自身免疫性疾病的实验诊断

1、自身抗体的实验室检查自身抗体的实验室检查( (laboratory testing of of autoantibodies) ) 医院检验科医院检验科 n女，女，46y46y，n主诉主诉: :四肢肌肉胀痛四肢肌肉胀痛2 2年余，全身多发性皮疹年余，全身多发性皮疹2 2月月n病史：患者病史：患者2 2年余前无明显诱因出现四肢酸痛、发年余前无明显诱因出现四肢酸痛、发热，最高达热，最高达4040C C，外院诊断，外院诊断“1 1、急性肾衰。、急性肾衰。2 2肺肺部感染部感染”，给予治疗后好转。，给予治疗后好转。n2017-62017-6患者自觉四肢肌肉疼痛加重，呈拉扯感，患者自觉四肢肌肉疼痛加重，

2、呈拉扯感，自诉难以走路和梳头，夜间休息时减轻，伴四肢自诉难以走路和梳头，夜间休息时减轻，伴四肢多关节肿痛，无晨僵，脱发明显。多关节肿痛，无晨僵，脱发明显。 当某种原因使机体自身免疫应答超过一定当某种原因使机体自身免疫应答超过一定程度，导致机体组织器官损伤，并引起相应器程度，导致机体组织器官损伤，并引起相应器官病变和（或）出现临床症状的一类疾病。官病变和（或）出现临床症状的一类疾病。特点：血中可检测出高滴度的特点：血中可检测出高滴度的自身抗体自身抗体器官特异性器官特异性AID1.弥漫性结缔组织病弥漫性结缔组织病2.与脊柱相关的关节炎与脊柱相关的关节炎3.退行性关节病退行性关节病4.感染所致关节炎

3、感染所致关节炎5.伴有风湿性疾病的代谢或内分泌疾病伴有风湿性疾病的代谢或内分泌疾病6.肿瘤等肿瘤等风湿性疾病的分类风湿性疾病的分类l类风湿关节炎类风湿关节炎l少年类风湿关节炎少年类风湿关节炎l系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮l系统性硬化症系统性硬化症l多发性肌炎与皮肌炎多发性肌炎与皮肌炎l干燥综合症干燥综合症l坏死性血管等坏死性血管等rheumatic diseases风湿免疫病自身免疫病风湿病高滴度的高滴度的自身抗体自身抗体临床经验积累和实验诊断技术进步,发病率其总体发病率占世界人口的3%；中国: 4-5千万 高发病率高致残率、高致死率和低知晓率诊疗水平参差不齐辗转就医看病难看病贵国内诊疗技术体

4、系与国际先进水平差距较大AID 严重危害人民健康的重大疾病 自身免疫性疾病(AID) 5Dv自身抗体自身抗体: :是指抗自身组织器官、细胞内、是指抗自身组织器官、细胞内、 细胞表面和细胞外成分的细胞表面和细胞外成分的免疫球蛋白免疫球蛋白 . . v一些自身免疫性疾病伴有特征性的一些自身免疫性疾病伴有特征性的 自身抗体自身抗体(谱谱)SLE中存在的自身抗体达百种以上中存在的自身抗体达百种以上自身抗体自身抗体 发生率发生率 dsDNA dsDNA 60%-90% 60%-90%ssDNAssDNA 70%-75% 70%-75% Sm Sm 10%-30% 10%-30%抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体

5、30%-70% 30%-70% SSA SSA 20%-60% 20%-60%SSBSSB 10%-20% 10%-20%抗核糖体抗体抗核糖体抗体 10% 10% 抗红细胞抗体抗红细胞抗体 10%-65% 10%-65%抗血小板抗体抗血小板抗体 75%-80% 75%-80% 抗磷脂抗体抗磷脂抗体 10%-15% 10%-15% 自身抗体自身抗体 发生率发生率 IgM-RF IgM-RF 80%80% 抗抗CCPCCP抗体抗体 60%-80% 60%-80% 组蛋白抗体组蛋白抗体 15%-50% 15%-50%角蛋白抗体角蛋白抗体 36%-59% 36%-59% 单链单链DNADNA 8% 8

