糖和苷类化合物课件

1、 分布分布植物细胞与组织的重要营养物质和支持物质，广泛分布于植物各部位，根、茎、叶、花、果实、种子等多含葡萄糖、果糖、淀粉和纤维素等。 生物活性生物活性 香菇多糖抗肿瘤活性 黄芪多糖增强免疫功能糖的分布和生物活性 分布分布尤以高等植物分布最多。分布于植物各个部位，如人参的、根茎、茎、叶、花、种子均含三萜皂苷。 生物活性生物活性 人参皂苷免疫促进 天麻苷安神镇静 强心苷强心作用 黄酮苷抗菌、止咳、平喘、扩张冠状动脉血管苷的分布和生物活性香菇多糖注射液香菇多糖注射液免疫调节剂，用于恶性肿瘤辅助治疗。黄芪多糖注射液黄芪多糖注射液（热毒干扰素） 提高人体白细胞诱生干扰素的功能。 产品开发复方甘草酸苷片

2、复方甘草酸苷片：慢性肝病，改善肝功能异常，用于治疗湿疹，皮肤炎、斑秃。白芍总苷胶囊：抗炎免疫调节药，用于类风湿关节炎。 黄芩片：消炎解毒。用于上消炎解毒。用于上呼吸道感染，细菌性痢疾等。呼吸道感染，细菌性痢疾等。 第一节第一节 糖的结构和分类糖的结构和分类 一、糖的结构一、糖的结构 糖（糖（saccharides）多羟基醛或多羟多羟基醛或多羟基酮及其衍生物、聚合物基酮及其衍生物、聚合物 结构表示方法：结构表示方法：FischerFischer式（直链式）式（直链式） HaworthHaworth式（透视式）式（透视式） ReeveReeve式（式（构象式）构象式） FischerFischer

3、式式 HaworthHaworth式式端基端基C与最远的与最远的*C（C5或或C4）上的）上的O成环成环 C5旋转旋转120使环张力最小使环张力最小 将投影式向右倾倒将投影式向右倾倒90 1、糖的绝对构型、糖的绝对构型 -距端基距端基C最远的最远的*C（C5或或C4）构型）构型 Haworth式：式：C5（或（或C4）-取代基：取代基： 向上向上D型，向下型，向下L型型2、糖的端基碳原子差向异构体（苷键构型）、糖的端基碳原子差向异构体（苷键构型） -C1与与C5（或（或C4）相对构型）相对构型 C1-OH与与C5（或（或C4）-取代基：取代基： 同侧同侧构型，异侧构型，异侧构型构型 -D-糖糖

4、 -L-糖糖 ROHOHHOHROHOHROROHOH-D-D-糖糖 -D-D-糖糖 -L-L-糖糖 -L-L-糖糖OROHHOROHHOROHHOROHH -D-D-糖糖 -D-D-糖糖 -L-L-糖糖 -L-L-糖糖 3、糖的氧环、糖的氧环吡喃糖：六元氧环吡喃糖：六元氧环 呋喃糖：五元氧环呋喃糖：五元氧环OOD-芹糖芹糖D-葡萄糖葡萄糖、糖的构象、糖的构象呋喃糖：平面信封式呋喃糖：平面信封式吡喃糖：椅式吡喃糖：椅式(eeveeeve式式)O41O41=1C=1C（A A式）式） =C1=C1（N N式）式）二、糖的分类二、糖的分类 根据能否水解和分子量大小分为根据能否水解和分子量大小分为:

