药物的含量测定方法与验证

1、1第四章第四章 药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证药物分析教研室药物分析教研室2内容提要内容提要第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证3第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点含量测定常用的方法含量测定常用的方法 容量分析法容量分析法( (滴定法滴定法) ) 光谱分析法光谱分析法 色谱分析法色谱分析法 4一、容量分析法（滴定法）一、容量分析法（滴定法）方法：方法：特点：特点：l 方法简便易行：价廉、简便、快速；方法简便易

2、行：价廉、简便、快速；l 方法耐用性高方法耐用性高l 准确度高准确度高（RSD0.2%）：适用于对准确度要）：适用于对准确度要求较高的试样分析。求较高的试样分析。l 专属性差专属性差适用范围：适用范围：化学原料药物的含量测定。化学原料药物的含量测定。第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点5一、容量分析法一、容量分析法有关计算有关计算滴定度滴定度T （mg/ml）：每：每1 ml规定浓度的滴定液规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。所相当的被测药物的质量。 被测物被测物 WA=TVB第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点61、滴定度的计算、滴定度

3、的计算滴定反应：滴定反应：aA (被测药物被测药物)+bB(滴定剂滴定剂)cC+dD MbamTm:滴定剂摩尔浓度；滴定剂摩尔浓度；M被测物摩尔质量；被测物摩尔质量；a/b:反应反应摩尔比摩尔比第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点72. 含量测定含量测定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法 (1)(2)(3)第一节第一节 定量分析方法的分类与特点定量分析方法的分类与特点8(1) 直接滴定法% 100(%) WTV含量规定摩尔浓度实际摩尔浓度F%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反应的原理注意掌握滴定

4、反应的原理, , 药物与滴定剂在反应药物与滴定剂在反应中的摩尔比中的摩尔比，正确计算滴定度和百分含量，正确计算滴定度和百分含量 浓度校正因子浓度校正因子9例：阿司匹林的含量测定例：阿司匹林的含量测定 精密称取本品精密称取本品0.4018g，加中性乙醇，加中性乙醇20ml溶解后，溶解后，加加3滴酚酞指示剂，用滴酚酞指示剂，用NaOH滴定液（滴定液（0.1002mol/L）滴定，消耗体积为滴定，消耗体积为22.20ml，求阿司匹林的含量？，求阿司匹林的含量？（ch.p每每1ml 0.1mol/L 的的NaOH滴定液相当于滴定液相当于18.02mg的阿司匹林）的阿司匹林）(1) 直接滴定法10解：精

5、密称取供试品解：精密称取供试品Ws=0.4018gNaOH实际浓度实际浓度0.1002mol/L，则，则F=0.1002/0.1=1.002消耗的消耗的NaOH滴定液体积：滴定液体积：V样样=22.20ml阿司匹林含量阿司匹林含量=100%SVF TW样322.20 1.002 18.20 10100%0.401899.8%(1) 直接滴定法11(2) 生成物滴定法生成物滴定法%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意药物与生成物注意药物与生成物B，生成物，生成物B与滴定剂之与滴定剂之间的化学计量关系，正确计算滴定度。间的化学计量关系，正确计算滴定度。药物与药物与A作用生成作

6、用生成B, 用滴定液滴定用滴定液滴定B百分含量计算方法与直接滴定法相同百分含量计算方法与直接滴定法相同 12（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o（a）不做空白试验时百分含量计算）不做空白试验时百分含量计算%100)V%AAWTFVFBBA（含量VA 定量加入滴定液定量加入滴定液A的体积的体积(ml)VB 滴定液滴定液B在回滴中消耗的体积在回滴中消耗的体积(ml)FA 滴定液滴定液A的浓度校正因数的浓度校正因数FB 滴定液滴定液B的浓度校正因数的浓度校正因数TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供试品称取量供试品称取量13（3）回滴定（剩余滴定）法）回滴定（剩余滴定）法o （b）

7、做空白试验时百分含量计算）做空白试验时百分含量计算 %100)V%0BWFTVSB（含量VB0 空白实验消耗滴定液空白实验消耗滴定液B的体积的体积VBS 样品实验消耗滴定液样品实验消耗滴定液B的体积的体积FB 滴定液滴定液B的浓度校正因数的浓度校正因数TA 滴定液滴定液A的滴定度的滴定度W 供试品称取量供试品称取量14 司可巴比妥钠含量测定司可巴比妥钠含量测定: 本品约本品约0.1g, 加水加水10ml溶溶解解, 精密加溴滴定液精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加盐酸再加盐酸5ml, 放置放置15分钟分钟, 加碘化钾试液加碘化钾试液10ml, 用硫代硫酸钠滴定用硫代硫酸钠滴定液

8、液(0.1mol/L)滴定滴定, 滴定的结果用空白试验校正滴定的结果用空白试验校正 W=0.1022g; 硫代硫酸钠滴定液硫代硫酸钠滴定液 F=1.038; 供试品消耗硫代硫酸钠滴定液供试品消耗硫代硫酸钠滴定液15.73ml;空白空白23.21ml 15滴定度滴定度(mg/ml) 01.1327.260111 . 0MbamT司可巴比妥钠司可巴比妥钠M=260.27, 与溴摩尔比为与溴摩尔比为1:1 %8 .98%10010001022. 001.13038. 1)73.1521.23( %100)(%) 2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量16（一）紫外（一）紫外-

