（4）检疫犬检查：旅客携带物的现场检查。过筛检查X光机检查检疫犬检查2、现场抽样是用科学的方法从检疫物总体中抽取有代表性的样品，作为评定该批检疫物质量和安全的依据。一般根据货物的种类

2、和可能携带的有害生物的生物学特性决定具体的抽样方案。现场抽样注意事项：代表性、害虫的移动性和趋性等。抽样标准和方法：抽样标准和方法有按批抽样、按件抽样、室内检验抽样和抽样方法。批：同一品名、同一商品标准、用同一运输工具、来自或运往同一地点、并有同一收货人或发货人的货物。件：一批货物中每一个独立的袋、箱、筐、桶、捆、托等。散装货物以一定重量为一件。样本量：一份样品的重量或体积。样本数：一批货物中的几份样品即为样本数检疫抽样中样本数的确定需要视货物类型而定。小样：初级样品，由一批货物的不同容器内或散堆的不同部位分别抽取的样品。混合样品：所取数份小样在容器内混合。平均样品：送检样品，小样混合后，再次

3、进行取样。抽样方法：根据不同有害生物的分布规律及生物学特性、货物数量、装载方式、堆放形式等而定。常用方法有对角线取样法、棋盘式取样法和随机取样法或分层随机取样法等几种。例如：分层随机取样法 在抽样总体中按生物个体划分为若干个层(组)，对每层分别抽取一组随机样本，然后通过加权对总体参数做出估计。二、常用的实验室检测方法是由检验人员在实验室中借助一定的仪器设备对样品进行深入检查的植物检疫法定程序，以确认有害生物是否存在或鉴别有害生物的种类。实验室检测方法有比重检测、染色检测、洗涤检测、保湿萌芽检测、分离培养检测、鉴别寄主检测、血清学检测、显微镜检测以及分子鉴定和计算机辅助鉴定（如PCR技术和计算机

4、技术结合）等。1、比重检测适用范围：一般用于检验种子、粮谷、豆类中的钻蛀性害虫，也可检验其中的菌瘿、菌核和病秕籽粒及菟丝子等杂草种子。原理：不同物质的密度不同。材料：常用饱和食盐水。比重检测比重即密度 即利用比重原理监测病粒与虫粒。健康种子生病种子轻重浮在水面沉在水底、染色检测高锰酸钾染色法：取样品15g，去除杂质后倒在铜丝网中，浸入30温水内min，移浸于1高锰酸钾溶液中浸染4560s，取出用清水漂洗掉黏附在籽粒表面的颜色，倒在白色吸水纸上，用扩大镜检查。凡籽粒上有黑点的，捡出解剖镜检。虫蛀品红染色法：取样品15g，放入铜丝网内，在30水中侵1min，移入酸性品红溶液中浸染25min，取出用

5、清水洗净，倒入白色吸水纸上，用扩大镜检查。凡虫蛀粒表面均染有0.5mm左右樱桃红小点；若是虫伤或机械损伤则染色浅且斑点不规则形。虫蛀碘或碘化钾染色法：对象: 豆象类蛀害的豆籽。方法: 取代表样品50g，放入铜网或包于纱布内，浸入1%碘化钾溶液或2%洒精碘溶液中，经1-1.5min，取出移入0.5%氢氧化钾溶液中浸30s，取出用清水洗涤15-20s，立即用扩大镜观察。凡豆粒表面有1-2mm直径圆斑者，即为虫蛀粒，结合镜下剖检。虫蛀病毒病染色：原理: 健康植株感染病毒病后，会产生多酚体，多酚体与氢氧化钠起化学反应能显现深蓝色。方法: 配乙醇甲醛溶液(95%乙醇700mL，37%甲醛20mL，蒸馏水