5、单糖单糖(monosaccharides)低聚糖低聚糖(oligosaccharides):29个单糖个单糖多糖多糖(polysacchari des):10个以上单糖，个以上单糖， 一般几百甚至几万个单糖组成。一般几百甚至几万个单糖组成。 （一）单糖（一）单糖 三碳糖三碳糖八碳糖，五碳（戊）糖和六碳（己）八碳糖，五碳（戊）糖和六碳（己）糖最常见，衍生物中糖醛酸和糖醇最常见。糖最常见，衍生物中糖醛酸和糖醇最常见。H,OHHOOOHOH五碳醛糖：五碳醛糖：D-木糖木糖(D- xyl) 甲基五碳糖：甲基五碳糖：L-鼠李糖鼠李糖(L-rhamnose，L-rha)OHHOH,OHOHOCH3D- x

6、ylL-rha六碳醛糖：六碳醛糖：D-葡萄糖葡萄糖(D-glucose，glc)H,OHOOHOHOHHO六碳酮糖：六碳酮糖： D-果糖（果糖（D-fru）OOOOHHH(OH)CH2OH糖醛酸：糖醛酸： D-葡萄糖醛酸葡萄糖醛酸OHH,OHOOHOHCOOH （二）低聚糖（二）低聚糖 1、单糖数目：、单糖数目： 二糖（蔗糖、麦芽糖）、三糖、四糖等二糖（蔗糖、麦芽糖）、三糖、四糖等 例：环糊精例：环糊精68个葡萄糖组成，六聚体：个葡萄糖组成，六聚体：-环糊精，环糊精， 七聚体：七聚体：-环糊精环糊精，八聚体：，八聚体：-环糊精。环糊精。 环状分子内侧疏水性，增大难溶性药物溶解性，提高稳定性。环

7、状分子内侧疏水性，增大难溶性药物溶解性，提高稳定性。2、是否含游离醛基或酮基：、是否含游离醛基或酮基： 还原糖还原糖:有游离醛基或酮基，如麦芽糖。有游离醛基或酮基，如麦芽糖。非还原糖：两个单糖以端基羟基脱水缩合形成，非还原糖：两个单糖以端基羟基脱水缩合形成， 无游离醛基或酮基。如蔗糖。无游离醛基或酮基。如蔗糖。蔗糖蔗糖 麦芽糖麦芽糖 （三）多糖（三）多糖1植物多糖植物多糖 （1）纤维素（）纤维素（cellulose） （2）淀粉（）淀粉（starch） （3）粘液质（）粘液质（mucilage） （4）树胶（）树胶（gum）2菌类多糖菌类多糖 猪苓多糖猪苓多糖抗肿瘤转移和调节免疫功能抗肿瘤转移

8、和调节免疫功能3动物多糖动物多糖 肝素肝素天然抗凝血物质天然抗凝血物质 甲壳素甲壳素甲壳类昆虫外壳，浓碱处理得脱乙酰甲壳素。甲壳类昆虫外壳，浓碱处理得脱乙酰甲壳素。制成透析膜、超滤膜，作药物载体具缓释、持效的优点，制成透析膜、超滤膜，作药物载体具缓释、持效的优点， 还用于人造皮肤、人造血管、手术缝合线等。还用于人造皮肤、人造血管、手术缝合线等。第二节第二节 苷的结构与分类苷的结构与分类 一、苷的含义一、苷的含义 糖糖+非糖物质非糖物质 苷苷OOHOHOHORO1H23456苷键原子苷键原子 苷元苷元 苷键苷键端基碳原子端基碳原子-D-D-葡萄糖苷葡萄糖苷 糖的端基碳原子糖的端基碳原子 非糖部分

9、非糖部分苷元苷元(genin)(genin) 苷键：苷元与糖之间的键，即苷键：苷元与糖之间的键，即苷键原子和端基苷键原子和端基C C原子之间的键。原子之间的键。 苷键原子：苷元上形成苷键以连苷键原子：苷元上形成苷键以连 接糖的原子，接糖的原子，O O、N N、S S、C C。苷苷 元元 + 糖糖 苷苷糖的构型糖的构型 绝对构型绝对构型 端基碳原子相对构型端基碳原子相对构型 依依C5-R取向取向 依依C1-OH与与C5-R相对位置相对位置 D-型型 （向上）（向上） L-型型（向下）（向下） -型型 （同侧）（同侧） -型型（异侧）（异侧） 多形成多形成 -D-葡萄糖葡萄糖 L-鼠李糖鼠李糖 二

