微生物实验(5)

1、实验五、实验五、常见病原性球菌的检查常见病原性球菌的检查河南大学医学院河南大学医学院 娄强娄强qiang_目的要求目的要求 掌握常见病原性球菌的主要生物学性状掌握常见病原性球菌的主要生物学性状 熟悉常见病原性球菌有关的鉴定方法熟悉常见病原性球菌有关的鉴定方法病原性球菌病原性球菌 葡萄球菌葡萄球菌(金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌檬色葡萄球菌) 链球菌链球菌 肺炎球菌肺炎球菌 脑膜炎球菌脑膜炎球菌 淋球菌淋球菌葡萄球菌检验程序葡萄球菌检验程序 浓汁等标本浓汁等标本 直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检 初报初报 血液血液 增菌培养增菌培养 分离培养，取可疑

2、菌落鉴定分离培养，取可疑菌落鉴定 粪便、呕吐物粪便、呕吐物 分离培养（高盐甘露醇平板）分离培养（高盐甘露醇平板） 纯培养，煮沸杀菌离心纯培养，煮沸杀菌离心 鉴定肠毒素（鉴定肠毒素（ELISA） 细菌鉴定项目细菌鉴定项目 涂片镜检涂片镜检 、 血浆凝固酶实验、耐血浆凝固酶实验、耐热核酸酶实验热核酸酶实验 、甘露醇发酵、甘露醇发酵 药敏试验药敏试验致病性葡萄球菌鉴定依据致病性葡萄球菌鉴定依据 金黄色色素金黄色色素 有溶血环有溶血环 凝固酶实验阳性凝固酶实验阳性 耐热核酸酶实验阳性耐热核酸酶实验阳性 分解甘露醇分解甘露醇三株葡萄球菌的比较三株葡萄球菌的比较性状性状 金葡菌金葡菌 表葡菌表葡菌 腐葡菌

3、腐葡菌色素色素 金黄色金黄色 白色白色 白或柠白或柠血浆凝固酶血浆凝固酶+ - -溶血素溶血素+ -/+ -耐热核酸酶耐热核酸酶+ - -A蛋白蛋白 + - -分解甘露醇分解甘露醇 + - -致病性致病性 强强 弱弱 弱弱观察并记录实验结果观察并记录实验结果 分离培养、观察菌落特征：分别取三种葡萄球菌培养物，分离培养、观察菌落特征：分别取三种葡萄球菌培养物，用分离划线方法接种血平板，用分离划线方法接种血平板，37培养培养18-24h以后观察结以后观察结果（记录结果）。果（记录结果）。 革兰染色、观察形态学特征：取葡萄球菌培养物少许涂片，革兰染色、观察形态学特征：取葡萄球菌培养物少许涂片，革兰染

4、色、镜检（画图）。革兰染色、镜检（画图）。 生化反应（示教）：分别取三种葡萄球菌培养物，用穿刺生化反应（示教）：分别取三种葡萄球菌培养物，用穿刺接种的方法接种甘露醇生化反应管，接种的方法接种甘露醇生化反应管， 37培养培养18-24h以以后观察结果（示教）。后观察结果（示教）。血浆凝固酶实验血浆凝固酶实验实验原理实验原理 血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌的致病物质，有二血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌的致病物质，有二种：游离型和结合型；前者可使血浆中纤维蛋白种：游离型和结合型；前者可使血浆中纤维蛋白原变为纤维蛋白导致血浆凝固；后者使纤维蛋白原变为纤维蛋白导致血浆凝固；后者使纤维蛋白原变为纤维蛋白，使葡萄球

5、菌凝聚成颗粒。原变为纤维蛋白，使葡萄球菌凝聚成颗粒。生理盐水生理盐水血浆血浆耐热核酸酶实验耐热核酸酶实验实验原理实验原理 致病性葡萄球菌产生，耐受煮沸，能分解致病性葡萄球菌产生，耐受煮沸，能分解DNA，使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色。使含甲苯胺蓝核酸琼脂显示粉红色。链球菌形态与培养链球菌形态与培养 形态与染色：形态与染色： G+，链状排列，无鞭毛、芽胞。，链状排列，无鞭毛、芽胞。 血平板培养特性：血平板培养特性：甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌丙型链球菌丙型链球菌鉴定试验（示教）鉴定试验（示教） 杆菌肽实验（杆菌肽实验（A群链球菌）群链球菌） 奥普托欣敏感试验（

6、奥普托欣敏感试验（A群链球菌）群链球菌） 胆汁溶菌与菊糖发酵试验（与肺炎球菌鉴胆汁溶菌与菊糖发酵试验（与肺炎球菌鉴别）别） 血清学分群鉴定试验（胶乳试剂盒）血清学分群鉴定试验（胶乳试剂盒）抗链抗链“O”测定测定 实验原理实验原理 机体针对链球菌溶血素机体针对链球菌溶血素O可产生相应抗体可产生相应抗体(ASO)，ASO高滴度的病人血清被适量的溶血素中和掉正高滴度的病人血清被适量的溶血素中和掉正常水平的抗体后还有常水平的抗体后还有ASO多余，此多余的抗体即多余，此多余的抗体即与与ASO胶乳试剂反应，出现清晰均匀的乳胶颗粒。胶乳试剂反应，出现清晰均匀的乳胶颗粒。 实验材料实验材料 ASO快速凝集胶乳

7、试剂盒快速凝集胶乳试剂盒 病人血清病人血清 玻片玻片实验方法实验方法 加血清加血清1滴滴 加溶血素加溶血素O1滴滴,摇动摇动1min 加加ASO胶乳试剂胶乳试剂1滴，摇动滴，摇动35min结果结果 出现清晰凝集颗粒为阳性出现清晰凝集颗粒为阳性 注意事项：玻片扔入废弃缸注意事项：玻片扔入废弃缸抗链抗链“O”测定测定肺炎球菌肺炎球菌 脑膜炎球菌脑膜炎球菌 淋球菌淋球菌 实验内容实验内容 肺炎球菌肺炎球菌 脑膜炎球菌脑膜炎球菌 淋球菌标本片观察淋球菌标本片观察 实验结果：画图实验结果：画图肺炎链球菌形态与肺炎链球菌形态与染色染色 革兰阳性双球菌革兰阳性双球菌 直径直径1m。矛头状，。矛头状，钝端相对钝端相对 厚荚膜厚荚膜 + 鞭毛鞭毛 - 芽胞芽胞 - 自溶酶自溶酶 +脑膜炎球菌形态与染色脑膜炎球菌形态与染色 G- ，0.6-0.8m 肾形或豆形，成双肾形或豆形，成双排列，凹面相对；排列，凹面相对； 病人脑脊液（病人脑脊液（CSF）中典型，多位于中中典型，多位于中性粒细胞内；性粒细胞内； 无鞭毛和芽胞；新无鞭毛和芽胞；新