6、%自身抗体 发生率SS-A(Ro) 40%-70% SS-B(La) 30%-50%单链DNA 13%类风湿因子 60%-80% n抗核抗体抗核抗体n抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体n类风湿关节炎相关抗体（类风湿关节炎相关抗体（RF,CCPRF,CCP抗体抗体）n消化系统自身免疫性疾病相关自身抗体消化系统自身免疫性疾病相关自身抗体n内分泌系统自身免疫性疾病相关自身抗体内分泌系统自身免疫性疾病相关自身抗体n其它系统相关自身免疫性疾病自身抗体其它系统相关自身免疫性疾病自身抗体n 一、 ANAANA定义：定义： 传统定义传统定义：针对细胞核成分自身抗体的总称：针对细胞核成分自身抗体的总称.

7、. 广义定义广义定义：抗核抗体的靶抗原已不再局限于细胞：抗核抗体的靶抗原已不再局限于细胞核内，而是扩展到整个细胞，是核内，而是扩展到整个细胞，是针对细胞内所有抗原针对细胞内所有抗原成分的总称。成分的总称。抗核抗体抗核抗体( ANA)细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等ANA的靶抗原分布的靶抗原分布细胞核细胞核整个细胞整个细胞二、抗核抗体的分类二、抗核抗体的分类(1) 1. 抗抗DNA抗体抗体抗双链抗双链DNA (dsDNA) 抗体抗体抗单链抗单链DNA (ssDNA) 抗体抗体2. 抗组蛋白抗体：抗组蛋白抗体：histons H1,H2A,H

8、2B,H3,H4 3. 抗非组抗非组 蛋白抗体蛋白抗体 抗可溶性核抗原抗可溶性核抗原(ENA)抗体抗体：Sm, U1RNP, rRNP, SSA，SSB，Scl70，Jo-1，pM-1，PCNA，RANA，Ku，Mi-1，-2抗体抗体，DNP抗体等。抗体等。 抗着丝点抗体抗着丝点抗体(Anti-CENP A，B，C，D，F) 4. 抗核仁抗体抗核仁抗体: 抗抗5rRNA，核小体，核小体，U3nRNP，Nor-90抗体抗体。 5. 抗其它细胞成分抗其它细胞成分: 线粒体、中心体等。线粒体、中心体等。理化性质理化性质分布部位分布部位标志性自身抗体标志性自身抗体：抗抗Sm抗体对抗体对SLE，Scl-

9、70 对对SSc，J0-1对对PM/DM等等特异性自身抗体：特异性自身抗体：如抗如抗dsDNA抗体对抗体对SLE， 抗抗SS-B抗体对抗体对SS等等相关性自身抗体：相关性自身抗体：抗抗U1RNP抗体对抗体对MCTD等等 非特异性自身抗体：非特异性自身抗体：如如 抗高尔基体抗体，抗抗高尔基体抗体，抗 过氧化物酶抗体，抗过氧化物酶抗体，抗组蛋白组蛋白抗体等。抗体等。二、抗核抗体的分类二、抗核抗体的分类(2)疾病的疾病的相关性相关性ANA主要是主要是IgG抗体抗体;ANA无器官特异性和种属特异性；无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；主要存在于血清中；三、抗核抗体的特性三、抗核抗体的特性

10、在约在约96%的的SLE患者的患者的ANA为为IgG型，型，IgM型型ANA与类风湿关节炎、药与类风湿关节炎、药物和年龄相关，通常无明确诊断价值。物和年龄相关，通常无明确诊断价值。约约4%的风湿性疾病患者可为高滴度的风湿性疾病患者可为高滴度的的IgM型型ANA.ANA主要是主要是IgG抗体抗体;ANA无器官特异性和种属特异性；无器官特异性和种属特异性；ANA主要存在于血清中；主要存在于血清中；三、抗核抗体的特性三、抗核抗体的特性血浆能否检测？血浆能否检测？肝素锂可能会抑制某些抗原抗体反应；肝素锂可能会抑制某些抗原抗体反应；EDAT和枸橼酸盐会螯合血浆中的金和枸橼酸盐会螯合血浆中的金属离子增强竞