10、、苷的结构分类二、苷的结构分类1、氧苷：、氧苷：苷元通过氧原子和糖连接，苷元通过氧原子和糖连接， 依苷元依苷元-OH类型分为：类型分为： 醇苷：红景天苷醇苷：红景天苷 酚苷：天麻苷、白藜芦醇苷酚苷：天麻苷、白藜芦醇苷 酯苷：山慈菇苷酯苷：山慈菇苷A、B 氰苷：苦杏仁苷氰苷：苦杏仁苷 （一）苷键原子：（一）苷键原子： 氧苷、硫苷、氮苷、碳苷氧苷、硫苷、氮苷、碳苷OOHOHOHOHOHO红景天苷（醇苷）红景天苷（醇苷）致适应原致适应原 CHOHOHOCHglcCH2OHOglc白藜芦醇苷（酚苷）白藜芦醇苷（酚苷）保护心脏、抗血栓、降血脂保护心脏、抗血栓、降血脂 天麻苷（酚苷）天麻苷（酚苷）安神镇静

11、安神镇静OOHOHOHOOHOOHOHOHOCHCN苦杏仁苷苦杏仁苷（氰苷）（氰苷） OHHOHOOHOOCH2OHRO R=H R=H 山慈菇苷山慈菇苷 A A R=OH R=OH 山慈菇苷山慈菇苷 B B（酯苷）（酯苷）先缓慢分解成先缓慢分解成-羟基苯乙腈，再分解为苯羟基苯乙腈，再分解为苯甲醛（苦杏仁味）、氢氰酸（小剂量抑制甲醛（苦杏仁味）、氢氰酸（小剂量抑制呼吸中枢镇咳，大剂量中毒甚至死亡）。呼吸中枢镇咳，大剂量中毒甚至死亡）。2、硫苷：、硫苷：糖半缩醛羟基与苷元巯基缩合，常存在糖半缩醛羟基与苷元巯基缩合，常存在于十字花科植物，如黑（白）芥子苷、萝卜苷于十字花科植物，如黑（白）芥子苷、萝

12、卜苷 。CH2CHCH2CNSOSO3Kglc黑芥子苷黑芥子苷CCH2CH2CHCHSCH3NOS3HOOHOHOOOHSH萝卜苷萝卜苷3、氮苷：、氮苷：糖端基碳与苷元氮原子连接。腺苷、糖端基碳与苷元氮原子连接。腺苷、鸟苷等，生化中多见。如巴豆苷水解后产生苷元鸟苷等，生化中多见。如巴豆苷水解后产生苷元巴豆毒素具大毒。巴豆毒素具大毒。NNNNNH2OOHOHHOCH2腺苷（氮苷）腺苷（氮苷）ONNNNNH2OH巴豆苷（氮苷）巴豆苷（氮苷）4、碳苷：、碳苷：糖端基碳直接与苷元碳原子连接。糖端基碳直接与苷元碳原子连接。苷元多为黄酮、蒽醌类。水溶性小、难于水解。苷元多为黄酮、蒽醌类。水溶性小、难于水解

13、。芦荟苷：芦荟苷：致泻致泻 （蒽酮（蒽酮碳苷）碳苷） OOOHOHglcOH 牡荆素：牡荆素：抗肿瘤、抗肿瘤、降压、抗炎及解痉降压、抗炎及解痉 （黄酮碳苷）（黄酮碳苷） OOHOHOHOHOOHOHCH2OHH其他分类方法：其他分类方法： 苷元类型：黄酮苷、蒽醌苷、香豆素苷苷元类型：黄酮苷、蒽醌苷、香豆素苷 存在状态：原生苷、次生苷存在状态：原生苷、次生苷 特殊性质：皂苷特殊性质：皂苷 生理作用：强心苷生理作用：强心苷 糖种类和名称：木糖苷、葡萄糖苷糖种类和名称：木糖苷、葡萄糖苷 单糖基数目：单糖苷、双糖苷单糖基数目：单糖苷、双糖苷 糖链数目：单糖链苷、双糖链苷糖链数目：单糖链苷、双糖链苷 芦

