细菌简单染色

1、微生物学实验微生物学实验实验六、细菌的简单染色法实验六、细菌的简单染色法微生物学实验微生物学实验目的要求目的要求1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。握细菌的简单染色法。2、初步认识细菌的形态特征。、初步认识细菌的形态特征。3、学习显微镜（油镜）的使用方法和无菌、学习显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。操作技术。微生物学实验微生物学实验简单染色的意义简单染色的意义1、简单染色目的是观察细菌的形态。、简单染色目的是观察细菌的形态。2、细菌的形态是其基本特征。、细菌的形态是其基本特征。3、细菌的形态特征是其分类鉴定的重要依、细菌的形态特征

2、是其分类鉴定的重要依据之一。据之一。微生物学实验微生物学实验微生物分类鉴定依据微生物分类鉴定依据v形态学和生理生化特征形态学和生理生化特征v血清学试验和噬菌体分型血清学试验和噬菌体分型v氨基酸序列和蛋白质分析氨基酸序列和蛋白质分析v核酸的碱基组成、序列和核酸分析核酸的碱基组成、序列和核酸分析微生物学实验微生物学实验细菌的基本形态细菌的基本形态Spherical coccusRod-shaped bacillusSpired-shaped spirallum微生物学实验微生物学实验细菌形态观察方法细菌形态观察方法v电子显微镜电子显微镜透射式电子显微镜透射式电子显微镜扫描电子显微镜扫描电子显微镜v

3、光学显微镜光学显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜相差显微镜相差显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜微生物学实验微生物学实验染色的必要性染色的必要性v因为细菌微小而且透明因为细菌微小而且透明 v如果不染色反差就很低如果不染色反差就很低v染色后可以增加反差染色后可以增加反差微生物学实验微生物学实验微生物染色的染料微生物染色的染料v是一类苯环上带有是一类苯环上带有发色基团发色基团和和助色基团助色基团的有机化合物。的有机化合物。v染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染染料通常都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类。料两大类。v在微生物染色中，碱性染料较常用，如在微生物染色中，碱性染料较常用，如常用的美蓝（即亚甲蓝）

4、、结晶紫、碱常用的美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于碱性染料。属于碱性染料。微生物学实验微生物学实验v在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷；通常带负电荷；v而碱性染料在电离时，其分子的染色部分而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷；带正电荷；v带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带带正电荷的碱性染料染色部分很容易与带负电荷细菌细胞结合使细菌染色。负电荷细菌细胞结合使细菌染色。微生物染色原理微生物染色原理微生物学实验微生物学实验材材 料料1、菌种、菌种 2、染色剂、染色剂3、仪器

5、或其他用具：、仪器或其他用具： 显微镜显微镜 酒精灯酒精灯 载玻片载玻片 接种环接种环 香柏油香柏油 二甲苯二甲苯 擦镜纸擦镜纸 生理盐水等。生理盐水等。微生物学实验微生物学实验涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色水洗水洗镜检镜检简单染色方法简单染色方法干燥干燥微生物学实验微生物学实验1 1、涂片、涂片1、取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载、取一块干净的载玻片平放在载玻片架上，在载玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）；玻片中央滴一滴生理盐水（或蒸馏水）；2、无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许、无菌操作从试管中生长有琼脂斜面上挑取少许菌苔；菌苔；3、将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀

6、、将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。并涂成薄膜。注意：注意：载玻片要载玻片要洁净洁净无油迹；滴生理盐水和取菌无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多不宜过多；涂片要涂抹；涂片要涂抹均匀均匀，不宜过厚。，不宜过厚。微生物学实验微生物学实验2 2、干燥、干燥v 将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上，将涂好菌膜的载玻片平放在载玻片架上，室温下自然干燥。室温下自然干燥。微生物学实验微生物学实验3 3、固定、固定v手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片，手持已经自然干燥的涂好菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2 23 3次，次，热固定细菌细胞。热固定细菌细胞。原理

7、：原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使加热使细菌细胞的蛋白质凝固、使细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形细菌细胞质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。态，并使之牢固附着在载玻片上。注意：注意：热固定温度不宜过高，否则会改变热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。甚至破坏细胞形态。微生物学实验微生物学实验4 4、染色、染色v将将热固定的细菌热固定的细菌涂片平放于在载玻片架涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。涂片薄膜为宜）。v染色时间：染色时间：吕氏碱性美蓝染色吕氏碱性美蓝染色12min；石炭酸复红染色约石

8、炭酸复红染色约1min草酸铵结晶紫染色约草酸铵结晶紫染色约1min。微生物学实验微生物学实验5 5、水洗、水洗v将将细菌细菌涂片上染液倒入废液缸中；涂片上染液倒入废液缸中；v手持手持细菌染色细菌染色涂片，置于废液缸上方，涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。水无色为止。注意：注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。急，过大，以免涂片薄膜脱落。微生物学实验微生物学实验6 6、干燥、干燥v自然干燥：自然干燥：将染好

9、色的细菌涂片平放在将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，室温下自然干燥；载玻片架上，室温下自然干燥；v吹干：吹干：将染好色的细菌涂片平放在载玻将染好色的细菌涂片平放在载玻片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；片架上，用电吹风冷风或低温热风吹干；v吸干：吸干：将染好色的细菌涂片平放在一张将染好色的细菌涂片平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。菌涂片两面水分吸干。微生物学实验微生物学实验7 7、镜检、镜检v涂片干后镜检。涂片干后镜检。v注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜注意：涂片必须完全干燥后才能用油镜观察。观察。v防止水的折射，以便于观察。防止水的折射，以便于观察。微生物学实验微生物学实验无菌操作技术无菌操