11、争反应，减弱非竞争反属离子增强竞争反应，减弱非竞争反应和荧光分析反应。应和荧光分析反应。 初筛实验初筛实验间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIF）ELISA法法 确认实验确认实验免疫印迹法免疫印迹法免疫斑点法免疫斑点法ELISA法法悬浮微列阵技术悬浮微列阵技术(总抗体）总抗体）(特异性抗体）特异性抗体）玻 片 HEp-2细胞抗核抗体荧光标抗IgGn1. 间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（ IIF）初筛实验初筛实验形成形成抗原抗原ANA抗人抗人Ig FITC复合物复合物荧光荧光阴性阴性阳性阳性HEp-2 细胞包含大约细胞包含大约100 至至150 种自身抗原种自身抗原核膜型，Hep-2细胞及猴肝组

12、织模式模式荧光图片荧光图片相关自身抗体相关自身抗体 临床意义临床意义 均均 质质 型型dsDNAdsDNA， H1 H2AH1 H2A抗核小体抗体抗核小体抗体高滴度：见于高滴度：见于SLESLE多种结缔组织病等多种结缔组织病等 斑斑 点点 型型细颗粒型：细颗粒型：SSASSA、SSBSSB抗体抗体粗颗粒型：粗颗粒型：SmSm、nRNPnRNP抗体抗体原发性干燥综合征原发性干燥综合征SLESLE，结缔组织病等，结缔组织病等 核核 膜膜 型型抗核板层素抗体抗核板层素抗体 胆汁性肝硬化胆汁性肝硬化自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎SLESLE患者等患者等 核核 仁仁 型型抗核仁特异低分抗核仁特异低分子量子

13、量RNA,RNA,抗抗RNARNA聚合酶聚合酶-1-1，抗，抗U3RNPU3RNP，抗，抗PM-PM-SclScl高滴度高滴度: :对诊断硬皮对诊断硬皮病具有一定特异性病具有一定特异性. .偶见雷诺现象者及偶见雷诺现象者及SLESLEn荧光模式的重要性荧光模式的重要性n荧光抗体滴度的重要性荧光抗体滴度的重要性优点：优点：1.1.可同时检测大量抗体，获得较高的检测效率；可同时检测大量抗体，获得较高的检测效率；2.2.可检测到一些至今未知的抗体。可检测到一些至今未知的抗体。缺点：缺点：1.操作烦杂；操作烦杂；2.需要有经验的人员读片。需要有经验的人员读片。间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIF）市

14、场免疫荧光自动化仪器全自动一体化全自动一体化 2、ELISA方法方法优点：优点：l操作简单，有标准品，可定量；操作简单，有标准品，可定量；l可观察浓度变化，有助于临床进行可观察浓度变化，有助于临床进行 病情及疗效的观察；病情及疗效的观察；1，武永康，王兰兰，等. 抗核抗体不同检测方法的对比分析.中华风湿病学杂志.2006.10(10): 610-614.2,陈武，董晓枫，等.间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验对比检测抗核抗体.检验医学与临床.2006.3(7):347-348.初筛实验初筛实验缺点：缺点：l包被靶抗原量有限，易漏检。包被靶抗原量有限，易漏检。n原因：原因： 1. 1.太多数太多数

15、IIFIIF法采用法采用HEp-2 HEp-2 细胞作为包被玻细胞作为包被玻 片的基质片的基质，大约大约100 100 至至150 150 种自身抗原种自身抗原 2. ELISA法仅能包被几种（法仅能包被几种（6-10种）自身种）自身 抗原抗原IIF法阳性，法阳性，ELISA法阴性法阴性哪种方法的结果为准？哪种方法的结果为准？ HEp-2 细胞包含大约细胞包含大约100 至至150 种自身抗原种自身抗原 其它初筛方法仅具有少量自身抗原其它初筛方法仅具有少量自身抗原大约大约 35% SLE患者和患者和IIF-ANA阳性患者阳性患者在其它初筛实验中为阴性结果在其它初筛实验中为阴性结果 建议筛查实验