9、可见分光光度法可见分光光度法（二）荧光分析法（二）荧光分析法（三）红外分光光度法（三）红外分光光度法（四）原子吸收分光光度法（四）原子吸收分光光度法（五）火焰光度法（五）火焰光度法二、光谱分析法二、光谱分析法17（一）紫外（一）紫外可见分光光度法可见分光光度法 根据物质对波长为根据物质对波长为200200760 nm760 nm这一这一范围的光吸收特性建立起来的一种定性、范围的光吸收特性建立起来的一种定性、定量和结构分析的方法。定量和结构分析的方法。 二、光谱分析法二、光谱分析法181. 1. 基本原理基本原理ECLIITA0lglgLambert -BeerLambert -Beer定律定律

10、百分吸光系数百分吸光系数( )：当溶液浓度：当溶液浓度c为为1%(g/ml)、液层厚度液层厚度(l)为为1cm时的吸光度时的吸光度(A)。%11cmE物质对光的选择性吸收波长及相应的吸收系数是物质对光的选择性吸收波长及相应的吸收系数是该物质的物理常数。该物质的物理常数。二、光谱分析法二、光谱分析法192.2.特点与适用范围特点与适用范围特点：特点：l简便易行：仪器价格低廉、操作简便、易于普及简便易行：仪器价格低廉、操作简便、易于普及l灵敏度高，灵敏度高，1010-4-4 1010-7-7g/mlg/mll准确度高准确度高,RSD=2-5%,RSD=2-5%l专属性较差专属性较差适用范围：适用范

11、围：多用于药物制剂的定量检查，如片剂的多用于药物制剂的定量检查，如片剂的溶出度或含量均匀度检查。溶出度或含量均匀度检查。二、光谱分析法二、光谱分析法20（1 1）波长准确度校正）波长准确度校正标准汞灯中的较强谱线标准汞灯中的较强谱线237.83237.83、253.65253.65、275.28275.28、296.73296.73、313.16313.16、334.15nm334.15nm等等氘灯中氘灯中:486.03nm,656.10nm:486.03nm,656.10nm3. 3. 仪器的校正和检定仪器的校正和检定二、光谱分析法二、光谱分析法21（2 2）吸光度的准确度校正）吸光度的准确

12、度校正60mg60mg重铬酸钾用重铬酸钾用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀释至的硫酸溶液稀释至1000ml1000ml，在规定波长处测定并计算吸收系数，与，在规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。规定值比较。规定值：规定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.5二、光谱分析法二、光谱分析法22（3）杂散光检查）杂散光检查规定试剂、浓度及在规定的波长处

13、测定相应透光率。规定试剂、浓度及在规定的波长处测定相应透光率。 碘化钠碘化钠1.00（1g/ml）220nm 0.8%（透光率）（透光率） 亚硝酸钠亚硝酸钠5.00（1g/ml）340nm 0.8（透光率）（透光率）（4）吸收池校正）吸收池校正 两吸收池测定的差值小于两吸收池测定的差值小于1%二、光谱分析法二、光谱分析法234、测定条件、测定条件（1）对溶剂的要求：注意溶剂的截止波长。）对溶剂的要求：注意溶剂的截止波长。 （2）测定波长的确证）测定波长的确证（3）供试品溶液浓度）供试品溶液浓度应使测得的吸光度在应使测得的吸光度在0.30.7之间之间二、光谱分析法二、光谱分析法24 5 5、含量

14、测定、含量测定(1) 对照品比较法对照品比较法RRXXACACCx：供试品溶液的浓度：供试品溶液的浓度Ax：供试品溶液的吸光度：供试品溶液的吸光度CR：对照品溶液的浓度：对照品溶液的浓度AR：对照品溶液的吸光度：对照品溶液的吸光度A. 待测物与对照品在相同条件下测定待测物与对照品在相同条件下测定(仪器、溶剂、波长仪器、溶剂、波长)B. 供试品溶液与对照品溶液浓度相近供试品溶液与对照品溶液浓度相近二、光谱分析法二、光谱分析法255 5、含量测定、含量测定(1) 对照品比较法对照品比较法%100(%)WDCx含量原料药原料药百分含量的计算公式：百分含量的计算公式：D：稀释体积：稀释体积W：供试品取

15、样量：供试品取样量二、光谱分析法二、光谱分析法26 5 5、含量测定、含量测定(1) 对照品比较法对照品比较法制剂制剂含量测定结果的计算公式：含量测定结果的计算公式：D：稀释体积：稀释体积W：供试品取样量：供试品取样量%100%/100%/gggg每单位实测含量标示量标示量测得量（ ）平均片重（片）供试品重（ ）标示量（片）27 5 5、含量测定、含量测定(1) 对照品比较法对照品比较法制剂含量测定结果的计算公式：制剂含量测定结果的计算公式：W(V)：平均片重：平均片重(装量装量)W：供试品取样量：供试品取样量B：制剂的标示量：制剂的标示量%100%XCD VVB标示量%100%XCD WWB

