疑难血型分析鉴定及处理

1、 疑难血型鉴定分析及处理昆明医科大学第一附属医院输血科昆明医科大学第一附属医院输血科董伟群董伟群输血前检查输血申请输血申请血样、信息血样、信息ABO、Rh定型定型抗体筛选与鉴定抗体筛选与鉴定交叉配血交叉配血血液发放血液发放红细胞血型系统简介 最重要的血型系统：最重要的血型系统：ABOABO、RhRh 临床意义：输血安全、器官移植、新生儿溶血病临床意义：输血安全、器官移植、新生儿溶血病ABO血型临床意义 溶血性输血反应溶血性输血反应 新生儿溶血病新生儿溶血病 器官移植器官移植 ABO血型系统的血清学特点 ABO系统主要的抗原、抗体系统主要的抗原、抗体血型血型抗原抗原抗体抗体A AA A抗抗B B

2、B BB B抗抗A AO O- -抗抗A A，抗，抗B BABABA A，B B- -ABO血型系统的血清学特点A A、B B抗原的免疫性强抗原的免疫性强规则抗体：血清中规律性的存在抗规则抗体：血清中规律性的存在抗A A和和/ /或抗或抗B B抗体抗体分泌型人的分泌液（血浆、唾液、羊水等）存在着分泌型人的分泌液（血浆、唾液、羊水等）存在着A A、B B、H H血型血型物质物质红细胞上的抗原与血清中的抗体存在相反的互补关系红细胞上的抗原与血清中的抗体存在相反的互补关系 -正反定型的理论基础正反定型的理论基础ABO血型系统的血清学特点抗抗A A、抗、抗B B抗体的特性抗体的特性 主要为主要为IgM

3、IgM、IgGIgG IgM IgM抗体可被抗体可被2-Me2-Me（2-2-巯基乙醇）破坏巯基乙醇）破坏 IgGIgG抗体分子量小，可通过胎盘屏障，造成新生儿溶血抗体分子量小，可通过胎盘屏障，造成新生儿溶血 ！新生儿溶血病ABO正反定型试验方法 玻片法玻片法 试管法：经典试管法：经典 微量板法：微量板法： 微柱凝胶法微柱凝胶法 PCRPCR方法方法u 注意：细胞浓度、血清与细胞比例注意：细胞浓度、血清与细胞比例ABO 正反定型结果-A-BA细胞B细胞O细胞自身对照A型4+001+00B型04+1+000O型001+1+00AB型4+4+0000uABO正反定型相符：正反定型相符： “正反定型

4、中有且只有正反定型中有且只有2个强凝集反应管个强凝集反应管”ABO亚型亚型/抗抗原抗体减弱原抗体减弱未达到两管强未达到两管强凝集凝集ABO正反不符正反不符不规则抗体？不规则抗体？除两管强凝集除两管强凝集之外还有其他之外还有其他凝集凝集 提示疑难血型提示疑难血型疑难血型的定义 疑难血型：是指一种血型难以判定的疑难血型：是指一种血型难以判定的“现象现象” 实质不是一种独立的血型实质不是一种独立的血型 在临床输血中在临床输血中, ,常规只要求查常规只要求查ABOABO和和RhRh（D D）, ,不要求查其它不要求查其它血型血型, ,因此因此, ,疑难血型只涉及疑难血型只涉及ABOABO和和RhDRh

5、D ABO ABO疑难血型一般是因为正、反定型不合而发现的疑难血型一般是因为正、反定型不合而发现的 ABO正反定型不符合原因 试验因素试验因素 假阴性：未加试剂；红细胞与血清比例不当；试验温假阴性：未加试剂；红细胞与血清比例不当；试验温度不当；离心速度不够；未判明结果为溶血；试验结果解度不当；离心速度不够；未判明结果为溶血；试验结果解读不准确。读不准确。假阳性：试剂血清、红细胞或生理盐水污染；应用不假阳性：试剂血清、红细胞或生理盐水污染；应用不洁的器皿；离心过度；试验结果解读不准确。洁的器皿；离心过度；试验结果解读不准确。 患者本身患者本身排除人为试验差错 漏加试剂漏加试剂 红细胞浓度过低或过

6、高红细胞浓度过低或过高 试剂污染、失效试剂污染、失效 加样枪污染加样枪污染 离心机转速不达标离心机转速不达标 标本搞错标本搞错 记录错误记录错误 结果判读错误结果判读错误正反定型不合的三种情况正定型被干扰正定型被干扰 : : 抗原抗原“变多变多” 抗原抗原“变少变少” 反定型被干扰反定型被干扰: : 抗体抗体“变多变多” 抗体抗体“变少变少” 正正, ,反定型同时被干扰反定型同时被干扰ABOABO亚型亚型年龄年龄6 6月、老年月、老年白血病白血病输异型血输异型血移植移植输血反应输血反应 血型物质血型物质正定型，抗原减弱或缺少红细胞抗原红细胞抗原“变少变少”1 1、获得性、获得性B B抗原抗原(

