UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作规程..

1、AB SCIEX TRIPLE QUADTM5500 的 PPG 质量准确度校准操作规程一、前期准备1、PPG 稀释溶液的准备，对于 5500 系列采用的标准溶液：正离子模式：POS PPG 2E-7M;负离子模式：NEG PPG 3E-5M2、离子源的垂直旋钮调至 “ 5 位。3、 用质谱仪上的针泵式进样针吸取适量的 PPG 校准液，检查管路是 否连接好。二、操作步骤1、双击“ Hardware Configuration”，激活“ MS Only ”。2、菜单栏切换到“ Installation”项目。3、双击“ Manual Turning”，打开手动调谐界面。4、点击“ Open Fi

2、le”， 选择相对应的采样方法(Q1 Pos PPGs .dam Q3Pos PPGs .dam Q1 Neg PPGs.dam Q3 Neg PPGs.damj)，先正离 子再负离子，先 Q1 调谐再 Q3 调谐，扫描速率依次为 10、200、1000、2000Da/s,对应 MCA 分别为 10、50、50、100。5、点击“ Start Syringe Pump，再点击“ Start”开始采集数据。6、将会在界面上出现采集到的质谱图，右键点击右侧质谱图区域，选择“ Open Date。7、点击工具栏中的“ Calibration From Spectrum”。8 在弹出的菜单中选择合适的

3、校验标准，在“ Standarc”中选择对应 的校准溶液，点击“ Start”开始校准前的计算。9、第一个图形代表的是此次校准与理论值的质量偏差，各点应位于“士 O.IDa”线内。若某质量点超出了设定的范围，则应点击“UpdateMass Calibration”，更新那些偏离的质量点的电场参数，使之落到“ 士O.IDa” 线内。10、 第二个图形代表的是 PPG 校准峰的半峰高宽度，各点应位于“ 0.60.8范围内。若某点质谱峰半峰宽超出标准范围， 点击界面上的“ Advaneed”按钮，调节对应的“ Offset”电压，使之合规。质谱分辨率质谱半峰宽（FHWM ）Offset 值增加提高减

4、小Offset 值降低降低增加11、第三个图形代表的是此次校准与上次校准所有PPG 校准点峰强度变化的百分比。14、待校准完成后，点击“ Stop”停止进样，并灭活“ Mass Only”。三、结束工作针泵吸取 50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，23 次即可标准品质谱条件调谐(Tune and Calibrate )操作规程一、前期准备1、 检查离子源是否干净，将垂直旋钮跳到“ 5”位。2、 用 50%甲醇水溶液(乙腈水溶液也可)配置2050ng/mL的标准 溶液(根据响应值调节浓度，将目标化合物母离子与周围离子响应值 相差明显即可)。V正离子化合物，可添加 0.1%甲酸V负离子化合物，无需添

5、加二、操作步骤1、创建 project:打开 Analyst 软件，在菜单栏中打开“ Tools”，选择“project” 下的“ Create Project, 输入“ Project namg 即可。2、双击“ Hardware Configuration”， 激活“ MS Only ”， 双击“ ManualTuning”，打开调谐界面。3、Q1 Scan：在当前界面设置扫描模式为“ Q1 MS (Q1)”， 将扫描范 围设为 100MW+30， 扫描速率为 200Da/s, Duration 为 5min,先点 击“StartSyringe Pump ,再点击“ Start”，找到目标

6、化合物母离子。待扫描完成后，选择“Center/Width”，将目标母离子的 m/z 输入“Center(Da) ”中，“Width (Da) ” 设置为 3, “Scan rate 设置为 10Da/s, 选上“MCA, “Cycle”设置为 2050,点击“ Acquire”采集数据并 保存。4、 Product ion Scan 扫描模式为“ Product Ion (MS2)”，在“Productof”中输入母离子的 m/z ,将 CE 值修改为 5eV,扫描范围为 100MW+30，扫描速率约 200Da/s, Duration 为 5min,点击“ Start 开始扫描，以 5eV