16、标示量固体制剂固体制剂液体制剂液体制剂）（VW28 5 5、含量测定、含量测定(2) 吸光系数法吸光系数法100)/(%11cmXXEAmlgCCx：供试品溶液的浓度：供试品溶液的浓度Ax：供试品溶液的吸光度：供试品溶液的吸光度 ：对照品溶液的浓度：对照品溶液的浓度A. 用本法测定时，吸光系数通常应大用本法测定时，吸光系数通常应大于于100；B. 注意仪器的校正与检定注意仪器的校正与检定%11cmE29 5 5、含量测定、含量测定(2) 吸光系数法吸光系数法1%1100%100%cmADELW含量原料药百分含量的计算公式：原料药百分含量的计算公式：30精密称取贝诺酯精密称取贝诺酯0.1500g

17、0.1500g，置于，置于100ml100ml的量筒中，加的量筒中，加无水乙醇适量，振摇微热溶解后放冷，加无水乙醇无水乙醇适量，振摇微热溶解后放冷，加无水乙醇稀释至刻度摇匀，过滤，精密量取稀释至刻度摇匀，过滤，精密量取5ml5ml至至1000ml1000ml量量筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在筒中加水至刻度，用紫外分光光度法在240nm240nm波长波长处测定吸收度为处测定吸收度为0.55850.5585，已知本品，已知本品240nm240nm处标准给处标准给定吸收系数定吸收系数 为为745745。求贝诺酯百分含量。求贝诺酯百分含量LCEALCEARcmRXcmX%11%11311%10.5

18、585100 1000100745 1005(%)100%100%99.95%0.1500cmADEW含量32 盐酸氯丙嗪片剂的含量测定：取本品盐酸氯丙嗪片剂的含量测定：取本品20片，精片，精密称定为密称定为8.100g，研细，精密称取，研细，精密称取0.4800g片粉，置片粉，置于于500ml量瓶中，加酸及水溶解并稀释至刻度，取上量瓶中，加酸及水溶解并稀释至刻度，取上清液清液5.00ml，置，置100ml量瓶中，加水至刻度，在量瓶中，加水至刻度，在254nm测得吸收度为测得吸收度为0.540，另取盐酸氯丙嗪对照品，另取盐酸氯丙嗪对照品，配成配成6.0g/ml的对照品溶液，同法在的对照品溶液，

19、同法在254nm处测的吸处测的吸收度为收度为0.564，标示量为，标示量为50mg/片，计算标示量百分数？片，计算标示量百分数？330.4800Wg8.1000.405020gWg500100100005.00mlD0.5406.05.7450.564XXRRAggCCmlmlA65.745 10000 0.4050 10(%)96.9%0.4800 0.0500CD WWB标示量B=50 mg/片=0.050g/片34 维生素维生素B1注射液含量的测定：精密量取本品（规注射液含量的测定：精密量取本品（规格格2ml：50mg）2ml，置，置200ml量瓶中，加水稀释至刻量瓶中，加水稀释至刻度，

20、摇匀，精密量取度，摇匀，精密量取5ml，置，置100ml量瓶中，加盐酸量瓶中，加盐酸溶液（溶液（91000）稀释至刻度，照紫外）稀释至刻度，照紫外-可见分光光度可见分光光度法（附录法（附录 A），在），在246nm的波长处测得吸光度为的波长处测得吸光度为0.521，按维生素，按维生素B1 的吸收系数（的吸收系数（ ）为）为421，计算本，计算本品相当于标示量的百分含量品相当于标示量的百分含量1%1cmE351%1100100%0.521200 1002 1000421 1 1005100%99.0%50 2cmXAD VELCD VVBVB 示量% = 标36（二）荧光分析法（二）荧光分析法

21、利用物质的荧光特性进行定性与定量测定的方法利用物质的荧光特性进行定性与定量测定的方法称为荧光分析法。称为荧光分析法。荧光发射光谱（荧光光谱）荧光发射光谱（荧光光谱）荧光激发光谱（荧光激发光谱（激发光谱激发光谱）371.1.特点与适用范围特点与适用范围特点：特点：l高灵敏度：高灵敏度：10-12 10-10g/ml，较，较UV-Vis高高l荧光自熄灭：溶液中荧光物质浓度太大时，会有荧光自熄灭：溶液中荧光物质浓度太大时，会有“自熄灭自熄灭”作用，因此荧光分析法应在低浓度溶液作用，因此荧光分析法应在低浓度溶液中进行中进行l易受干扰：干扰因素多，必须做空白试验易受干扰：干扰因素多，必须做空白试验适用范

22、围：适用范围：（二）荧光分析法（二）荧光分析法 382.干扰及排除干扰及排除(1)溶剂溶剂空白试验空白试验(2)溶液溶液： l药物浓度不宜过高，药物浓度不宜过高，l悬浮物悬浮物过滤，过滤，l溶氧溶氧通惰性气体除去通惰性气体除去l溶液溶液pH。(3)玻璃仪器及测定池玻璃仪器及测定池高度洁净高度洁净 (4) 温度：控制测定温度温度：控制测定温度（二）荧光分析法（二）荧光分析法 393.测定方法与含量计算测定方法与含量计算 在一定实验条件时，在在一定实验条件时，在较稀浓度范较稀浓度范围围内药物的荧内药物的荧光强度与溶液中该物质的浓度成正比。光强度与溶液中该物质的浓度成正比。 对照品比较对照品比较法法