6、230mL混合)，用作脱色和多酚体固定剂。将样品投入上述溶液的试管内，在80水浴锅内加温，使样品完全脱绿。若溶液中含绿色过多，可换新溶液1-2次，即可脱净。样品脱绿后，投入盛有1mol/L NaOH溶液的试管中，在80-100的水浴锅内加温，待充分显色。若有多酚体存在则成深蓝色，反之则呈黄色。注意事项：样品有多酚体存在，呈蓝色的时间不长，当与空气接触后，在5-10min内，即起氧化作用而变成红色，故检查应及时。植株在受伤后也会产生多酚体，故取样时应避免截取受伤的叶片和根、枝。3、软X光透视检测? 0.01nm，硬X射线；0.01 ? 0.05nm，超软X射线；经软X射线照射后，健康的种子，全粒

7、均匀透明，有阴影斑点的为虫蛀粒、空壳或内部有虫体。4、洗涤检测对象：真菌、细菌、线虫方法：取样10-100g，分成两份，分别放入三角瓶内，各注入无菌水10-100mL，加入少许1%湿润剂，振荡5-10min，然后将悬浮倒入离心管离心，去除上清液后，镜检离心管底部物质。病原生物在底部沉降病原生物悬浮液检查植物材料表面附着的微生物孢子、病原线虫；用无菌水反复冲洗植物材料表面，得到病原菌物孢子悬浮液；或直接用少量植物材料浸水，进行高速离心分离5、保湿培养检测吸水纸法：用无菌吸水纸在培养箱中培养种子的病。 存在问题 ：许多重要种传真菌用该法不能长出；腐生菌的迅速生长干扰实验结果。 改进措施：冰冻吸水纸

8、法冰冻吸水纸法：将萌芽的幼苗在-20 下冰冻过夜。 优点：病原物易形成孢子，又便于检查。琼脂平皿法：用水琼脂液培养种子上的病原菌。 优点：有利于病原的生长，杂菌少，便于检查。多种培养方法6、分离培养检测科赫氏法则的应用真菌、细菌：组织分离法：试材消毒切小块后在培养基上培养。稀释培养法：按不同浓度稀释后在培养基上培养。划线培养法：沾一点病菌在培养基上划线后培养。线虫：改良贝尔曼漏斗法：用漏斗装置分离出线虫。过筛检验法：按不同粗细的筛子，筛出线虫。漂浮分离法：让线虫在水面漂浮，分离出线虫。分离培养检测步骤：(1)在病植物上常伴随有一种病原微生物存在； 镜检(2)该微生物可在离体的或人工培养基上分离

9、纯化而得到纯培养； 分离纯化(3)将纯培养接种到相同品种的健株上，出现症状相同的病害； 接种(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养，性状与接种物相同。 再次镜检鉴定接种检测类型（1)拌种接种：病菌孢子拌种，之后培养鉴别。(2)浸种接种：用病原孢子或细菌的悬浮液浸种。(3)花器接种：将孢子悬浮液用注射器喷到花内。(4)喷雾接种：将细菌或孢子悬浮液喷到植物上。 (5)针刺接种：用针束蘸取菌液后在叶片上穿刺。 (6)剪叶接种：用解剖剪剪去叶尖，浸细菌悬浮液。 (7)摩擦接种：用手或玻璃棒蘸病毒液，摩擦叶片。 7、害虫的检验方法A、饲养检验 将样品定量后置温箱内，定温在2526下饲养35d或更长时间

10、，测定害虫含量并鉴定种类。地下害虫饲养箱昆虫培养箱塑料袋密封数小时后，其中的实蝇幼虫因缺氧破果而出。B、塑料袋密封检验C、水盆观察法 将水果或蔬菜放入一个瓷盘内，支放在盛有清水的大瓷盆上，再用40目尼龙纱罩上。室温下观察7-10d，实蝇幼虫会从果中弹进大盆内。本方法主要用于新鲜成熟度不高的水果。8、血清学检测血清学反应：指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应。通常用含有抗体的血清作为实验材料，所以把体外的抗原、抗体反应称为血清学反应.各种病原生物、害虫均可采用血清学方法来检测，关键是要制备具有专化性的抗体(抗血清)，利用抗原抗体反应检测样本中有无目标生物存在。常用的检测方法凝胶扩散试验：乳胶凝集试验：酶联免疫分析：斑点免疫技术：免疫荧光检验：免疫电镜技术：9、核酸技术核酸技术是一种DNA分析鉴定技术，其方法快速、准