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文档简介

1、双缩脲法-尿蛋白的测定尿蛋白是指尿中蛋白质而言，尿蛋白的主要成分是白蛋白。正常人尿内含有微量蛋白质，成年人每天约排出50-100mg，偶尔达150mg。在体育运动或训练后，尿中蛋白质的排出量可能达到250mg以上，白天任意尿所含蛋白质可少于10mg/100ml，夜间混合尿可达20mg/100ml。由于运动而出现尿中蛋白质增加的现象称为运动性蛋白尿。研究证明，运动后尿蛋白数量的多少与运动量尤其运动强度有关；与运动员身体机能状态有关；与运动员的情绪有关；与不同体育项目有关。因此，测定运动员运动后尿中蛋白质的含量，可作为一个简易的生化指标来评定运动员的身体机能状态、运动强度和运动量等。一、实验目的1

2、、学会使用移液管，掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法。2、初步掌握分光光度计的使用，了解比色法的基本原理。二、实验原理蛋白质是含氮的有机高分子化合物，分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构（肽键），碱性硫酸铜溶液中，蛋白质与硫酸铜的Cu2+离子等络合物生成紫色络合物。经光电比色可求出尿中蛋白质的含量。反应如下：双缩脲试剂双缩脲双缩脲-铜-钾-络合物（紫色）三、实验试剂及仪器1、实验试剂1）、0.15N硫酸2）、0.15%钨酸钠溶液3）、双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O,A·R或CP)1.5克、酒石酸钾钠或（NaKC4H2O,4H2O6A·R或CP）6

3、克，分别用蒸馏水约250ml溶解后，全部转移入1升容量瓶中，混合。再加入10%氢氧化钠溶液约300ml，随加随摇匀。最后用蒸馏水稀释至1升。保存于塑料试剂瓶中或内壁涂有一层纯净石蜡的普通试剂瓶中。如无红色或和黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。4）、0.9%生理盐水5）、标准蛋白溶液（500mg/100ml）2、实验仪器分光光度计、离心机、移液管、离心管、洗耳球四、实验操作步骤测定管（离心管）5ml尿液b10.15N硫酸2.5mlb21.5%钨酸钠2.5mlb3混匀后离心5分钟(3000转/分)倾去上清液,加生理盐水1ml,搅拌b4加双缩脲试剂4mlb5混合后放置20-30分钟540nm比色,空白调零读取测定管光密度值(OD测)五、计算尿蛋白含量计算公式：尿蛋白（mg%）=（OD测/OD标）50其中测得OD标为0.131六、注意事项1、如果尿液比较混浊，可能是尿液中的无机盐含量过高造成，会影响

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