7、为步长手动调节 CE,找到合适的子离子（母离子 的强度为基峰强度的 1/3到 1/4 为宜），点击“ Stop”选上“MCA，“ Cycles”设置为 2050,点击“ Acquire”采集数据并保存二级质谱图（若要获得柱状图需在 Advaneed MS 中选择 Centroid）。5、优化化合物参数：根据前面选出的母、子离子，组建 MRM 离子 对，输入右侧框中，每对离子对建议分析时间为 100ms （若化合物比 较多减小时间），并输入 ID。点击“ Edit Ramp”，先后选择 CE 和 DP，点击“Star 进行优化，将优化好的 CE 和 DP 值添加到表格中。6、保存质谱方法，灭活“

8、 MS Only ”。三、结束工作针泵吸取 50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，23 次即可。ACQUITY UPLC 串联质谱（UPLC-MS/MS ）操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、最重要的是离子源的垂直旋钮调至“ 2”位。3、将流动相准备好，过 0.45 微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开 UPLC 的 Sample Ma nage 和 Bi nary Solve nt Ma nager 电源，待 其自检完成后，打开质谱分析软件，左下角双击“ ACQUITY Console ”, 点击 “Control”，分别进行 “Prime A/B

9、solvents.” 和 I “Primeseal wash， 用 A、B 流动相冲洗 5min。2、激活“ UPLC MS ”。3、 安装并用甲醇或乙腈活化新的色谱柱，一般活化30min 即可。4、点击 Analyst 软件菜单栏中的“ Script”， 选择“ Merge MRM ”合 并所需测的多种目标分析物的 MRM 通道（也可双击“ Build AcquisitionMethod”建立方法手动输入），并存储一个新的采样离子 通道的质谱方法文件。5、双击“ Build Acquisition Method ”，将同步模式选为“ Lc Sync”，打开文件选择需要的质谱方法。点击“Edi

10、t Parameters,设置“ CUR”:35; “IS”： +5500（正离子），-4500（负离子）；“ TEM ”：550C;“GS1”: 50; “GS2”： 50;每一个的 MRM 的驻留时间（Dwell Time）要进行优化，尽可能使“ Total Sean Time”控制在最窄峰的峰宽的1/12;Duration”与 UPLC 的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。6、双击左侧栏“ ACQUITY Method Editor ”，通过“File”打开刚保存的质谱方法。选择进样方式、进样针的强洗和弱洗、色谱柱温度及样 品室温度、流动相组成与梯度程序及运行时间（与质谱分析时间一

11、致），保存此方法。7、双击左侧栏“ Build Acquisition Batch”建立处理批次，选择上述保存的方法，添加批次（SET1 可修改为日期），添加样品，设置样品 名称、甁号（48vial 2mL holder）及“ Date file”，保存此批次。&提交（submit）此样品序列，点击工具栏中“ Equilibrate”按钮， 观察压力变化，待Delta”小于 50 时，点击工具栏中“ Ready”，准备进样，在“View Queue”界面下可查看所提交的序列，准确无误后，点击“ start sample开始进样。三、结束工作1、 重新建立一个分析批次，选择 Penicillin

12、 项目下的“ UPLC_MS_FLUSH ”方法，放置空白样品（水）于样品盘中，提 交并运行，对液相及质谱仪进行冲洗。2、待机器冲洗完毕后，灭活“ UPLC MS ”系统，关闭质谱软件，关闭 UPLC 电源。Waters Alliance HPLC e2695 串联质谱（HPLC-MS/MS ）操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、离子源垂直旋钮调至 “ 2 位。3、将流动相准备好，过 0.45 微米的滤膜并超声脱气。4、连接好进样采集触发线。二、操作步骤1、打开 Waters HPLC e2695 的 Separations Module 主机电源，待自检完成后（屏幕显示 Idl

13、e），在控制屏点击 Menu/Status”，选择“ DirectFunction”进入冲洗选项界面，分别进行“ Dry Prime”、“Wet Prime”及“Purge Injector”，排除管道内的气泡。2、安装并活化新的色谱柱，一般活化 30min 即可。3、打开桌面“ Empower”软件， 输入用户名 （system） 及密码（manage） 。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开“系统”，将“alliance_MS”改为在线模式。左栏点击“项目”添加新项目并保存。4、在软件初始界面，点击“运行样品”，选择所需项目及色谱系统。5、通过菜单栏“编辑”选择“仪器方法”，新建液相方法

