微生物实验课件：实验4 常用培养基的制备和湿热灭菌

1、常用培养基的制备和湿常用培养基的制备和湿热灭菌热灭菌 l了解常用培养基的配制原理和方法，掌了解常用培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。握其配制过程。l掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。法。l正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。由于微生物种类及代l谢类型的多样性因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。培养基分类培养基分类据组成成分可分为据组成成分可分为:

2、1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。质配制而成。3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。据用途可分为据用途可分为1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求基础培养基：能满足各种微生物的营养需求加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离使其快速生长，便于分离3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微

3、生物生长，使目选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离标微生物得到富集，便于分离4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。l按培养基的物理状态可分为按培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入半固体培养基：在液体培养基中加入0.20.5%凝固凝固剂而成

4、的半固体状培养基。剂而成的半固体状培养基。常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。l消毒：消毒：使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的使用理化因素方法杀死物体表面绝大多数微生物的方法。方法。l灭菌：灭菌：采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方采用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物的方法。法。l干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器干热灭菌法：电热烘箱作为干热灭菌器l加压蒸汽灭菌法其步骤如下：加压蒸汽灭菌法其步骤如下：1.1.灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。2.2.接

5、通电源，进行加热接通电源，进行加热3. 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm0.5kg/cm2 2时再打开排气阀，待压力回复到时再打开排气阀，待压力回复到0 0时再关闭排气时再关闭排气阀。阀。4.4.当压力达当压力达1.05kg/cm1.05kg/cm2 2时，此时灭菌器内的温度为时，此时灭菌器内的温度为1211210 0C C，维持维持30min30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基

6、酸等物时，应适当降低压力，延长时间。等物时，应适当降低压力，延长时间。5.5.灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品。l间歇灭菌法：间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮蒸煮1次，每次煮沸次，每次煮沸1h，连续，连续3d重复进行。重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营

7、使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。养体，以便下次蒸煮时杀灭。l过滤除菌法：过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。l紫外线灭菌法：紫外线灭菌法： 一般一般30W灯管，灯管，9m3空间，距地面空间，距地面2m每次打开每次打开紫外线照射紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力

8、，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。l化学药剂消毒灭菌：化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。杀菌剂，有的是抑菌剂。l药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂；l高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器l其

9、它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸（试纸（pH5.5-9.0）、刻度搪瓷）、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、玻棒、带棉塞的无菌试管、杯、量筒、漏斗、玻棒、带棉塞的无菌试管、各种包装纸、绳索、标签、记号笔等。各种包装纸、绳索、标签、记号笔等。l培养基的配制培养基的配制l高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌l称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。l溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。l调调pH值：用值：用 NaOH或或HCl调调pH，用，用pH试纸对照试纸对照。l加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。l分装：注意不要污染棉塞。分装：注意不要污染棉塞。l包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔或记号笔写），注明包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔或记号笔写），注明何种培养基。何种培养基。l高压蒸汽灭菌备用：高压蒸汽灭菌备用：1210C灭菌灭菌15min，灭菌后需做无菌，灭菌后需做无菌检查（检查（370C培养培养24h），方可使用。），方可使用。l用于分离和培养