细胞融合与单克隆抗体2学习教案

1、会计学1细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体(kngt)2第一页，共54页。胸腺骨髓( su)中枢淋巴(ln b)器官外周淋巴(ln b)器官扁桃体，淋巴结淋巴结脾淋巴管肠系膜淋巴结第2页/共54页第二页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第3页/共54页第三页，共54页。一、抗原(kngyun)的识别与递呈（感应阶段）二、反应(fnyng)阶段三、效应阶段四、细胞免疫的生物学效应3.2 单克隆抗体技术第4页/共54页第四页，共54页。一、抗原的识别与递呈(d chn)（感应阶段）（一）APC对抗原(kngyun)的递呈（二）T细胞的双识别3.2 单克隆抗体(kngt)技术第5页

2、/共54页第五页，共54页。一种特殊(tsh)类型的细胞，携带细胞表面MHC（主要组织相容性复合体）II类分子，涉及抗原的加工和呈递给辅助T细胞。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第6页/共54页第六页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第7页/共54页第七页，共54页。二、反应(fnyng)阶段由TCR 识别并结合抗原性多肽(du ti)传递抗原信号；CD4、CD8分子分别识别MHC-II类和MHC-I类分子。3.2 单克隆抗体技术第8页/共54页第八页，共54页。又称协同刺激信号(xnho)，由众多协同刺激分子与相应受/配体结合介导，主要是B7/CD28分子对之间的作用。3.2

3、单克隆抗体(kngt)技术第9页/共54页第九页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第10页/共54页第十页，共54页。（三）T细胞的增殖(zngzh)和分化CD4+ TH 分化(fnhu)为： TH1 CD8+ CTL（TC )分化(fnhu)为： 有杀伤效应的CTL （TC )3.2 单克隆抗体(kngt)技术第11页/共54页第十一页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第12页/共54页第十二页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第13页/共54页第十三页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第14页/共54页第十四页，共54页。3.2 单克隆抗体(

4、kngt)技术第15页/共54页第十五页，共54页。能起抗原作用的各类物质必须具备如下(rxi)特性： (1)外源性 机体以往从未接触过的外源异物或异体；(2)结构性 分子量在10，000以上的大小，分子表面有稳定 的环状结构基团(而非线状基团)作为识别位点；(3)特异性 由于抗原(kngyun)有不同的决定簇，产生相应的抗体与 抗原(kngyun)间的反应是特异性的。 3.2 单克隆抗体(kngt)技术第16页/共54页第十六页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第17页/共54页第十七页，共54页。抗体抗体(kngt)结结构构3.2 单克隆抗体(kngt)技术第18页/共54页第

5、十八页，共54页。抗体作用抗体作用(zuyng)的机理的机理中和反应中和反应 聚集反应聚集反应 沉淀沉淀(chndin)(chndin)反应反应 补体活化补体活化3.2 单克隆抗体(kngt)技术第19页/共54页第十九页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第20页/共54页第二十页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第21页/共54页第二十一页，共54页。Csar Milstein3.2 单克隆抗体(kngt)技术第22页/共54页第二十二页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第23页/共54页第二十三页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第24页/共

6、54页第二十四页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第25页/共54页第二十五页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第26页/共54页第二十六页，共54页。单克隆抗体(kngt)的特性3.2 单克隆抗体(kngt)技术第27页/共54页第二十七页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第28页/共54页第二十八页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第29页/共54页第二十九页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第30页/共54页第三十页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第31页/共54页第三十一页，共54页。主要生物主要生物(shngw

7、)合合成途径成途径应急应急(yng j)通通路路氨基喋呤氨基喋呤A次黄嘌呤次黄嘌呤次黄嘌呤次黄嘌呤核苷酸核苷酸HGPRT+TK+胸腺胸腺嘧啶嘧啶胸腺嘧啶胸腺嘧啶脱氧核苷酸脱氧核苷酸DNA3.2 单克隆抗体技术第32页/共54页第三十二页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第33页/共54页第三十三页，共54页。杂交瘤技术(jsh)操作流程图解第34页/共54页第三十四页，共54页。一、免疫(miny)动物目的：在细胞融合后获得(hud)尽可能多的分泌针对于该目标抗原的特异性抗体的杂交瘤细胞.特定目标(mbio)抗原动物免疫脾脏中B淋巴细胞B淋巴细胞大量增殖刺激能分泌针对于该抗原的特异

8、性抗体3.2 单克隆抗体技术第35页/共54页第三十五页，共54页。常规免疫(miny)法脾内一次性免疫(miny)法短程免疫(miny)法体外免疫(miny)法 常用(chn yn)免疫方法：稳妥(wntu)；优势克隆省时；省抗原省时操作繁琐 3.2 单克隆抗体技术第36页/共54页第三十六页，共54页。腹腔(fqing)注射静脉注射(jn mi zh sh)皮下注射(p xi zh sh)免疫途径：3.2 单克隆抗体技术第37页/共54页第三十七页，共54页。常规(chnggu)免疫法：第1次免疫：抗原(kngyun)+弗氏完全佐剂第2次免疫：抗原+弗氏不完全佐剂第3次免疫：抗原 不加佐剂

9、第4次免疫：抗原 不加佐剂(皮下注射(p xi zh sh)或静脉注射)(皮下注射)(皮下注射(静脉注射)3.2 单克隆抗体技术第38页/共54页第三十八页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第39页/共54页第三十九页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第40页/共54页第四十页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第41页/共54页第四十一页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第42页/共54页第四十二页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第43页/共54页第四十三页，共54页。五.杂交瘤细胞(xbo)的筛选和克隆化3.2 单克隆抗体(kngt)技术第44页/共54页第四十四页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第45页/共54页第四十五页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第46页/共54页第四十六页，共54页。酶联免疫吸附法(ELISA)抗原第1抗体酶第2抗体待检杂交瘤培养(piyng)上清液底物有色产物酶标仪检测技术(jsh)原理：3.2 单克隆抗体(kngt)技术第47页/共54页第四十七页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第48页/共54页第四十八页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第49页/共54页第四十九页，共54页。3.2 单克隆抗体(kngt)技术第50页/共5