16、：建议筛查实验： IIF-ANA仍然为仍然为ANA检测的检测的金标准金标准 实验室在实验室在ANA报告当中必须注明报告当中必须注明ANA检测检测方法方法 美国风湿学会美国风湿学会(ACR)立场声明立场声明带方法学的化验单nIIFIIF法阴性，法阴性，ELISAELISA法阳性法阳性n原因：原因： 1. 1. IIFIIF法法 2. ELISA 2. ELISA法方法灵敏度高；法方法灵敏度高； 3. 3.干扰因素：溶血、嗜异性抗体等引起假阳性。干扰因素：溶血、嗜异性抗体等引起假阳性。 哪种方法的结果为准？哪种方法的结果为准？确认试验确认试验病例病例n患者，男，患者，男，6363岁，无职业，因岁，

17、无职业，因“发现糖尿病发现糖尿病2 2年，年，发热发热9 9天入院天入院”。曾于。曾于20122012年年8 8月月1 1日，在白云区红日，在白云区红十字会医院就诊，抗核抗体阳性，双链十字会医院就诊，抗核抗体阳性，双链DNADNA抗体阳抗体阳性，为进一步明确诊断来南方医院就医。性，为进一步明确诊断来南方医院就医。 结果示：结果示：ANA-IIF ANA-IIF 为阴性，为阴性，ELISAELISA法：法：ANAANA为为476.99476.99（阳性），（阳性），DNADNA定量为定量为859.16859.16（阳性），定（阳性），定性性DNADNA（ELISA)ELISA)结果为阳性。结果为

18、阳性。自身抗体十四项自身抗体十四项怎么办？怎么办？阴性阴性n用绵羊血对人血清进行中和后，用绵羊血对人血清进行中和后，ELISAELISA法法的的ANAANA、双链、双链DNADNA全部阴性。全部阴性。嗜异性抗体嗜异性抗体n有将近有将近1%1%的自身免疫性疾病患者，特别是的自身免疫性疾病患者，特别是SSSS和和PM/DMPM/DM，其，其ANAANA间接免疫荧光检测结果为阴性。间接免疫荧光检测结果为阴性。 Arch Pathol Lab MedVol 131, January 2007 初筛实验初筛实验间接免疫荧光法间接免疫荧光法ELISA法法(总抗体）总抗体） 确认实验确认实验免疫印迹法免疫印

19、迹法免疫斑点法免疫斑点法ELISA法法悬浮微列阵技术悬浮微列阵技术(特异性抗体）特异性抗体） 抗核抗体的种类抗核抗体的种类 1. 抗抗DNA抗体抗体抗双链抗双链DNA (dsDNA) 抗体抗体抗单链抗单链DNA (ssDNA) 抗体抗体2. 抗组蛋白抗体：抗组蛋白抗体：histons H1,H2A,H2B,H3,H4 3. 抗非组抗非组 蛋白抗体蛋白抗体 抗可溶性核抗原抗可溶性核抗原(ENA)抗体抗体：Sm, U1RNP, rRNP, SSA，SSB，Scl70，Jo-1，pM-1，PCNA，RANA，Ku，Mi-1，-2抗体抗体，DNP抗体等。抗体等。 抗着丝点抗体抗着丝点抗体(Anti-C

20、ENP A，B，C，D，F) 4. 抗核仁抗体抗核仁抗体: 抗抗5rRNA，核小体，核小体，U3nRNP，Nor-90抗体抗体。 5. 抗其它细胞成分抗其它细胞成分: 线粒体、中心体等。线粒体、中心体等。抗核抗体抗核抗体 初筛实验初筛实验间接免疫荧光法间接免疫荧光法ELISA法法(总抗体）总抗体） 确认实验确认实验免疫印迹法免疫印迹法免疫斑点法免疫斑点法ELISA法法悬浮微列阵技术悬浮微列阵技术(特异性抗体）特异性抗体）nRNP/Sm 、Sm、SS-A、Scl-70、SS-B、Jo-1、Ro-52 、CENP B(着丝点着丝点B)、dsDNA、核小体、核小体、组蛋白、组蛋白、核糖体核糖体P蛋白