14、丁芦丁 七叶苷七叶苷 （黄酮苷）（黄酮苷） （香豆素苷）（香豆素苷）大黄素甲醚大黄素甲醚-8-O-D龙胆双糖苷龙胆双糖苷 （蒽醌苷）（蒽醌苷） 苦杏仁苷苦杏仁苷 野樱苷野樱苷（原生苷）（原生苷） （次生苷）（次生苷） 苦杏仁苷酶苦杏仁苷酶第二节第二节 苷的理化性质苷的理化性质 一、性状一、性状u形态形态 糖基少：结晶糖基少：结晶 糖基多：无定型粉末，吸湿性。糖基多：无定型粉末，吸湿性。 u颜色颜色 取决于苷元取决于苷元(共轭系统及助色团共轭系统及助色团) 如黄酮苷、蒽醌苷有颜色。如黄酮苷、蒽醌苷有颜色。 u气味气味 无味、苦味；个别甜味无味、苦味；个别甜味 （甘草皂苷（甘草皂苷 ），刺激性（皂

15、苷）。，刺激性（皂苷）。 二、旋光性：二、旋光性：变旋作用变旋作用苷有旋光性且多呈左旋，糖多为右旋。苷有旋光性且多呈左旋，糖多为右旋。苷苷 苷元苷元 + 糖糖 多呈右旋多呈右旋多呈多呈左左旋旋 混合物多呈混合物多呈右右旋旋应用：检识苷和多糖。应用：检识苷和多糖。苷：苷：变旋作用。变旋作用。 水解液含非糖（苷元）。水解液含非糖（苷元）。三、溶解性三、溶解性 水水 甲（乙）醇甲（乙）醇 苯、乙醚、氯仿苯、乙醚、氯仿 石油醚石油醚苷苷 （亲水性）（亲水性） + + - -苷元（亲脂性）苷元（亲脂性） - + + +（-）苷：苷：糖部分：糖基数目糖部分：糖基数目，亲水性，亲水性。 苷元部分：大分子苷元

16、苷元部分：大分子苷元(如甾醇、萜醇等如甾醇、萜醇等) 的单糖苷，的单糖苷， 极性较小，亲水性极性较小，亲水性，溶于低极性溶剂，溶于低极性溶剂(如氯仿如氯仿)。 碳苷：溶解度小（水和其它溶剂）。碳苷：溶解度小（水和其它溶剂）。四、苷键的裂解四、苷键的裂解酸水解、酶解、碱水解、氧化开裂法等酸水解、酶解、碱水解、氧化开裂法等（一）酸水解（一）酸水解 反应机理（以葡萄糖苷为例）反应机理（以葡萄糖苷为例） OOHOHORHOOH+OOHOHORHOOH+HHH+OOHOHHOOHH,OH+ROH 苷键原子质子化苷键原子质子化（水解难易关键）（水解难易关键）影响苷键原子质子化的因素影响苷键原子质子化的因素

17、 苷键原子周围电子云密度苷键原子周围电子云密度（电子云密度大，（电子云密度大，易于接受质子，易于接受质子，水解容易）水解容易） 空间环境空间环境（周围取代基大，（周围取代基大，不利于接受质子，不利于接受质子，水解困难）水解困难） 酸水解规律酸水解规律 1 1苷键原子苷键原子 : N: N苷苷 O O苷苷 S S苷苷 C C苷苷 （易接受质子）（易接受质子） （无孤对电子）（无孤对电子） 例：巴豆苷例：巴豆苷 天麻苷天麻苷 黑芥子苷黑芥子苷 芦荟苷芦荟苷水解规律水解规律2 2吡喃糖苷吡喃糖苷C C2 2取代：取代： 2-2-去氧糖苷去氧糖苷 2- 2-羟基糖苷羟基糖苷 2- 2-氨基糖苷氨基糖苷

