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文档简介

1、动物组织中核酸的提取与鉴定动物组织中核酸的提取与鉴定n一、生物大分子制备方法基本设计思路一、生物大分子制备方法基本设计思路n流程：选材流程：选材破碎破碎抽提抽提浓缩浓缩分离纯化分离纯化 n破碎方法：机械、物理、化学、生物n浓缩方法：沉淀（盐析，可逆变性，有机溶剂等）n生化实验三大分离技术：n离心技术n层析技术n电泳技术二、实验方法及设计流程二、实验方法及设计流程1、提取（、提取（3课时）课时）n猪肝猪肝 匀浆匀浆 三氯醋酸沉淀核蛋白三氯醋酸沉淀核蛋白 离心离心（3200-3500 rpm，5min） 沉淀加入乙醇加热清洗沉淀加入乙醇加热清洗 离心离心 沉淀加入沉淀加入10%NaCl 调调pH4

2、5（1滴滴左右左右），沸水浴），沸水浴(换成玻璃离心管换成玻璃离心管）抽提）抽提（再换回原离心管）再换回原离心管） 冷却冷却离心离心 上清加入上清加入（冰冷）（冰冷）乙醇（沉淀浓缩）乙醇（沉淀浓缩） 离心离心得核酸钠沉淀，弃去上清。得核酸钠沉淀，弃去上清。n(第一部分完成，贴好标签，冷冻保存。）第一部分完成，贴好标签，冷冻保存。）2、鉴定（、鉴定（2课时）课时）n核酸钠沉淀核酸钠沉淀+5%硫酸硫酸水解（水解（15分钟）分钟） 水解液水解液n嘌呤嘌呤+硝酸银硝酸银灰色絮状沉淀（碱性）灰色絮状沉淀（碱性）n磷酸磷酸+钼酸铵钼酸铵+Vc蓝色钼蓝（沸水浴）蓝色钼蓝（沸水浴）n核糖核糖+3，5-二羟甲苯二羟甲苯绿色化合物（浓酸、沸水浴）绿色化合物（浓酸、沸水浴）n脱氧核糖脱氧核糖+二苯胺二苯胺蓝色化合物（浓酸、沸水浴）蓝色化合物（浓酸、沸水浴）复习与思考n1、根据生物大分子制备方法基本设计思路，根据生物大分子制备方法基本设计思路，写出核酸提取制备的设计原理。写出核酸提取制备的设计原理。n2、样品如何判断是、样品如何判断是DNA、还是、还是RNA,反应条反应条件如何？件如何

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