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文档简介

1、EcoRI 特异识别GAATTC 及其互补碱基组1 生命根本特征: 根本单位: 细胞 根本功能: 新陈代谢,生长,运动 通过繁殖延续,遗传根本物质: DNA 个体发育,系统进化 适应性2 poly U 全部苯丙氨酸 内含子 外显子 不编码蛋白,原核无 编码蛋白 翻译: 5'->3' 表达调控: 转录水平 前体加工 核膜向细胞质运输 细 胞质中稳定性 mRNA 选择性调节 蛋白质活化和后处理3基因文库的构建将总 DNA 包含的基因组各片段分别克隆在 质粒或噬菌体载体上, 便构成了该生物的基 因文库。费时费事 内含子序列逆转录:以 mRNA 为模板,以短的寡核苷 酸oligo

2、(dT)分子作引物,参加dATP, dTTP, dGTP 和 dCTP, oligo(dT) 与 mRNA 分子的多 聚 A polyA 尾巴碱基配对。大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的 Klenow 片段的作 用下:人工合成互补子链互补DNAcDNA 。转录产生编码特殊蛋白的 mRNA 。 用 cDNA 方法获取的 DNA 片段往往是 具有特定功能的目的基因PCR 技术酶促反响大量扩增包括别离目的基因。4 种物质: 1模板 DNA ; 2 目的基 因两条链 5'端互补 DNA 引物短 DNA 单链 ;3TaqDNA 聚合酶; 4 dNTP dATP, dTTP, dGTP 和 dCTP

3、变性:解链;退火:配对;延伸:合成25个 4限制性内切酶: 200 多成的双链片段 , 粘性末端 T4 连接酶 载体:常用包括细菌质粒、 l 噬菌体、 cosmid 质粒等。检测: 酶切:利用 lacZ 基因的插入失活筛选重组 质粒lacZ 表达半乳糖苷酶,含 IPTG 和 X-gal , X-gal 被半乳糖苷酶水解成兰色, 电泳:琼脂糖凝胶电泳别离鉴定大小不等的 酶解片段 , 磷酸基团带负电荷 载体法转化农杆菌介导法 基因的直接转移 (1)高压电脉冲电激穿孔 2 基因枪法 3 微注射法5人胚胎干细胞包括人胚胎来源的干细胞、 生 殖细胞起源的干细胞和通过核移植所获得 的干细胞。用于研究的人胚

4、胎干细胞只能通过以下方 式获得:一 体外受精时多余的配子或囊胚;二 自然或自愿选择流产的胎儿细胞;三 体细胞核移植技术所获得的囊 胚和单性分裂囊胚;四 自愿捐献的生殖细胞。利用体外受精、体细胞核移植、单性复制技术或遗传修饰获得的囊胚, 其体外培养期限 自受精或核移植开始不得超过 14 天。6 被转移的氢原子所携带的能量储藏在新化 学键中XH2 复原型底物+ NAD+ t X氧化型底物 NADH H+XH2 复原型底物 NADP+ tX 氧化型底物 NADPH H+XH2 复原型底物+ FAD t X氧化型底物FADH2复原态的 NADH 和 FADH2 等还可将所接受的电子和氢传递给其他传递体

5、如细胞色素、 辅酶 Q 等。NAD :尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸, 辅酶 INADP :尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷 酸,辅酶 IIFAD:黄素腺嘌呤二核苷酸 琥珀酸脱氢酶是唯一嵌入到线粒体内膜的 酶 线粒体的内膜上含有电子传递链及 ATP 酶 复合体由葡萄糖到丙酮酸的糖酵解过程中, 所有的 中间产物都是以磷酸化合物的形式来实现 的。糖酵解发生在细胞质中的 10 步反响,前 5 步为准备阶段,需要消耗 2 分子 ATP 来启 动,后 5 步为产生 ATP 的贮能阶段,共产 出 4 分子 ATP ,还形成 2 个高能化合物 NADH 。糖酵解将六碳的葡萄糖分解成 2个三碳的丙 酮酸,净产生2个ATP,生

6、成2分子NADH 。参与化合物是葡萄糖, ADP 和磷酸, NAD+ 。需要 10 种酶的参与,大局部酶需要 Mg2 作为辅助因子。但丙酮酸需先转变成乙酰辅酶 A 后才进入 三羧酸循环 。该循环过程中的第一个化合物为柠檬酸; 循 环的最后产物是草酰乙酸。分解 1 分子丙酮酸形成 3 分子 CO2、 4 分 子 NADH 和 1分子 FADH2 及 1分子 ATP。 电子传递链又称呼吸链, 主要成分是线粒体 内膜上的蛋白复合物, 这些复合物包含了一 系列的电子传递体。通过一系列的氧化复原反响, 将高能电子从NADH 和 FADH2 最终传递给分子氧, 生成 水。随着电子能量水平的逐步下降, 高能

7、电子所 释放的化学能就通过磷酸化途径贮存到ATP 分子中, 这个过程也被称为氧化磷酸化 过程。在磷酸化过程中, 相关的酶将底物分子上的 磷酸基团直接转移到 ADP 分子上。整个糖酵解中 ATP 的形成都是底物水平的 磷酸化反响在呼吸链电子传递过程中, 电子从最上游的 经呼吸链传递到分子氧:每分子 NADH 释 放出的能量可产生 2.5 分子 ATP; 每分子的 FADH2 可产生 1.5 分子 ATP。 糖酵解:底物水平的磷酸化产生 4 个 ATP, 己糖活化消耗2个ATP,脱氢反响产生2个 NADH ,经电子传递链生成 3 或 5 个 ATP, 净产生 5 或 7 个 ATP;Krebs 循