18、 （无）（无） （竞争性吸引质子）（竞争性吸引质子）3 3吡喃糖苷吡喃糖苷C C5 5取代：取代： 五碳糖苷五碳糖苷 甲基五碳糖苷甲基五碳糖苷 六碳糖苷六碳糖苷 糖醛酸苷糖醛酸苷（空间位阻小）（空间位阻小） （大）（大）6 6芳香族苷芳香族苷 脂肪族苷脂肪族苷（苷元供电性）（苷元供电性）4 4呋喃糖苷呋喃糖苷 吡喃糖苷吡喃糖苷 （分子平面性，张力大）（分子平面性，张力大）5 5酮糖苷酮糖苷 醛糖苷醛糖苷 （多为呋喃糖）（多为呋喃糖） （多为吡喃糖）（多为吡喃糖）（二）碱水解（二）碱水解 苷键的缩醛结构（苷键原子的负电性）苷键的缩醛结构（苷键原子的负电性） 对稀碱（对稀碱（OH-）稳定）稳定 ，

19、很少用碱水解。，很少用碱水解。 酯苷、酚苷、烯醇苷、酯苷、酚苷、烯醇苷、吸电子基取代的苷吸电子基取代的苷（苷键原子的正电性）（苷键原子的正电性）碱水解。碱水解。 COOROCCOCCOglcglcglcglc吸电子 基（三）酶水解（三）酶水解 条件温和条件温和 专属性高专属性高（水、（水、3040） 苷酶苷酶 苷（苷（麦芽糖酶麦芽糖酶 水解水解 -葡萄糖苷键）葡萄糖苷键） 苷酶苷酶 苷（苷（苦杏仁苷酶苦杏仁苷酶 水解水解 -葡萄糖苷键和其它六碳醛糖葡萄糖苷键和其它六碳醛糖-苷键）苷键） 获得真正苷元获得真正苷元 苷键构型（苷键构型（、）的判断）的判断（四）氧化开裂反应（四）氧化开裂反应（Smi

20、thSmith降解降解法）法） 步骤步骤-三步：三步：-D-葡萄糖苷葡萄糖苷 1.过碘酸过碘酸 二元醛二元醛 2.四氢硼钠四氢硼钠 二元醇二元醇（O-苷）苷） （氧化邻二醇）（氧化邻二醇） （还原）（还原） （稳定性差）（稳定性差）3.稀酸室温稀酸室温 多元醇多元醇 羟基乙醛羟基乙醛 苷元苷元（温和）（温和） 难水解的碳苷难水解的碳苷 苷元不稳定的苷（人参皂苷）苷元不稳定的苷（人参皂苷）氧化开裂法氧化开裂法 Smith Smith降解法降解法获得真正苷元获得真正苷元 OOHOHOHOHRIO4IO4-BH4-H+123CH2OHCHOHCH2OHCHOHCH2OHR-R-CHOHCOOH-D-

21、葡萄糖苷（葡萄糖苷（C-苷）苷） 带醛基的苷元带醛基的苷元 用途用途 五、显色反应五、显色反应Molish反应：反应： -萘酚和浓硫酸萘酚和浓硫酸样品样品 紫红色环紫红色环结果：含糖或苷，鉴别苷与苷元结果：含糖或苷，鉴别苷与苷元.注意：注意：C-C-苷苷和糖醛酸呈阴性。和糖醛酸呈阴性。例：丹皮苷例：丹皮苷 （+） 丹皮酚丹皮酚 （-）苯胺苯胺-邻苯二甲酸反应：邻苯二甲酸反应： 105 棕色斑点棕色斑点 糖糖PC检识显色剂检识显色剂第三节第三节 糖和苷的提取分离糖和苷的提取分离一、糖的提取一、糖的提取水（碱）提醇沉法水（碱）提醇沉法药材药材水（碱水）提取，浓缩水（碱水）提取，浓缩水提液水提液高浓

