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文档简介
1、RNA干扰机制干扰机制安德鲁安德鲁法尔和克雷格法尔和克雷格梅洛梅洛+Arthur KornbergDNA聚合酶的发现者聚合酶的发现者1959Roger D. Kornberg真核生物转录机制真核生物转录机制2006 拓扑异构酶DNA聚合酶III前导链前导链模板解链酶 引发酶 RNA引物后随链模板DNA聚合酶III冈崎片段 亲本DNA单链结合蛋白引发体 半不连续复制与冈畸片段半不连续复制与冈畸片段(1)引发酶合成RNA引物 (2)DNA聚合酶III在引物3-OH延伸,合成冈崎片段 (3)DNA聚合酶I切除引物,填补缺口 (4)连接酶封闭缺口 型复制型复制 滚环式复制滚环式复制 D D环复制环复制
2、PCR: Viral detectionPCR: DNA fingerprintingPCR: DNA fingerprintingDNAmRNATranscriptionCellPolypeptide(protein)TranslationRibosome4. 转录的底物是转录的底物是4 4种核糖核苷三磷酸种核糖核苷三磷酸(rNTP)(rNTP),即,即ATPATP、GTPGTP、CTPCTP和和UTPUTP;RNARNA与模板与模板DNADNA的碱基相互配对关系为的碱基相互配对关系为G-C G-C 和和A-UA-U。而复制的底物是。而复制的底物是dNTPdNTP,碱基互补配对关系为,碱基互
3、补配对关系为G-CG-C和和A-TA-T。5. RNARNA的合成依赖于的合成依赖于RNARNA聚合酶的催化作用,而聚合酶的催化作用,而DNADNA复制需复制需要要DNADNA聚合酶,两种聚合酶系不同。聚合酶,两种聚合酶系不同。6. 转录时转录时DNA-RNADNA-RNA杂合双链分子是不稳定的,杂合双链分子是不稳定的,RNARNA链在延伸链在延伸过程中不断从模板链上游离出来,模板过程中不断从模板链上游离出来,模板DNADNA又恢复双链状态;又恢复双链状态;而而DNADNA复制叉形成之后一直打开,不断向两侧延伸,新合成的复制叉形成之后一直打开,不断向两侧延伸,新合成的链与亲本链形成子链。链与亲
4、本链形成子链。7. 真核生物基因和真核生物基因和rRNArRNA、tRNAtRNA基因经转录生成的初级转录物基因经转录生成的初级转录物一般都需经过加工,才能具有生物功能和成熟的一般都需经过加工,才能具有生物功能和成熟的RNARNA分子。分子。 RNA TranscriptProtein Coding RegionTerminator SequencePromoter/Control Region3 Untranslated RegionTranscription Start Site5 Untranslated Region Constitutive GeneHeat Shock GeneP1
5、P2Different promotersRNAPol. 2、转录的延伸、转录的延伸3、转录的终止、转录的终止 强终止子的结构强终止子的结构 因子不依赖转录终止机制因子不依赖转录终止机制 Robert Holley H. G. Khorana Marshal Nirenberg 1968 肽链的延伸过程肽链的延伸过程 肽链的延伸过程肽链的延伸过程Francois JacobJacques Monod1965trpRtrpOtrpEDCBAPtrpLtrpa色氨酸色氨酸阻遏蛋白阻遏蛋白不转录不转录 6个层次个层次转录转录RNA 加工加工mRNA 转运转运mRNA 翻译翻译mRNA 降解降解1.
6、蛋白质降解蛋白质降解1、DNA及染色体水平的调控及染色体水平的调控2、转录水平的调控、转录水平的调控2.1 基因转录的顺式作用元件和反式作用元件基因转录的顺式作用元件和反式作用元件 顺式作用元件:基因转录调控区。顺式作用元件:基因转录调控区。(增强子、启动子、沉默子及应答元件等)(增强子、启动子、沉默子及应答元件等) 反式作用元件:转录因子,与顺式作用元件相结合,反式作用元件:转录因子,与顺式作用元件相结合,影响转录。影响转录。 转录因子:基本转录因子,转录激活因子,转录抑转录因子:基本转录因子,转录激活因子,转录抑制因子制因子转录因子的转录因子的DNA结合域(左图为结合域(左图为H-T-H结构,右图为锌指结构)结构,右图为锌指结构)二聚体化域是负责蛋白与蛋白相互作用形成二聚体的结构域,常二聚体化域是负责蛋白与蛋白相互作用形成二聚体的结构域,常见的特征性结构有:见的特征性结构有:亮氨酸拉链(亮氨酸拉链(leucine zipper)和螺旋
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