7、 (类类B)B)( (临床提示感染临床提示感染) ) 2 2、多凝集红细胞、多凝集红细胞3 3、自身凝集素、自身凝集素( (临床提示临床提示AIHA)AIHA)直抗（直抗（+ +）4 4、红细胞粘附大量蛋白、红细胞粘附大量蛋白5 5、红细胞未洗涤、红细胞未洗涤, ,血清对血清对 试剂反应试剂反应6 6、输异型血、输异型血( (输血史输血史) )7 7、造血干细胞移植、造血干细胞移植( (病史病史) ) （混合视野）（混合视野）正定型，意外抗原反应红细胞抗原红细胞抗原“变多变多”新生儿、老年新生儿、老年处理：加大血清量，降低温度低蛋白血症低蛋白血症免疫抑制药物免疫抑制药物血液病血液病先天性免疫缺

8、乏先天性免疫缺乏骨髓移植骨髓移植病理病理情况情况反定型、意外阴性血清抗体血清抗体“变少变少”缗钱状形成缗钱状形成 （多发性骨髓瘤）（多发性骨髓瘤）冷型自身抗体冷型自身抗体同种抗体同种抗体自身抗体自身抗体不规不规则抗则抗体体反定型、意外阳性血清抗体血清抗体“变多变多”常见问题处理方法 了解患者一般情况。了解患者一般情况。在做进一步试验之前，先进行重复试验。在做进一步试验之前，先进行重复试验。用试管法用试管法, ,洗涤细胞。洗涤细胞。更换新的试剂。更换新的试剂。灭活补体灭活补体。常见问题处理方法 初步检查：再取一份患者新鲜标本初步检查：再取一份患者新鲜标本 红细胞洗涤后配成红细胞洗涤后配成2 25

9、%5%浓度浓度 重复进行各项试验重复进行各项试验 直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验 用用O O及自身细胞检测血清及自身细胞检测血清 判定结果之前，实验管至少在室温和判定结果之前，实验管至少在室温和44放置放置3030分钟，阴分钟，阴性者用显微镜观察结果性者用显微镜观察结果进一步实验 增加试剂血清：抗增加试剂血清：抗A1 A1 、 抗抗H H、 抗抗ABAB 增加细胞：自身、增加细胞：自身、O O细胞、脐血细胞细胞、脐血细胞 唾液血型物质鉴定唾液血型物质鉴定 吸收试验吸收试验 放散试验放散试验 直接抗球蛋白试验直接抗球蛋白试验 分子生物学实验分子生物学实验实例分析和处理方法 实例分析（一）

10、1、病史病史 ：患者，女，：患者，女，3737岁，子宫肌瘤，既往妊娠史：岁，子宫肌瘤，既往妊娠史：G2P1G2P1，无输血史。，无输血史。-A-B-D自身自身cAcBc室温室温04+004+分析：分析：A亚型？亚型？ A型（型（A抗原减弱）？其它可能抗原减弱）？其它可能 2、补充试验（人源抗、补充试验（人源抗A/B、抗、抗H）-A（人源）（人源）-B（人源）（人源）-AB（人源）（人源）室温室温041+1+0 1+1+OcPcA1c抗抗H4+4+u H抗原强弱：抗原强弱：Oc 大部分亚型大部分亚型 Ac 3 3、吸收放散试验：吸收放散试验： 1 1份份PcPc（生理盐水三洗后）（生理盐水三洗后

11、）+1+1份抗份抗A A 4 4吸收吸收30-60min 430-60min 4生理盐水洗生理盐水洗6 6次次 热放散后取上层放散液热放散后取上层放散液放散液的检测：放散液的检测：PcPc放散液放散液OcOc放散液放散液A A细胞细胞ISIS2+2+0 0443+3+0 0u通过吸收放散试验在通过吸收放散试验在Pc上检测出上检测出A抗原抗原 4 4、结论、结论综上所述：可判断为综上所述：可判断为A A亚型，但还不能确定亚型的具体分型亚型，但还不能确定亚型的具体分型 输血：输血：A A型红细胞、血小板型红细胞、血小板ABO亚型的检测人源抗人源抗A/BA/B抗抗-H-H抗抗-AB-AB 抗抗A A