22、度乙醇高浓度乙醇沉淀（粗多糖）沉淀（粗多糖）溶液溶液缺点：蛋白质较多缺点：蛋白质较多 除蛋白质方法除蛋白质方法 Sevag法法正丁醇正丁醇-氯仿按氯仿按1：4混合后与多混合后与多糖水溶液振摇，放置，使蛋白质变性沉淀。糖水溶液振摇，放置，使蛋白质变性沉淀。 TCA 法：法： 粗多糖提取液，加三氯乙酸溶液，粗多糖提取液，加三氯乙酸溶液，冰箱保存过夜，离心，得上清液。冰箱保存过夜，离心，得上清液。 实例香菇多糖的提取 香菇子实体加蒸馏水90-100加热回流，提取，用氯仿-正丁醇去蛋白，经水流动透析，用72%乙醇沉淀多糖，得香菇多糖，收得率为3.32%。 二、苷的提取二、苷的提取 提取目的：原生苷提取

23、目的：原生苷 or 次生苷、苷元次生苷、苷元 ? 苷与酶共存苷与酶共存 避免避免 or 利用利用 酶解酶解? 溶解性差异溶解性差异 原生苷原生苷:亲水性亲水性 次生苷、苷元：亲脂性次生苷、苷元：亲脂性 提取原生苷提取原生苷 提取次生苷、苷元提取次生苷、苷元 抑制酶的活性抑制酶的活性甲醇、乙醇或沸水提甲醇、乙醇或沸水提药材加盐（碳酸钙）拌匀药材加盐（碳酸钙）拌匀避免酸、碱接触避免酸、碱接触 利用酶的活性利用酶的活性（水、（水、3040、2448）加酸或碱水解、预发酵等加酸或碱水解、预发酵等有机溶剂提取：醇、乙醚、氯仿有机溶剂提取：醇、乙醚、氯仿 提取注意事项提取注意事项 系统溶剂法系统溶剂法 次

24、生苷、苷元的提取次生苷、苷元的提取 三、苷的分离三、苷的分离 初步精制初步精制溶剂萃取法溶剂萃取法乙酸乙酯、正丁醇乙酸乙酯、正丁醇溶剂沉淀法溶剂沉淀法水液加丙酮或乙醚水液加丙酮或乙醚大孔树脂法大孔树脂法先水洗无机盐、糖等，先水洗无机盐、糖等， 不同浓度乙醇洗苷不同浓度乙醇洗苷 总苷总苷分离：色谱法（为主）分离：色谱法（为主） 硅胶：多用氯仿硅胶：多用氯仿-甲醇或氯仿甲醇或氯仿-甲醇甲醇-水系统洗脱。水系统洗脱。反相硅胶：反相硅胶：Rp-18、Rp-8（极性成分适用）；（极性成分适用）； 水水-甲醇或水甲醇或水-乙腈为流动相乙腈为流动相葡聚糖凝胶：葡聚糖凝胶：SephedexLH-20(有机相适

25、用有机相适用) 不同浓度乙醇洗脱（分子量不同）不同浓度乙醇洗脱（分子量不同）单体成分单体成分 白芍毛莨科植物芍药 (paeonia lactiflora Pall) 干燥根。功效养血、柔肝、敛阴、收汗、缓急止痛等。成分芍药苷 (paeoniflorin) 、羟基芍药苷 (hydroxy-paeoniflorin) 、芍药花苷 (paeonin) 、芍药内酯苷 (albiflorin) 、苯甲酰芍药苷 (benzoylpaeoniflorin) 等，总称白芍总苷 (total glucosides of paeonia ，TGP) 。实例1：白芍总苷的提取分离白芍原植物白芍药材 乙醇提取 白芍饮