21、、蛋白、PM-Scl、PCNA、AMA M2u不是所有相关纯化抗原都能得到，因不是所有相关纯化抗原都能得到，因 此无法检测到所有特异性抗体此无法检测到所有特异性抗体一种确认实验不能同时检测所有一种确认实验不能同时检测所有 特异性抗体特异性抗体 自身免疫病（AID）自身抗体检测临床价值抗体疗诊早期诊断疾病分期病情评估预后判断五、五、ANA检测的临床意义检测的临床意义 系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮活动期非活动期 药物诱导的红斑狼疮药物诱导的红斑狼疮 混合性结缔组织病（混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征综合征 类风湿性关节炎类风湿性关节炎 进行性系统性硬化症进行性系统性硬化症 多发性肌炎及

22、皮肌炎多发性肌炎及皮肌炎 干燥综合征干燥综合征 慢性活动性肝炎慢性活动性肝炎 溃疡性结肠炎溃疡性结肠炎 其它风湿病其它风湿病 正常人正常人95100%80100%100%100%2040%2050%8595%3050%7080%3040%26%5-1%五、五、ANA检测的临床意义检测的临床意义部分特异性抗核抗体部分特异性抗核抗体 检测的临床意义检测的临床意义 SmSm、RNPRNP、SSASSA、SSBSSB、Jo-1Jo-1、Scl-70Scl-70 是由许多小分子是由许多小分子RNARNA与各自对应的特定与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒，分子中不含蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒，分子

23、中不含DNADNA，称可提取核抗原。，称可提取核抗原。一、一、ENA抗体谱（可提取性核抗原谱）抗体谱（可提取性核抗原谱）extractable nuclear antigensl以患者姓名命名以患者姓名命名l是是SLESLE的的标志性标志性抗体，阳性率为抗体，阳性率为30.2%30.2%。在全。在全部抗部抗SmSm阳性的病例中，阳性的病例中，92.2%92.2%为为SLESLE。 粗颗粒型粗颗粒型U1-nRNP和Sm抗体 抗抗SmSm抗体抗体lSLESLE病人由病人由活动期转为缓解期活动期转为缓解期后，后，ANAANA、抗、抗DNADNA抗体效价可降低，但抗体效价可降低，但SmSm抗体依然存在

24、。因抗体依然存在。因此对早期、不典型的此对早期、不典型的SLESLE或经治疗缓解后的回或经治疗缓解后的回顾性诊断有一定意义。顾性诊断有一定意义。 SSASSA抗体主要见于原发性抗体主要见于原发性干燥综合征（干燥综合征（SSSS），阳性），阳性率高达率高达60607575，合并，合并SLESLE者为者为30-50%30-50%，单纯，单纯SLESLE者为者为8-10%8-10%， 其他结缔组其他结缔组织病极少阳性。织病极少阳性。SSASSA抗体抗体核细颗粒型核细颗粒型1.SSB1.SSB抗体是抗体是SSSS血清特异性抗体。在原发性血清特异性抗体。在原发性SSSS阳性阳性率达率达4040。2.SS

25、B2.SSB抗体阳性几乎总伴有抗抗体阳性几乎总伴有抗SSASSA抗体阳性，其他抗体阳性，其他自身免疫性疾病中如有抗自身免疫性疾病中如有抗SSBSSB抗体，常伴有继发抗体，常伴有继发性干燥综合征。性干燥综合征。3.3.在其它结缔组织病中，该两种抗体同时出现，在其它结缔组织病中，该两种抗体同时出现，常提示继发性干燥综合征的存在。常提示继发性干燥综合征的存在。4. 4. 抗抗SSBSSB和抗和抗SSASSA抗体相伴出现，有单独的抗体相伴出现，有单独的SSASSA出出现，但单独的现，但单独的SSBSSB出现的少。出现的少。SSBSSB抗体抗体原发性干燥综合征原发性干燥综合征SSn1.1.混合性结缔组织