23、 rbrXbXrXrXrbrXbXRRRRCCCCRRRR（二）荧光分析法（二）荧光分析法 40 利用物质在流动相与固定相两相中分配系数差异利用物质在流动相与固定相两相中分配系数差异而得以分离，并在检测中能检出其信号，从而达到而得以分离，并在检测中能检出其信号，从而达到分分离、分析离、分析的一类分析方法。的一类分析方法。色谱分析法是分析混合物的最有力手段。色谱分析法是分析混合物的最有力手段。三三 色谱分析法色谱分析法411.1.特点与适用范围特点与适用范围特点：特点：l高灵敏度：高灵敏度：10-15 10-12g/ml，l高专属性：高专属性：l高效能与高速度：高效能与高速度：适用范围：适用范围

24、：广泛应用于药物制剂的含量测定，尤其广泛应用于药物制剂的含量测定，尤其是复方制剂含量测定的首选方法。是复方制剂含量测定的首选方法。三三 色谱分析法色谱分析法422.2.分类分类依据分离原理：依据分离原理：l吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与分子排阻吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与分子排阻色色谱等。谱等。依据分离方式：依据分离方式：lHPLC、GC、TLC等等三三 色谱分析法色谱分析法43Ch.P各品种项下的色谱条件各品种项下的色谱条件固定条件固定条件固定相种类固定相种类流动相组成流动相组成检测器类型检测器类型可变条件可变条件色谱柱内径、长度色谱柱内径、长度流动相各组成的比例、流速流动相各组成

25、的比例、流速检测器的灵敏度检测器的灵敏度柱温、进样量柱温、进样量系统适用性系统适用性（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)441. 对仪器的一般要求对仪器的一般要求填充剂填充剂常用十八烷基硅烷键合硅胶（常用十八烷基硅烷键合硅胶（C18）离子交换色谱离子交换色谱离子交换填充剂离子交换填充剂分子排阻色谱分子排阻色谱凝胶或高分子多微球填充剂凝胶或高分子多微球填充剂检测器：紫外检测器最常用。检测器：紫外检测器最常用。荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器等。器等。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)451. 对仪器的一般要求对仪

26、器的一般要求流动相：流动相：反相色谱系统首选甲醇反相色谱系统首选甲醇-水系统；采用紫外末水系统；采用紫外末端波长检测时，首选乙腈端波长检测时，首选乙腈-水系统。水系统。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)462. 系统适用性试验系统适用性试验 指用规定的对照品溶液或系统适用性试验指用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液对色谱系统进行试验，应符合要求。包括溶液对色谱系统进行试验，应符合要求。包括理论板数（理论板数（n）、分离度（）、分离度（R）、拖尾因子（）、拖尾因子（T）和重复性和重复性等四个指标。等四个指标。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)472. 系统适

27、用性试验系统适用性试验（1）色谱柱的理论板数）色谱柱的理论板数(n)：用于评价色谱柱的分离：用于评价色谱柱的分离效能。一般为待测组分或内标物质的理论板数。效能。一般为待测组分或内标物质的理论板数。2254. 5hRWtn色谱柱的理论板数越多，柱效越高。色谱柱的理论板数越多，柱效越高。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)482. 系统适用性试验系统适用性试验（2）分离度（）分离度（R）：用于评价待测组分与相邻共存无）：用于评价待测组分与相邻共存无或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。的关键指标。21WW2R12RR

28、tt除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于度应大于1.5。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)492. 系统适用性试验系统适用性试验l采用外标法时，取对照溶液，连续进样采用外标法时，取对照溶液，连续进样5次，峰面积次，峰面积RSD应应2.0%；l采用内标法时，配制相当于采用内标法时，配制相当于80%、100%、120%的对的对照液，加入规定的内标，分别进样照液，加入规定的内标，分别进样3次，计算平均校正次，计算平均校正因子，因子，RSD亦应亦应2.0%。 （3）重复性：用于评价连续进样中，色谱系统响应值）重复性：用于评价

29、连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。的重复性能。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)502. 系统适用性试验系统适用性试验（4）拖尾因子）拖尾因子(T)：用于评价色谱峰的对称性。：用于评价色谱峰的对称性。105. 02dWTh除另有规定外，用峰高定量时除另有规定外，用峰高定量时T应在应在0.95 1.05之间。之间。（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)51 （1）内标法）内标法对照品对照品+内标物内标物对照溶液，进样，测定，计算校正因子对照溶液，进样，测定，计算校正因子 3. 测定法测定法RRssCACAf ）校正因子（ 供试品供试品+内标内标供试品溶液，进样

30、，测定供试品和内供试品溶液，进样，测定供试品和内标物质的峰面积或峰高，计算含量标物质的峰面积或峰高，计算含量 sSXXCAAfC）含量（%100%XCDW含量（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)52 （2）外标法）外标法供试品供试品供试品溶液供试品溶液对照品对照品对照品溶液对照品溶液进样，测定，计算含量进样，测定，计算含量 RXRXAACC）含量（ 缺点：不易精确控制缺点：不易精确控制进样量，宜用定量环或进样量，宜用定量环或自动进样自动进样（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)53 HPLCHPLC主要用于抗生素、生化药品及含杂质干扰测主要用于抗生素、生化药品及含