26、片100 g,粉碎成粗颗粒,70%乙醇回流提取两次,第1次加8倍量提取60min,第2次加6倍量提取30 min,过滤,合并滤液,回收至无醇味,加水至药液浓度1g生药/ml。 大孔树脂分离 2倍AB-8大孔树脂吸附,柱径高比为121,树脂柱上吸附30 min后,以3BV蒸馏水洗去糖,收集5BV 70%乙醇洗脱液,流速为3BV/h。 结果：浸膏中白芍总苷含量达60%以上。 方法可靠,成本较低, 可进行工业化大生产。 柴胡伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium Willd.的干燥根。 实例2：柴胡总皂苷的提取 功效和

27、解表里，疏肝，升阳。用于感冒发热， 寒热往来，胸胁胀痛，月经不调，子官脱垂，脱肛。 用于寒热往来、感冒发热等症。 成分柴胡皂苷（saikosapoins a、b、c、d等），甾醇，挥发油（柴胡醇、丁香酚等）等。柴胡制成的单味或复方注射液，对外感发热有较好 的解表退热作用。 柴胡总皂苷的提取柴胡总皂苷的提取 柴胡细粉用含5吡啶的甲醇提取(中和植物酸，防止皂苷次生化)，回收甲醇得浓缩物。加水后用水饱和正丁醇萃取，回收正丁醇， 加入乙醚使沉淀，过滤得粗总皂苷。 第四节第四节 苷的结构研究苷的结构研究研究一般程序：研究一般程序： 1.物理常数的测定物理常数的测定 mp，D等。等。2.分子式测定分子式测

28、定 元素分析：元素分析：定性定量分析元素种类和比例。定性定量分析元素种类和比例。 质谱分析法：质谱分析法：分子量和分子式。分子量和分子式。 电子轰击质谱（电子轰击质谱（EI-MS）：不易获得分子离子峰（极性大）：不易获得分子离子峰（极性大）化学电离质谱（化学电离质谱（CI-MS）、）、场解吸质谱（场解吸质谱（FD-MS）、）、 快原子轰击质谱（快原子轰击质谱（FAB-MS） ：可用：可用高分辨快原子轰击质谱（高分辨快原子轰击质谱（HR-FAB-MS）：直接测分子式）：直接测分子式 （1）酸水解得到苷元和糖）酸水解得到苷元和糖（2）苷元结构鉴定）苷元结构鉴定 （3）糖种类鉴定）糖种类鉴定u纸色谱

29、（纸色谱（PC）：分配原理）：分配原理l固定相：水固定相：水 展开剂：正丁醇展开剂：正丁醇-乙酸乙酸-水水(4：5：1，上层，上层) BAW 显色剂：苯胺显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试剂邻苯二甲酸试剂3.3.组成苷的苷元、糖的鉴定组成苷的苷元、糖的鉴定 u薄层色谱（薄层色谱（TLC）：硅胶）：硅胶硼酸或无机盐溶液铺板硼酸或无机盐溶液铺板 如如0.3mol/L磷酸氢二钠或磷酸二氢钠水液磷酸氢二钠或磷酸二氢钠水液 增大溶解度，提高点样量（可达增大溶解度，提高点样量（可达400500g）。）。 降低吸附力，改善分离效果。降低吸附力，改善分离效果。u气相色谱（气相色谱（GLC）：水解、制备）：水解、制备T