8、环:底物水平的磷酸化产生 2 个ATP,脱氢反响产生 8个NADH 和2个FADH2 , 8 个 NADH 经电子传递链生成 20个 ATP, 2 个 FADH2 经电子传递链生成 3 个ATP,净产生 25个ATP。整个有氧呼吸过程净产生 30还是32个ATP 取决于糖酵解阶段产生于细胞质中的 NADH 穿过线粒体膜进入呼吸链时是否消 耗能量。CO2 是通过三羧酸循环形成的;而 H2O 那么 是在电子传递过程的最后阶段生成; 三羧酸循环过程中释放的 CO2 不是直接来 自于氧气, 而是靠氧化底物中的氧和水分子 中的氧来实现的; 生物细胞通过底物水平磷酸化和与电子传 递系统偶联的磷酸化 2种途

9、径合成ATP。底 物水平的磷酸化是相关的酶将底物分子上 的磷酸基团直接转移到 ADP 分子上。与电 子传递系统偶联的磷酸化涉及化学渗透过 程。7Fe :所有的生物所需;I:主要是脊椎动物所需这些功能基团几乎都是极性基团。亲水蛋白种类: 结构 伸缩 防御 贮存 运输 激 素 信号 酶氨基酸呈两性离子状态,具有等电点 (pH) 蛋白质一级结构是靠共价键 肽键维系的; 而高级结构主要是靠非共价键 氢键、疏水 键、离子健和范德华力维系的。一级结构: 决定许多性质与功能及蛋白质在 细胞内的定位信号、修饰信号和寿命信号。三级结构表达生物活性DNA 的二级结构是指两条多核苷酸长链以 反向平行盘绕而成的双螺旋

10、状结构, 它又包 括三种构象,即 B-DNA 、 A-DNA 及 Z-DNA ,但以 B-DNA 构象最稳定和普遍。 DNA 分子为二条多核苷酸链以一共同轴为 中心,盘绕成右手双螺旋结构,嘌呤碱和嘧 啶碱基位于螺旋的内侧, 磷酸和脱氧核糖基 位于螺旋外侧; 每 10 个核苷酸形成一个螺旋,直径约为 2 nm。螺旋盘绕形成链间的两种沟,即宽的 大沟与窄的小沟;二条多核苷酸链的走向相反, 通常取左侧链从上到下为5' t 3'端,右那么链从下向上为 5 t 3'端。T与A之间有二个氢键,G与C之间有三个 氢键。DNA 三级结构是指 DNA 双螺旋进一步扭曲 盘绕所形成的特定空

11、间结构, 又分为正超螺 旋和负超螺旋,以负超螺旋为主。通常人们把 50%DNA 分子发生变性的温度 称为变性温度。独特的紫外线吸收光谱。特别是在240290nm 波长之间有一强烈的吸收峰, 最大在 260nm 处;DNA 在不同氯化钠溶液中的溶解度是不同 的,当氯化钠的浓度为 0.14mol/L 时,其溶 解度最低;具有等电点,但在中性 pH 值的情况下带负 电。8在光合作用中,不是 CO2 而是 H2O 被光解 放出了 O2。叶绿素分子是一种可以被可见光激发的色 素分子 ;在光子驱动下发生的得失电子反响是光合 作用过程中最根本的反响。叶绿素a、b,类胡萝卜素,藻胆素等。叶绿素 a 启动光反响

12、叶绿素的吸收光谱有两个:430-450nm ;640660nm类囊体膜含有植物的光合作用的色素和电子传递系统以及 ATP 酶复合物,所以又称 为光合膜;基质主要成分包括碳同化相关的酶类。 CO2 固定反响就发生在基质中;类囊体腔在光能转化为 ATP 的过程中起重 要作用。光合单位 =天线色素系统反响中心色素11光合磷酸化 :叶绿体在光下把无机磷和ADP转化为ATP,形成高能磷酸键的过程,即与光能起始的电子传递过程相偶联的 ATP 形 成过程。暗反响:是指叶绿体利用光反响产生的 NADPH 和 ATP 的化学能,使 CO2 复原成 糖的过程。电子沿传递链最终到达电子受体 NADP+ ; 光系统

13、I 中激发的电子可以有两种去向:一 是按非环路电子流途径经过一系列的载体 进行传递,最后是催化 NADP 复原为 NADPH ;二是环路磷酸化途径, 无 NADPH 和 O2 形成。9生态位: 生物种群在群落中的生活方式和时 间空间位置 生态位相似 -> 竞争 生态位多样性是群落稳定根底生态幅:生物对环境因子耐受范围 最低量定律: 生物生长速度受所需环境因子 最低量因素限制生态系统组成核心:群落 代谢:物流和能流实现食物链:捕食 碎食 腐生 寄生生态系统能量:辐射 化学 机械 电 生物能流中各类生物所处的地位为营养水平10哈迪定律:种群大 随机交配 无突变 没有 新基因 没有自然选择 ->基因及基因型频率 不变自然选择:定向 稳定性 中断性生物膜:脂类蛋白质非共价键双亲性 冰冻蚀刻:膜蛋白颗粒 类脂板块 功能化筏:糖基鞘磷脂 胆固醇 鞘磷脂 分选运输 信号传导 磷脂:不饱和脂肪酸 脂肪 50% 糖脂: 5% 神经细胞高 血型决定 胆固醇:真核 流动稳定通透 流动不均一性 ->分相 主动运输:钠钾质子泵 ->直接消耗 协同 -> 间接消耗12吞噬作用: 原生动物 巨噬细胞 中性粒细胞 胞饮作用:网格蛋白 胆固醇运输:受体介导的内吞作用 蛋白质分选:内质网蛋白 /其他膜系统蛋白 粗面内质网分泌蛋白

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