31、杂质干扰测定的化学药品。广泛用于药物制剂及多组分的含量测定的化学药品。广泛用于药物制剂及多组分的含量测定。定。 在药典中收载率呈大幅度上升趋势。在药典中收载率呈大幅度上升趋势。 （一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法(附录附录)54（二）气相色谱法（二）气相色谱法 GC 用于本身具挥发性，或加热气化的供试品的测用于本身具挥发性，或加热气化的供试品的测定。如维生素定。如维生素E 1. 对对GC仪器一般要求仪器一般要求 l载气为氮气；载气为氮气；l色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱为填充或毛细管柱l固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇固定液：甲基聚硅氧烷、聚乙二醇l检测器：氢火焰离子化检测器检测器：氢火焰离

32、子化检测器 l进样方式：溶液直接进样或顶空进样。进样方式：溶液直接进样或顶空进样。 552. 系统适用性试验系统适用性试验除另有规定外，应照除另有规定外，应照HPLC项下的规定。项下的规定。3. 测定方法测定方法l手动进样手动进样内标法定量内标法定量l自动进样自动进样外标法定量外标法定量l标准加入法标准加入法可消除基质效应的影响可消除基质效应的影响（二）气相色谱法（二）气相色谱法56小结小结o 化学原料药的含量测定化学原料药的含量测定容量分析法；容量分析法；o 制剂的含量测定制剂的含量测定色谱分析法；色谱分析法；o 制剂的定量检查制剂的定量检查(溶出度、含量均匀度的检溶出度、含量均匀度的检查查

33、)光谱分析法；光谱分析法；57第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法概述概述分析前要采用一定的方法，分析前要采用一定的方法，使待测药物或待测元使待测药物或待测元素转化为适宜的状态后再进行分析测定。素转化为适宜的状态后再进行分析测定。前处理的目的是前处理的目的是消除干扰，保护仪器消除干扰，保护仪器，提高方法，提高方法的准确度、精密度、选择性和灵敏度。的准确度、精密度、选择性和灵敏度。样品前处理是分析检测的关键环节样品前处理是分析检测的关键环节 。58前处理对象：前处理对象：1. 含金属（含金属（Ca、Fe、Hg、Zn）2. 卤素（卤素（F、Cl、Br、I）、）、N、P、S等等 第

34、二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法591.含卤素有机药物含卤素有机药物1）卤素与脂肪链的碳原子相连，结合不牢固；）卤素与脂肪链的碳原子相连，结合不牢固； CCl3C(CH3)2OH2)卤素与芳环相连，结合牢固。卤素与芳环相连，结合牢固。 样品前处理分类样品前处理分类泛影酸泛影酸第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法60 2.含金属的药物含金属的药物1)有机金属药物有机金属药物：金属原子直接与碳原子以共价键相连，：金属原子直接与碳原子以共价键相连，结合比较牢固，如结合比较牢固，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利 样品前处理分类样品前处理分类OCH

35、2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3NHCONH2AsOOHHOHgOCOCH3第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法61 2.含金属的药物含金属的药物2)含金属的有机药物：含金属的有机药物：金属原子不与碳原子直接相连，金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，溶液中通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，溶液中能直接离解出金属离子。能直接离解出金属离子。 如如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁 样品前处理分类样品前处理分类CCHCCOOOFeOCCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2

36、K+ 3H2O第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法62 根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同处理方法而异。同处理方法而异。不经有机破坏不经有机破坏结合不牢结合不牢固固经有机破坏经有机破坏结合牢固结合牢固前处理方法前处理方法 样品前处理方法样品前处理方法第二节第二节 样品分析的前处理方法样品分析的前处理方法63 1.直接测定法；直接测定法； 2.经水解后测定法；经水解后测定法； 3.经氧化还原后测定法。经氧化还原后测定法。 不对药物分子的有机结构部分进行完全破坏不对药物分子的有机结构部分进行完全破坏通过选用适当溶剂溶解或经简单回流处理，使待

37、通过选用适当溶剂溶解或经简单回流处理，使待测元素电离、离解，转化为无机离子进行测定，测元素电离、离解，转化为无机离子进行测定，适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素药适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素药物的分析。物的分析。一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法641.直接测定法直接测定法适用于金属离子药物溶解后，可直接进行滴定适用于金属离子药物溶解后，可直接进行滴定如：葡萄糖酸钙的含量测定如：葡萄糖酸钙的含量测定一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法65 2.经水解后测定法经水解后测定法（1）碱水解后测定法）碱水解后测定法 适用于卤素原子与脂肪链的碳原子相连

38、，结合适用于卤素原子与脂肪链的碳原子相连，结合不牢固的药物。不牢固的药物。一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法66CCl3C(CH3)2OH 三氯叔丁醇三氯叔丁醇溶于溶于NaOH溶液加热回流使其水解，将有机结合的溶液加热回流使其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为无机的卤素离子，然后卤素，经水解作用转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。选用间接银量法进行测定。CCl3C(CH3)2OH+NaOH(CH3)2CO+NaCl+HCOONaNaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3回流回流一、不经有机破坏的分析方法一、不经

39、有机破坏的分析方法67 2.经水解后测定法经水解后测定法（2）酸水解后测定法）酸水解后测定法 将含金属的有机药物与适当的酸共热，将不溶将含金属的有机药物与适当的酸共热，将不溶性的金属盐类，水解置换为可溶性盐，然后用配位性的金属盐类，水解置换为可溶性盐，然后用配位滴定或剩余酸碱滴定法滴定或剩余酸碱滴定法一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法68 硬脂酸镁硬脂酸镁硬脂酸镁与定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硬脂酸镁与定量硫酸共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的酸以氢氧化钠滴定硫酸镁，剩余的酸以氢氧化钠滴定Mg(C17H35COO)2+H2SO4MgSO4+2C17H35COOHH2SO4