14、，设置流动 相组分、洗脱程序、柱温及样品室温度，保存当前的仪器方法。6、通过菜单栏“编辑”选择“新建方法组”，使用向导模式创建新方 法组，选择上述方法，点击“完成”。7、 在主界面上编辑样品运行序列，选择所需的“方法组/报告方法”，输入“进样体积”、“样品名称”及“运行时间”。8 将控制质谱电脑上的 Analyst 软件打开，激活“HPLC（2695）_MS”。9、点击 Analyst 软件菜单栏中的“ Script”，选择“ Merge MRM ”合 并所需测的多种目标分析物的 MRM 通道，并存储一个新的采样离子 通道的质谱方法文件（也可双击“ Build Acquisition Meth

15、od ”建立方 法手动输入）。10、双击“ Build Acquisition Method ”，将同步模式选为“ LcSync”， 打开文件选择需要的质谱方法。点击“Edit Parameter”设置“ CUR”：35; “IS”：+5500（正离子），-4500（负离子）；“TEM”：550C;“GS1”： 50; “GS2”： 50;每一个的 MRM 的驻留时间（DwellTime）要进行 优化，尽可能使“ Total Scan Time”控制在最窄峰的峰宽的 1/12;Duration”与 HPLC 的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。11、编辑出与液相相同顺序的样品运行序列。12

16、、在 Waters e2695主机 Separations Module界面上输入仪器方法的初始流动相比例进行平衡色谱柱，监测系统压力，待 Delta 值降至 50 以下即可。13、 在质谱控制电脑上，点击“ Submit”进行样品提交，再点击“ Startsample”，待右下角四级杆图谱变为“ Wait”状态，在液相端电脑上 点击运行样品即可进行分析。三、结束工作1、在 Empower 操作界面，添加一个空白样品（水）,设置进样数为 1,“方法组/报告方法”为“ HPLCMSFLUSH ”。2、在 Analyst 软件界面上，打开编辑一个空白样品（水），选择 Penicillin项目下的“

17、HPLCMSFLUSH ”方法，并提交运行样品，同样在 Empower软件中点击运行，完成冲洗工作。3、 待冲洗完毕后，灭活“ HPLC （2695） _MS”，关闭软件。4、关闭 HPLC 的电源。Waters Alliance HPLC e2695操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、将流动相准备好，过 0.45 微米的滤膜并超声脱气。二、操作步骤1、打开 Waters HPLC e2695 主机的 Separations Module 主机电源，待自检完成后（屏幕显示 Idle），在控制屏点击 Menu/Status”选择“ Direct Function”进入冲洗选项界面，

18、分别进行“ Dry Prime” “WetPrime”及“ Purge Injector”排除管道内的气泡。2、 安装并活化新的色谱柱，一般活化 30min 即可。3、打开桌面“ Empower”软件， 输入用户名 （system） 及密码（manager） 。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开“系统”，将“alliance_PDA/ELSD/DAD”改为在线模式。左栏点击“项目”添 加新项目并保存。4、在软件初始界面，点击“运行样品”，选择所需项目及色谱系统。5、通过菜单栏“编辑”选择“仪器方法”，新建液相方法，设置流动 相组分、洗脱程序、柱温、样品室温度及检测器参数，保存当前的仪 器方

19、法。6、通过菜单栏“编辑”选择“新建方法组”，使用向导模式创建新方 法组，选择上述方法，点击“完成”。7、 在主界面上编辑样品运行序列，选择所需的“方法组/报告方法”，输入“进样体积”、“样品名称”及“运行时间”。8 在 Waters e2695 主机的 Separations Module 界面上输入仪器方法 的初始流动相比例进行平衡色谱柱，监测系统压力，待 Delta 值降至50 以下即可。打开检测器电源待其自检完成，若出现连接失败，右击监测器窗口点击重设，打开检测器灯。9、点击工具栏中“运行”，进样分析。三、结束工作1、在 Empower 操作界面，添加一个空白样品（水），设置进样数为 1，“方法组/报告方法”为“ HPLCMSFLUSH ”， 点击工具栏“运行”，进行冲洗。此外，所有管路最终都要用有机试剂进行灌注清洗。2、待冲洗完毕后，将检测器灯关闭，再关闭检测器电源，关闭 HPLC 的电源。ACQUITY UPLC 操作规程一、前期准备1、检查线路是否连接完好。2、将流动相准备好，过 0.45 微米的滤膜并超声脱气。二、操作步骤1、打开桌面“ Empower”软件， 输入用户名 （system） 及密码（manager） 。点