12、1 1吸收放散吸收放散ABO亚型亚型检测项目检测项目实例分析（二）-A-A-B-B-D-D自身自身c cAcAcBcBc室温室温4+4+2+2+4+4+2+2+2+2+4+4+分析：患者的血型可能是分析：患者的血型可能是A A型。型。 巨球蛋白血症或部分多发性骨髓瘤患者，血液中异巨球蛋白血症或部分多发性骨髓瘤患者，血液中异常球蛋白升高，导致缗钱状凝集常球蛋白升高，导致缗钱状凝集对策：核对患者诊断和用药情况；盐水替代对策：核对患者诊断和用药情况；盐水替代 ：A型型输血：输血：A型红细胞、血小板型红细胞、血小板实例分析（三）-A-A-B-B-D-D自身自身c cAcAcBcBc室温室温2+2+2+

13、2+4+4+0 00 00 0患者是新生儿，抗体未出，反定无效患者是新生儿，抗体未出，反定无效正定型未出现正定型未出现2管强凝集管强凝集血型可能是血型可能是O型，脐带血中有型，脐带血中有Wharton胶。胶。洗涤被检细胞后正定型凝集消失：洗涤被检细胞后正定型凝集消失：O型型输血：输血：O型血型血ABO正反定型不符需要关注的问题正反定型不符需要关注的问题患者的年龄？患者的年龄？细胞是否三洗？细胞是否三洗？患者是否血浆蛋白浓度低？患者是否血浆蛋白浓度低？患者的疾病类型？（白血病，胃肠道肿瘤）患者的疾病类型？（白血病，胃肠道肿瘤）血样是否是输血后采集？血样是否是输血后采集？ABO正反定型不符思路整理

14、正定型正定型意外意外（）意外意外（+）洗涤洗涤RBC，降，降低温度，延长孵低温度，延长孵育时间育时间用不同用不同来源的来源的抗体试抗体试验，镜验，镜检检人源试剂，吸人源试剂，吸收放散试验收放散试验（加对照）（加对照）可能的亚可能的亚型型;因为年因为年龄、诊断龄、诊断或用药造或用药造成的抗原成的抗原减弱减弱洗涤洗涤RBC冷抗体或缗钱状凝集冷抗体或缗钱状凝集用不同来源的抗体用不同来源的抗体试验，研究病人的试验，研究病人的输血史和诊断输血史和诊断直抗（直抗（+）获得性获得性B、多凝集、多凝集ABO正反定型不符思路整理反定型反定型意外意外（）意外意外（+）加大血清量，降加大血清量，降低温度，延长孵低温

15、度，延长孵育时间，镜检育时间，镜检与与A(A1、A2)和和B细胞反应，加自细胞反应，加自身对照（身对照（）因为年龄、诊因为年龄、诊断或用药造成断或用药造成的抗体减弱的抗体减弱抗体筛选抗体筛选自身对照自身对照A1c（+）A2c和筛选和筛选c自自c(-)，所有细胞呈（所有细胞呈（+）包括自身对照包括自身对照部分筛选（部分筛选（+）自身（自身（-）含抗含抗A1的的A或或AB亚型亚型抗体鉴定抗体鉴定自身抗体和同种自身抗体和同种抗体抗体交叉配血交叉配血 交叉配血中遇到的问题如果在血型鉴定中做了反定型，在血型鉴定中就能发现问题，如果血型鉴定中找到原因，配血问题自然能解决。试验结果试验结果 可能的解释可能的

16、解释 讨论解决讨论解决主主 侧侧 + +自身对照自身对照 - -抗体筛选抗体筛选 - -（1 1）患者或献血者的）患者或献血者的ABOABO定定型不正确型不正确（2 2）患者血清中的同种抗）患者血清中的同种抗体与献血者红细胞上的抗原体与献血者红细胞上的抗原发生反应，但在筛选细胞上发生反应，但在筛选细胞上无此抗原存在。无此抗原存在。（3 3）献血者细胞可能有）献血者细胞可能有DATDAT阳阳（1 1）重复）重复ABOABO实验：查对抗体是否一致。实验：查对抗体是否一致。（2 2）增加抗体筛选和鉴定的细胞，进一步检查）增加抗体筛选和鉴定的细胞，进一步检查病人血清中的抗体病人血清中的抗体（3 3）做献血者直抗，如阳性，此血不能用于临）做献血者直抗，如阳性，此血不能用于临床，废弃。床，废弃。主主 侧侧 + +自身对照自身对照 - -抗体筛选抗体筛选 + + 患者血清中的同种抗体与献患者血清中的同种抗体与献血者红细胞及筛选细胞上的血者红细胞及筛选细胞上的抗原发生反应抗原发生反应 对患者血清进行抗体鉴定，筛选对应抗原阴性对患者血清进行抗体鉴定，筛选对应抗原阴性的红细胞重做交叉配血。的红细胞重做交叉配血。主主 侧侧 + +自身对照自身对照 + +抗体筛选抗体筛选 + + （1 1）