40、+NaOHNa2SO4+H2O回流回流一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法693.氧化还原后测定法氧化还原后测定法 卤素结合于苯环，结合牢固，在碱性卤素结合于苯环，结合牢固，在碱性(或酸性或酸性) 条件下加还原剂锌粉，加热回流。形成无机卤化条件下加还原剂锌粉，加热回流。形成无机卤化物后用测定。物后用测定。如：泛影酸含量测定。如：泛影酸含量测定。一、不经有机破坏的分析方法一、不经有机破坏的分析方法70+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2ONaOH 回流回流 Zn粉粉 加热加热 NaI+AgNO3AgI+NaNO3曙红为吸附指示剂曙红为吸附指示剂黄色黄色玫瑰红色

41、玫瑰红色例：泛影酸的含量测定例：泛影酸的含量测定银量法银量法71含氮、硫、磷有机药物及有机金属药物中待测离子含氮、硫、磷有机药物及有机金属药物中待测离子与碳原子结合牢固，用上述方法难以成为无机的化与碳原子结合牢固，用上述方法难以成为无机的化合物，此时必须采用有机破坏的方法，使之转变为合物，此时必须采用有机破坏的方法，使之转变为无机化合物，方可进行测定。无机化合物，方可进行测定。 二二 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法（一）湿法破坏法（一）湿法破坏法（二）干法破坏法（二）干法破坏法72（一）湿法破坏法（一）湿法破坏法 主要采用强酸进行有机破坏，将有机结合的待测主要采用强酸进行有机破坏，将

42、有机结合的待测元素转变为可测定无机化合物。本法可用于生物制元素转变为可测定无机化合物。本法可用于生物制品中氮、磷或金属元素的测定。品中氮、磷或金属元素的测定。 根据所用试剂试剂不同，可分为：根据所用试剂试剂不同，可分为： 1）硝酸）硝酸高氯酸法高氯酸法 2）硫酸）硫酸硫酸盐法硫酸盐法 3）硝酸）硝酸硫酸法硫酸法 4）其他湿法）其他湿法二二 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法73 例：例：凯氏定氮法凯氏定氮法以以硫酸硫酸-硫酸盐法硫酸盐法为基础的为基础的含氮有机药物定量分含氮有机药物定量分析方法。析方法。 适用于含氮有机药物的前处理。适用于含氮有机药物的前处理。二二 经有机破坏的分析方法经

43、有机破坏的分析方法741.原理：原理：供试品供试品NH4HSO4+(NH4)2SO42NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3 +H2OH2SO4吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凯氏定氮法凯氏定氮法75（1）消解（凯氏烧瓶中进行）消解（凯氏烧瓶中进行）操作操作将将样品、样品、H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凯放入凯氏烧瓶中一起加热，使被测有机物含氮化合物中的氏烧瓶中一起加热，使被测有机物含氮化合物中的N全部转化为铵盐的形式全部转化为铵盐的形式 (NH4)2SO4、NH4HSO42.测定法测定法分为分为3个步骤个步

44、骤消解、蒸馏吸收、滴定消解、蒸馏吸收、滴定凯氏定氮法凯氏定氮法76消解中各试剂作用消解中各试剂作用H2SO4氧化剂和炭化剂，生成氧化剂和炭化剂，生成SO2和和H2OK2SO4提高提高H2SO4沸点缩短消解时间沸点缩短消解时间CuSO4催化剂，使消解速度加快催化剂，使消解速度加快消解产物消解产物(NH4)2SO4、NH4HSO4分解完全的依据是分解液应为无色或绿色分解完全的依据是分解液应为无色或绿色凯氏定氮法凯氏定氮法77（2）蒸馏与吸收）蒸馏与吸收蒸馏：消解液加入蒸馏：消解液加入40%的的NaOH溶液后蒸馏溶液后蒸馏2NaOH+(NH4)2SO4Na2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+

45、NaOHNaHSO4+NH3 +H2O吸收：吸收：2%硼酸溶液吸收液硼酸溶液吸收液凯氏定氮法凯氏定氮法78（3）滴定）滴定直接滴定法直接滴定法滴定液：滴定液：H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 每每1ml的的0.05mol/L H2SO4=1.401mg的氮的氮指示剂：甲基红指示剂：甲基红溴甲酚绿混合指示剂溴甲酚绿混合指示剂 终点颜色：终点颜色：蓝绿色蓝绿色灰紫色灰紫色NH3+H3BO3NH3H3BO3(NH4)2SO4+2H3BO3NH3H3BO3+H2SO4传递作用传递作用凯氏定氮法凯氏定氮法79（3）滴定）滴定剩余滴定法剩余滴定法吸收液吸收液 将蒸馏出来的将蒸馏出来的NH3用

