北工大 微生物学 第2章

1、第二章 微生 物的 纯培 养和 显微 技术培养物:在人为规定条件下培养,繁殖得到的微生物群体.纯培养物-而具有一种微生物的培养物.显微技术-显微标本的制作,观察,测定,分析及记录等.自然环境如土壤和水中，通常栖息自然环境如土壤和水中，通常栖息着的是许多不同微生物混杂在一起着的是许多不同微生物混杂在一起的群体。哪怕是一粒砂或尘土，也的群体。哪怕是一粒砂或尘土，也常含有多种细菌及其它微生物。常含有多种细菌及其它微生物。简单易行，但易造成机械损伤简单易行，但易造成机械损伤Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a ste

2、rile bent glass rod. 纯培养的分离方法纯培养的分离方法 稀释倒平板法稀释倒平板法 稀释倒平板法分离微生物稀释倒平板法分离微生物平板划线法分离微生物平板划线法分离微生物特点：快速、方便。特点：快速、方便。 分区划线（适用于浓度较大的样品）分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）An inoculating loop is used to thin out organisms on the surface of the agar. 简单易行，但易造成机械损伤简单易行，但易造成机械损伤Viable cell count1.

3、dilute sample1 ml9 ml10 100 1000 104 105 106 107cell no/ml2. plate out 0.1 ml Inoculating an agar plate to obtain single coloniesMixed culturePure cultureMixed cultureOral swabSwab from sole of shoeEach colony was examined microscopically三、用液体培养基获得纯培养三、用液体培养基获得纯培养 个体大的细菌原生动物藻类稀释法-接种物在液体培养基中进行顺序稀释,以得

4、到高度稀释效果,使一只试管中分配不到一个微生物.如果经稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是纯培养物.如果经稀释后的试管中有微生物生长的比例提高了,得到的纯培养物的概率就会下降.采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。进行培养以获得纯培养的方法。该方法要在显微镜下进行。毛细管法：毛细管法：用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。用毛细管提取微生物个体，适合于较大微生物。显微操作仪：显微操作仪：用显微针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获用显微

5、针、钩、环等挑取单个细胞或孢子以获得纯培养。得纯培养。小液滴法：小液滴法：将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜将经过适当稀释后的样品制成小液滴，在显微镜下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。下选取只含一个细胞的液滴来进行纯培养物的分离。为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可为了从混杂的微生物群体中分离出某种微生物，可以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条以根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等，采用选择培养的方法进行分离。件等，采用选择培养的方法进行分离。利用选择培养基进行直接分离利用选择培养基进行直接分离富集培养富集培养选择培养基分离法1.dilute sa

6、mple1 ml9 ml10 100 1000 104 105 106 107牛肉膏培养基牛肉膏培养基土豆培养基土豆培养基高氏培养基高氏培养基细菌在固体培养基中的生长情况光滑型菌落粗糙型菌落粘液型菌落细菌在液体培养基中的生长情况菌膜菌沉淀均匀浑浊对照细菌在半固体培养基中的生长情况n菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研亡、不变异、不被污染，以达到便于研 究、交换和使用等诸方面的需要。究、交换和使用等诸方面的需要。n 该法是将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比

7、例分装于该法是将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例分装于小试管中，砂土的高度约小试管中，砂土的高度约1cm1cm，121121蒸汽灭菌蒸汽灭菌1 11.5h1.5h，间歇间歇灭菌灭菌3 3次。次。5050烘干后经检查无误后备用。将待保藏的菌株制烘干后经检查无误后备用。将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约下孢子与载体混匀，而后置于干燥器中抽真空约2 24h4h，用火用火焰熔封管口焰熔封管口( (或用石蜡封口或用石蜡封口) )，置于干燥器中，在室温或，置于干燥器中，

8、在室温或44冰冰箱内保藏。箱内保藏。 n 此法适用于各大类微生物。此法适用于各大类微生物。n 此法的主要保藏措施是低温、干燥、缺氧、有保护剂，保此法的主要保藏措施是低温、干燥、缺氧、有保护剂，保藏期一般长达藏期一般长达5 51515年，存活率高，变异率低，是目前被广泛年，存活率高，变异率低，是目前被广泛采用的一种较理想的保藏方法。采用的一种较理想的保藏方法。n 该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。该法操作比较烦琐，技术要求较高，且需要冻干机等设备。脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌双球菌双球菌(diplococcus)肺炎链球菌肺炎链球菌链球菌链球菌(streptococcus)葡萄球菌葡萄球菌(streptococcus)四联球菌四联球菌(tetrad)八叠球菌八叠球菌(sarcina)不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。不同杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌 3-10 m大中大肠埃希菌 2-3 m小布鲁菌 0.6-1.5 m两端齐平炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌两端尖细白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌杆菌的形态多样杆菌的形态多样分枝杆菌分枝杆菌双歧杆菌双歧杆菌弧菌弧菌螺菌螺菌螺杆菌螺杆菌 荚膜：荚膜： 某些细菌在其细胞壁外包绕一层黏液性物质，为疏水性多糖或蛋白质的多聚体，用理化方法去除