革兰染色细菌

1、 1 1. .细菌的结构细菌的结构 2.2.细菌的细胞壁结构细菌的细胞壁结构 3.3.革兰染色原理革兰染色原理 1.1.细菌的结构细菌的结构 2.2.细菌的细胞壁结构细菌的细胞壁结构 3.3.革兰染色原理革兰染色原理细菌1.概念概念：一种形体微小，结构简单，有细胞壁和：一种形体微小，结构简单，有细胞壁和原始核质，无核膜和核仁（拟核），除核糖体外原始核质，无核膜和核仁（拟核），除核糖体外无其他细胞器的单细胞微生物，其归属于原核生无其他细胞器的单细胞微生物，其归属于原核生物界。物界。2.大小大小：细菌个体微小，通常以：细菌个体微小，通常以微米（微米（m）为为测量单位。测量单位。3.形态形态：球菌、

2、杆菌、螺旋菌球菌、杆菌、螺旋菌。细菌结构1.基本结构基本结构细胞壁细胞壁：赋予细菌形状，保护其在低渗环境中不被裂解；细胞膜细胞膜：机械界面、选择性渗透屏障、营养物质吸收和代谢废物排泄、代谢过程场所（呼吸作用 ）、形成中介体等；细胞质细胞质：细菌新陈代谢的场所；核质（拟核）：核质（拟核）：双股DNA组成的单一环状，控制着细菌的遗传性状；核糖体核糖体：蛋白质合成场所。2.特殊结构特殊结构荚膜荚膜：抗吞噬作用、抵抗溶菌酶及噬菌体的裂解、吸附于某些物质表面；菌毛菌毛（细、短、直）：表面粘附作用、细菌间遗传物质的传递；鞭毛鞭毛（粗、长、弯）：运动作用。芽孢芽孢：细菌在不良环境中的存活形式，形成芽孢后，代

3、谢相对静止以维持生存，并具有特殊的抵抗力。 1 1. .细菌的结构细菌的结构 2.2.细菌的细胞壁结构细菌的细胞壁结构 3.3.革兰染色原理革兰染色原理细胞壁细胞壁概念：包裹于细胞膜外侧的一种包裹于细胞膜外侧的一种坚韧而有弹性坚韧而有弹性的膜状结构。的膜状结构。主要成分：肽聚糖以及壁磷壁酸脂多糖等特殊结构。G G菌肽聚糖结构：菌肽聚糖结构：三维三维（金黄色葡萄球菌为例金黄色葡萄球菌为例） 聚糖骨架：聚糖骨架： N N乙酰葡糖胺（乙酰葡糖胺（G G） N N乙酰胞壁酸（乙酰胞壁酸（M M） 四肽侧链：四肽侧链：L L丙氨酸，丙氨酸，D D谷氨酸，谷氨酸， L L赖氨酸，赖氨酸，D D丙氨酸丙氨酸

4、 五肽交联桥：五肽交联桥：甘氨酸组成。革兰氏阴性菌无甘氨酸组成。革兰氏阴性菌无 此结构。此结构。G G菌肽聚糖结构抗生素作用靶位点溶菌酶溶菌酶 青霉素青霉素G G- -菌肽聚糖: :二维二维( (以以大肠埃希菌为例大肠埃希菌为例) ) 聚糖骨架聚糖骨架： N N乙酰葡萄糖胺（乙酰葡萄糖胺（G G） N N乙酰胞壁酸（乙酰胞壁酸（M M） 四肽侧链：四肽侧链：L L丙氨酸，丙氨酸，D D谷氨酸，谷氨酸， 二氨基庚二酸二氨基庚二酸(diaminopimelic acid, (diaminopimelic acid, DAP) DAP) ，D D丙氨酸。丙氨酸。G G- -菌肽聚糖结构G G- -菌

5、细胞壁特殊结构（1 1）磷壁酸）磷壁酸 是革兰氏阳性菌特有成分是革兰氏阳性菌特有成分 壁磷壁酸：与肽聚糖的壁磷壁酸：与肽聚糖的N N乙酰胞壁酸连结；乙酰胞壁酸连结； 膜膜磷壁酸：与细胞膜磷壁酸：与细胞膜连结。连结。（2 2）特殊表面蛋白）特殊表面蛋白 葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白（蛋白（SPASPA） 链球菌链球菌M M蛋白蛋白G-菌细胞壁特殊成分（1 1）外膜层）外膜层 脂蛋白脂蛋白 脂质脂质 蛋白蛋白 脂质双层脂质双层 脂多糖（脂多糖（lipopolysaccharide LPS)lipopolysaccharide LPS)：内毒素内毒素(endotoxin)(endotoxin)的主要成

6、分。的主要成分。（2 2）周浆间隙（胞质周围间隙）周浆间隙（胞质周围间隙） 在在G G菌细胞膜和外膜的脂质双层之菌细胞膜和外膜的脂质双层之 间的空隙。含多种酶和蛋白。间的空隙。含多种酶和蛋白。脂多糖（脂多糖（LPS)LPS)： 是是革兰阴性菌细胞壁外膜层革兰阴性菌细胞壁外膜层特殊结构特殊结构, ,是内是内毒素的主要成分。毒素的主要成分。 脂质脂质A A：是内毒素的毒性集团。：是内毒素的毒性集团。 核心多糖：有属特异性。核心多糖：有属特异性。 特异多糖：是特异多糖：是LPSLPS分子最外层部分。菌体分子最外层部分。菌体 抗原（抗原（O O抗原），有种特异性。抗原），有种特异性。G G菌与菌与G

7、G菌细胞壁结构比较菌细胞壁结构比较 1.1.细菌的结构细菌的结构 2.2.细菌的细胞壁结构细菌的细胞壁结构 3.3.革兰染色原理革兰染色原理革兰染色染料组成：碱性染料（结晶紫）、媒染剂（碘液）、脱色剂（95%乙醇）、复染剂（复红）。 碱性染料：电离后显色离子带正电荷，易与带负碱性染料：电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合，细菌等电点在电荷的被染物结合，细菌等电点在PI 25之间，在之间，在碱性、中性、弱酸性环境中均带负电荷，故易与碱性、中性、弱酸性环境中均带负电荷，故易与碱性染料结合。碱性染料结合。 媒染剂：增加染料和细胞之间的亲和力或附着力，媒染剂：增加染料和细胞之间的亲和力或附

8、着力，使染料固定在细胞上。使染料固定在细胞上。 脱色剂：将被染色细胞进行脱色。脱色剂：将被染色细胞进行脱色。 复染液：不同于初染液的一种碱性染料，使被脱复染液：不同于初染液的一种碱性染料，使被脱色细胞染上不同于初染的颜色，而未被脱色的细色细胞染上不同于初染的颜色，而未被脱色的细胞仍为初染颜色。胞仍为初染颜色。复染（复红稀释液）复染（复红稀释液）1min，流水冲洗，流水冲洗脱色（脱色（95乙醇）乙醇）30s ，流水冲洗，流水冲洗媒染（碘液）媒染（碘液）1min，流水冲洗，流水冲洗初染（结晶紫）初染（结晶紫） 1min,流水冲洗流水冲洗结果可将细菌分成两大类：结果可将细菌分成两大类：1.1.不被乙

9、醇脱色而保持紫色者为革兰氏阳性菌（不被乙醇脱色而保持紫色者为革兰氏阳性菌（G G）2.2.被乙醇脱色后染成红色者为革兰氏阴性菌（被乙醇脱色后染成红色者为革兰氏阴性菌（G G）。）。革兰染色步骤革兰染色步骤革兰染色原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解