46、定量、过量的标准盐酸或用定量、过量的标准盐酸或硫酸吸收，过量的酸用标准碱溶液滴定。硫酸吸收，过量的酸用标准碱溶液滴定。 凯氏定氮法凯氏定氮法8081 凯氏定氮法可分为：凯氏定氮法可分为： 第一法（常量法）第一法（常量法）含氮量含氮量2530mg H2SO4滴定液（滴定液（0.05mol/L） 第二法（半微量法）第二法（半微量法）含氮量含氮量1.02.0mg H2SO4滴定液（滴定液（0.005mol/L）凯氏定氮法凯氏定氮法82（二）干法破坏（二）干法破坏 适用于含卤素、硫、磷等有机物的前处理，亦适用于含卤素、硫、磷等有机物的前处理，亦可用于含硒、砷盐药物的测定。可用于含硒、砷盐药物的测定。1

47、、高温炽灼法、高温炽灼法2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法三三 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法831、高温炽灼法、高温炽灼法主要用于含卤素药物的鉴别。主要用于含卤素药物的鉴别。本法将有机药物经高温本法将有机药物经高温灼烧灰化灼烧灰化，使有机结构分，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性的无机盐。解而待测元素转化为无机元素或可溶性的无机盐。将适量样品置坩埚中，常加入无水将适量样品置坩埚中，常加入无水Na2CO3、Mg(NO3)2、Ca(OH)2、ZnO等辅助灰化等辅助灰化，混合均，混合均匀后，先小火加热，使样品完全匀后，先小火加热，使样品完全炭化炭化，然后放入，然后放入高温炉中灼烧，使

48、其灰化完全。高温炉中灼烧，使其灰化完全。（二）干法破坏（二）干法破坏84 （1）原理）原理 将将有机药物有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧，放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的待测物质吸收在适当并将燃烧所产生的待测物质吸收在适当吸收液吸收液中，中，然后根据待测物质的性质，采用适当分析方法进行然后根据待测物质的性质，采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。鉴别、检查或含量测定。 适用于含适用于含卤素及硫、磷、硒等药物卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查的鉴别、检查和含量测定。和含量测定。2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法85（2 2）仪器装置）仪器装置86容量大小随样品量而定，一般容

49、量大小随样品量而定，一般500ml、1000ml。取样量通常为取样量通常为1020 mg，使用，使用500 ml燃烧瓶。燃烧瓶。含氟药物用石英或聚氯乙烯制成的燃烧瓶。含氟药物用石英或聚氯乙烯制成的燃烧瓶。硬质玻璃碘瓶硬质玻璃碘瓶 2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法87铂丝铂丝瓶塞底部熔封一根铂丝，铂丝下端做成螺旋状，瓶塞底部熔封一根铂丝，铂丝下端做成螺旋状，长度约为瓶身的长度约为瓶身的2/3；铂丝作用铂丝作用 a.固定样品固定样品 b.催化作用催化作用使样品分解完全使样品分解完全2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法88无灰滤纸无灰滤纸样品研细后放中间，样品研细后放中间，按照虚线折叠固定于铂丝按照虚线折叠固定于铂

50、丝下端螺旋处。下端螺旋处。2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法89 称样用材料及称样称样用材料及称样 A. 固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法90（4）操作）操作取样取样1020mg，放入滤纸包好，放入滤纸包好样品样品燃烧产物燃烧产物吸收液吸收液适宜法测定适宜法测定吸收于吸收于燃烧燃烧O2/Pt加吸收液、通氧加吸收液、通氧燃烧燃烧吸收吸收测定测定2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法91 （5）注意

51、事项）注意事项 氧气要充分氧气要充分使样品燃烧完全，燃烧完全时没有黑色炭化物。使样品燃烧完全，燃烧完全时没有黑色炭化物。样品燃烧时，温度很高，燃烧瓶内压力很大，有爆样品燃烧时，温度很高，燃烧瓶内压力很大，有爆炸的可能性，必须采取防护措施。炸的可能性，必须采取防护措施。防爆防爆2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法92 吸收液吸收液定量吸收待测元素各种价态并转化为单一定量吸收待测元素各种价态并转化为单一价态。价态。 根据被测物种类及分析方法选择根据被测物种类及分析方法选择: H2O、H2O-NaOH、H2O-NaOH-H2O2吸收完全吸收完全:一般振摇一般振摇30min，燃烧瓶看不到烟雾。，燃烧瓶看不到烟雾

52、。吸收液选择吸收液选择Cl-、F- 白色烟雾白色烟雾Br- 棕色、棕色、I- 紫色紫色2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法93含卤素药物的燃烧产物含卤素药物的燃烧产物氟化物、氯化物氟化物、氯化物R-XX-+CO2+H2OO2/Pt 氟或氯以离子状态存在，可选氟或氯以离子状态存在，可选用水或水用水或水-氢氧化钠氢氧化钠吸收后可直接测定。吸收后可直接测定。2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法94R-BrR-BrBrBr2 2+Br+Br- -+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 量少量少含卤素药物的燃烧产物含卤素药物的燃烧产物溴化物溴化物 燃烧后以溴化氢和单质溴的混合物存在，可在水燃

53、烧后以溴化氢和单质溴的混合物存在，可在水-氢氧化钠吸收液中加氢氧化钠吸收液中加SO2饱和溶液还原饱和溶液还原Br2Br- 2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法95含卤素药物的燃烧产物含卤素药物的燃烧产物 碘化物碘化物R-IR-II I2 2+I+I- -+IO+IO3 3- -+IO+IO_ _+CO+CO2 2+H+H2 2O OO O2 2/Pt/Pt量大量大 微量微量 量少量少银量法银量法 I-+Ag+ AgI 水水-氢氧化钠氢氧化钠-SO2饱和溶液饱和溶液碘量法碘量法 I2+2S2O32- S4O62-+2I-水水-氢氧化钠溶液吸收，用氢氧化钠溶液吸收，用溴溴-醋酸醋酸溶液氧化为溶液氧化为IO3