26、病混合性结缔组织病(MCTD)(MCTD)：几乎均为：几乎均为阳性，且滴度很高，对确立阳性，且滴度很高，对确立MCTDMCTD的诊断很有的诊断很有帮助。帮助。MCTDMCTD的抗的抗RNPRNP阳性率阳性率95%95%。n2.其他结缔组织病：抗其他结缔组织病：抗RNP抗体在其他抗体在其他结缔组织病阳性率较低且滴度低。结缔组织病阳性率较低且滴度低。n3 3. .系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（SLESLE）：抗）：抗RNPRNP抗体抗体在在SLESLE中的阳性率为中的阳性率为40%40%左右，抗左右，抗RNPRNP抗体抗体若与抗若与抗dsDNAdsDNA抗体、抗抗体、抗SmSm抗体同时存在，抗体同

27、时存在，则发生狼疮肾炎的可能性较大。则发生狼疮肾炎的可能性较大。抗抗nRNP，无疾病特异性，无疾病特异性n靶抗原：靶抗原：DNA-DNA-拓扑异构酶拓扑异构酶1 1的的C C端末区端末区n系统性硬皮病的系统性硬皮病的标志性标志性抗体抗体l靶抗原：组氨酰靶抗原：组氨酰tRNAtRNA合成酶，一种细胞浆合成酶，一种细胞浆磷酸蛋白。磷酸蛋白。l多发性肌炎多发性肌炎/ /皮肌炎（皮肌炎（PM/DM)PM/DM)的的标记性标记性抗体抗体l阳性患者多数伴有间质性肺部疾病和多关阳性患者多数伴有间质性肺部疾病和多关 节炎及关节痛。节炎及关节痛。l与阴性患者相比，阳性患者发病年龄轻，与阴性患者相比，阳性患者发病

28、年龄轻，病情进展快，疗效差，预后较差。病情进展快，疗效差，预后较差。胞浆颗粒型胞浆颗粒型Jo-1抗抗Jo-1抗体抗体 抗n抗抗dsDNAdsDNA的检测方法主要有二种的检测方法主要有二种 2. ELISA2. ELISA法法1.1.间接免疫荧光法间接免疫荧光法： 特异性高（天然纯化抗原）特异性高（天然纯化抗原）可定量，结果可溯源至可定量，结果可溯源至WHO（TRINITY）；）；浓度与病情的活动性呈正相关；浓度与病情的活动性呈正相关；由于方法学原因有时有由于方法学原因有时有假阳性假阳性。绿蝇短膜虫为抗原基质检测抗绿蝇短膜虫为抗原基质检测抗dsDNAdsDNA抗体抗体抗抗dsDNA抗体阴性抗体阴

29、性抗抗dsDNA抗体阳性抗体阳性细胞核荧光细胞核荧光鞭毛基体荧光鞭毛基体荧光动基体荧光动基体荧光Ds-DNA定量定量nds-DNAds-DNA抗原的特异性和稳定性：抗原的特异性和稳定性：1.ELISA1.ELISA法使用的抗原是人工纯化抗原，其纯度（抗原特异法使用的抗原是人工纯化抗原，其纯度（抗原特异性）可直接影响检测结果，如果含有单链性）可直接影响检测结果，如果含有单链DNADNA、组蛋白等其、组蛋白等其他抗原成分，将引起假阳性结果。他抗原成分，将引起假阳性结果。2. ds-DNA2. ds-DNA抗原在纯化包被等生化处理过程中，易造成部分抗原在纯化包被等生化处理过程中，易造成部分DNADN

30、A内部位点暴露，变性解链成内部位点暴露，变性解链成ssDNAssDNA。n 高亲合力和低亲合力抗高亲合力和低亲合力抗dsds-DNA-DNA抗体：抗体：1. 低亲合力抗体除存在于低亲合力抗体除存在于SLE外，也存在于其他外，也存在于其他AID中，对中，对 SLE诊断价值低；高亲合力抗体，对诊断价值低；高亲合力抗体，对SLE有较高特异性。有较高特异性。2. 低亲合力抗体适合于低亲合力抗体适合于ELISA法检测，高亲合力抗体应该用法检测，高亲合力抗体应该用 Farr法最好，其次是法最好，其次是IIF法。法。n间接免疫荧光法阳性而间接免疫荧光法阳性而ELISAELISA阴性阴性：被检血清中：被检血清