30、MS衍生物（具挥发性）。衍生物（具挥发性）。u超导超导FT-NMR光谱光谱: 各糖不同质子的各糖不同质子的、J 与标准糖比较与标准糖比较 各糖不同碳原子的各糖不同碳原子的 与标准糖比较与标准糖比较（4 4）糖数目测定）糖数目测定 光密度扫描法：光密度扫描法：测定各糖斑点含量，计算各糖分子比，测定各糖斑点含量，计算各糖分子比，推算糖数目。推算糖数目。质谱法：质谱法：测定苷及苷元分子量，计算差值，求糖的数目。测定苷及苷元分子量，计算差值，求糖的数目。 1 1H-NMRH-NMR谱谱: :测定糖端基质子信号（测定糖端基质子信号（44 5ppm5ppm，较大）数目；，较大）数目； 制成全乙酰化或全甲基

31、化物，测定乙酰氧基、甲氧基信号制成全乙酰化或全甲基化物，测定乙酰氧基、甲氧基信号（、J J）数目。）数目。 1313C-NMRC-NMR谱谱: :测定糖端基碳信号（测定糖端基碳信号（9090112ppm112ppm）数目；）数目； 苷总碳信号数减去苷元碳信号数，推算糖数目。苷总碳信号数减去苷元碳信号数，推算糖数目。 4.4.测定苷元与糖、糖与糖连接位置测定苷元与糖、糖与糖连接位置（1 1）化学方法）化学方法: : 苷全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对苷全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对照品色谱）未全甲醚化单糖，游离羟基所在照品色谱）未全甲醚化单糖，游离羟基所在位置即糖与糖之间的连接位置。位置即糖与

32、糖之间的连接位置。 （2 2）13C-NMR13C-NMR谱法：谱法： 原理：原理：苷化位移（苷化位移（GSGS）规律规律糖和苷元成苷后，糖和苷元成苷后， 苷元苷元-C-C、-C-C和和糖的端基糖的端基C C化学位移改变。化学位移改变。p苷元和糖连接位置：苷元和糖连接位置： 方法：方法：比较苷和苷元比较苷和苷元1313C-NMRC-NMR谱，苷元谱，苷元-OH-OH成苷碳原子（成苷碳原子（-C-C）和相邻碳原子（和相邻碳原子（-C-C）信号发生位移，其它）信号发生位移，其它C C几乎不变。几乎不变。辩别辩别苷元的哪个碳原子与糖相连接。苷元的哪个碳原子与糖相连接。 醇羟基苷化醇羟基苷化苷元苷元-

33、碳向低场位移（碳向低场位移（+4+410ppm10ppm），）， -碳向高场位移（碳向高场位移（-0.9-0.94.6ppm4.6ppm） 酚羟基苷化酚羟基苷化苷元苷元-碳向高场位移，碳向高场位移， -碳向低场位移。碳向低场位移。 p糖与糖之间连接位置：糖与糖之间连接位置： 依据：依据：被苷化的糖中，被苷化的糖中，-C-C位移较大，位移较大，-C-C稍有位移。稍有位移。 方法：方法：比较苷与相应单糖的比较苷与相应单糖的1313C-NMRC-NMR谱，若内端糖的某谱，若内端糖的某C C原子向低场移动（原子向低场移动（+4+47ppm7ppm），相邻两），相邻两C C略向高场移动略向高场移动（-1-14ppm4ppm），），内端糖的内端糖的该该C C原子就是连糖的位置。原子就是连糖的位置。5.5.糖与糖之间连接顺序的确定糖与糖之间连接顺序的确定 苷苷 缓和酸水解缓和酸水解酶水解酶水解 乙酰解乙酰解 全甲基化甲醇解全甲基化甲醇解 部分苷键断裂部分苷键断裂的裂解产物的裂解产物 推断糖和糖推断糖和糖连接顺序连接顺序 （1）部分水解法）部分水解法（2 2）波谱分析法）波谱分析法 质谱（质谱（MS）法）法 :依据：依据：糖基碎片离子峰或分子离子脱糖基的碎片离子峰，糖基碎片离子峰或分子离子脱糖基的碎片离子峰，判断糖的连接顺序