54、- 再用再用KI还原为还原为I22、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法96含硫药物的燃烧产物含硫药物的燃烧产物R-SSO3+H2O+CO2O2/PtSO3+H2O2+H2O SO42-SO42-+BaCl2 BaSO42、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法97含磷药物的燃烧产物含磷药物的燃烧产物R-PP2O5+H2O+CO2O2/PtP2O5+HNO3+H2O H3PO4采用磷钼蓝比色法测定含量采用磷钼蓝比色法测定含量磷酸磷酸+钼酸铵钼酸铵 磷钼酸磷钼酸 磷钼蓝磷钼蓝 还原剂还原剂2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法98含硒药物的燃烧产物含硒药物的燃烧产物R-SeSeO2+SeO3+H2O+CO2O2/PtSeO2+SeO3+

55、HNO3 H2SeO4 与与二氨基萘二氨基萘反应生成反应生成绿色荧光物质绿色荧光物质 比色法测定含量比色法测定含量2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法99实例实例碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定原理：原理：有机碘化物，用氧瓶燃烧分解为碘化物，再有机碘化物，用氧瓶燃烧分解为碘化物，再 被氧化为游离碘后被吸收液吸收被氧化为游离碘后被吸收液吸收2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法100燃烧燃烧吸收吸收（NaOH+H2O）R-II2+NaI+NaIO3+CO2+H2O+NaClO加入溴加入溴醋酸氧化醋酸氧化剂剂将将I-、I2氧化为氧化为IO3-2NaI+Br2=2NaBr+I2I2+5Br2+6H2O=2HIO3+10H

56、Br2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法101加入甲酸除去过量的溴加入甲酸除去过量的溴Br2+HCOOH2HBr+CO2加加KI还原还原KI+IO3-3I2+H2O滴滴定定I2+2Na2S2O32HNaI+Na2S4O6至淀粉指示剂蓝色消失至淀粉指示剂蓝色消失2、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法102第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证分析方法验证目的：证明采用的分析方法准确、分析方法验证目的：证明采用的分析方法准确、可靠。（能反应真实测定结果）可靠。（能反应真实测定结果） 分析方法验证应用对象分析方法验证应用对象1.研究新药制定质量标准需对分析方法进行验证；研究新药制定质量标准需对分析

57、方法进行验证；2.药物生产工艺变更、制剂组分变更、原分析方法药物生产工艺变更、制剂组分变更、原分析方法修订时需对质量分析方法进行验证；修订时需对质量分析方法进行验证；3.发表研究论文对建立的分析方法进行验证。发表研究论文对建立的分析方法进行验证。103需验证的项目需验证的项目验证的内容验证的内容准确度准确度 定量限定量限防腐剂防腐剂溶出度溶出度,释放度释放度鉴别试验鉴别试验杂质检查杂质检查含量测定含量测定精密度精密度 专属性专属性 检测限检测限 线性线性 范围范围 耐用性耐用性重复性重复性中间精密度中间精密度重现性重现性 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证104一、

58、准确度（一、准确度（accuracy） 测量值与真实值接近的程度测量值与真实值接近的程度 表表 示示: 回收率回收率 测定方法：回收试验测定方法：回收试验 加样回收试验加样回收试验105（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1、原料药、原料药 回收试验：回收试验： 空白空白+已知量已知量A的对照品（或标准品）测定，的对照品（或标准品）测定，测定值为测定值为M100%MRA一、准确度（一、准确度（accuracy）106加样回收试验：加样回收试验：已准确测定药物含量已准确测定药物含量P的真实样品的真实样品+已知量已知量A的的对照品（或标准品）测定，测定值为对照品（或标准品）测定，

59、测定值为M。100%MPRA（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1、原料药、原料药一、准确度（一、准确度（accuracy）107 原料药原料药 （1）可用已知纯度的对照品或样品进行测定）可用已知纯度的对照品或样品进行测定（2）用本法所得结果与已建立准确度的另一方法）用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。测定的结果进行比较。 %100%加入量测得量回收率一、准确度（一、准确度（accuracy）108 制剂空白辅料加入已知含量的对照品，加入量制剂空白辅料加入已知含量的对照品，加入量为已知制剂浓度的为已知制剂浓度的80%、100%、120%；每一；每一浓度测

60、浓度测3份份 n=9 2、 制剂制剂（1）模拟处方法）模拟处方法: 即采用在空白辅料中加入原料药即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。对照品的方法。%100%加入量测得量回收率一、准确度（一、准确度（accuracy）109%100%加入量本底量测得量回收率（2）标准添加法）标准添加法: 如不能得到制剂的全部组分，如不能得到制剂的全部组分，可向已知含量制剂定量中加入被测物对照品进行可向已知含量制剂定量中加入被测物对照品进行测定。测定。 加入已知纯度对照品量为已知含量制剂浓度的加入已知纯度对照品量为已知含量制剂浓度的80%、100%、120%，每一浓度测，每一浓度测3份份 n=9一、准确度（