31、中可能含有低亲合力抗可能含有低亲合力抗ds-DNAds-DNA；或高滴度单链；或高滴度单链DNADNA抗体等抗体等. .n间接免疫荧光法阴性而间接免疫荧光法阴性而ELISAELISA阳性阳性：被：被 检血清检血清中可含有高亲合力抗中可含有高亲合力抗ds-DNAds-DNA抗体或假阳性抗体或假阳性建议：建议： 绿荧短膜虫绿荧短膜虫IIFIIF法作为抗双链法作为抗双链DNADNA抗体的抗体的确认方法，确认方法，EILSAEILSA法作为观察疗效方法。法作为观察疗效方法。注意：注意：SLESLE病人经过治疗后，病人经过治疗后，ELISAELISA法滴度可下降、法滴度可下降、 转阴，但转阴，但IIFI

32、IF法仍可阳性。法仍可阳性。 n1.ANCA1.ANCA是一组以人中性粒细胞和单核细胞胞浆是一组以人中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原成分为靶抗原, ,与临床多种小血管炎性疾病密与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体。切相关的自身抗体。n靶抗原：中性蛋白酶靶抗原：中性蛋白酶3 3（PR3PR3），髓过氧化物酶），髓过氧化物酶（MPOMPO），杀菌），杀菌/ /通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPIBPI），丝），丝氨酸蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶（氨酸蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶（HLEHLE），），乳铁蛋白（乳铁蛋白（LFLF），组织蛋白酶），组织蛋白酶G G，葡萄糖醛葡萄糖醛酸酶，溶菌酶

33、。酸酶，溶菌酶。n3.3.是系统性血管炎的标志性抗体是系统性血管炎的标志性抗体ANCA antineutrophil cytoplasmic antibidies靶抗原：中性蛋白酶靶抗原：中性蛋白酶3 3（PR3PR3）髓过氧化物酶（髓过氧化物酶（MPOMPO）ANCA)胞浆型胞浆型ANCAcANCA，主要靶抗原为，主要靶抗原为PR3核周型核周型ANCApANCA，主，主要靶抗原为要靶抗原为MPO韦格纳肉芽肿韦格纳肉芽肿（WG）的特异性）的特异性指标指标 ，阳性率达，阳性率达90%.特发性坏死性新月体特发性坏死性新月体肾小球肾炎肾小球肾炎，阳性率达阳性率达80%.cANCA cANCA 和和p

34、ANCApANCA同时出现，多见同时出现，多见变应性肉芽肿性变应性肉芽肿性血管炎血管炎, ,显微镜下多血管炎显微镜下多血管炎。一项大型多中心合作的欧洲实验总结。其结果强调大量原一项大型多中心合作的欧洲实验总结。其结果强调大量原发性小血管炎的病人发性小血管炎的病人ANCA阴性，因此阴性，因此阴性结果无法排除阴性结果无法排除高度可疑血管炎的病人高度可疑血管炎的病人。 ncANCA PR3 pANCA MPO1.1.抗人抗人IgGIgG分子分子FcFc片段上抗原决定簇的特异性抗片段上抗原决定簇的特异性抗体体, ,分为分为IgMIgM、G G、A A、E E型型. .2.RFRF在在RARA中的阳性率

35、为中的阳性率为70%70%8080，是诊断，是诊断RARA的的重重要标准之一要标准之一3.3.RFRF并非并非RARA独有的特异性抗体独有的特异性抗体，对，对RARA的诊断不具的诊断不具特异性特异性. .RFRF（）不等于一定就是（）不等于一定就是RARA，RFRF（）（）也不能排除不是也不能排除不是RARA4.4.RFRF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的高滴度的RFRF常提示常提示RARA病情活动病情活动. .RFrheumatoid factor类风湿因子类风湿因子(RF)(RF)1.瓜氨酸是类风湿关节炎（瓜氨酸是类风湿关节炎（RARA）血清抗聚角蛋白微）血清抗聚角蛋白微丝蛋