DNA与亲子鉴定

1、一、亲子鉴定的定义一、亲子鉴定的定义 亲子鉴定就是利用医学、生物学和遗传学的理论和技术，子代和亲代的形态构造或生理机能方面的相似特点，分析遗传特征，判断父母与子女之间是否是亲生关系。 原始亲子鉴定外貌对比法滴血认亲法滴血验亲法现代亲子鉴定血型测定染色体多态染色体多态性鉴定性鉴定DNA鉴定DNA指纹法PCR-SNP法PCR-STRPCR-STR法法二、原始的亲子鉴定方法二、原始的亲子鉴定方法外貌对比法外貌对比法 由于由于遗传遗传的原因，父子、母子、的原因，父子、母子、兄弟姐妹之间总会有些相似之处，兄弟姐妹之间总会有些相似之处，通过外貌来确定亲子关系也许是通过外貌来确定亲子关系也许是最原始的方法，

2、但这只能作为一最原始的方法，但这只能作为一种参考和猜测，不具权威性种参考和猜测，不具权威性滴血认亲法滴血认亲法 大约出现在明代，是指双方活人时，两人刺出的血滴在器皿内，看是否凝为一体，如凝为一体就说明存在亲子兄弟关系二、原始的亲子鉴定方法二、原始的亲子鉴定方法滴骨验亲法滴骨验亲法 早在三国时期就有实例记载，就是将生者的血液滴在死人的骨骸上，若血液能渗透入骨则断定生者与死者有血源关系，否则就没有。三、现代的亲子鉴定方法三、现代的亲子鉴定方法（1 1）血型测试）血型测试 血型测试进行亲子鉴定就是通过对血型的检验比对来确定亲子关系。依据孟德尔遗传定律，人类的血型是按照遗传基因传给下一代，故一定血型的

3、父母所生子女也具有相应的血型。 三、现代的亲子鉴定方法三、现代的亲子鉴定方法（2）、）、染色体多态性鉴定染色体多态性鉴定 这种多态是可以遗传的。这项技术就是利用其形态来鉴定亲子关系，这要靠技术人员的主观判断，其准确率也不尽如人意现代的亲子鉴定方法现代的亲子鉴定方法三、现代的亲子鉴定方法三、现代的亲子鉴定方法 （3 3）DNADNA鉴定鉴定 鉴定亲子关系目前用得最多的是DNA分型鉴定,这也是最可靠的亲子鉴定方法 人的血液、毛发、唾液、口腔细胞及骨头等细胞里的DNA都可以用于亲子鉴定，十分方便。 常用方法有DNA指纹法、SNP-PCR法、PCR-PCR-STRSTR法法等。1.DNA1.DNA指纹

4、法指纹法 DNA指纹法的技术原理，将生物检材中细胞核的DNA分离出来，用特定的限制性内切酶消化，后经电泳分离，Southern印迹转移，再用已知序列DNA探针根据碱基互补原则进行杂交，用放射自显影等技术显示出一系列不等距离，相互间隔的多条电泳谱带组成的图谱，因各人不同（同卵双生除外），比对结果类似指纹。 2. . PCR-SNP法 指在两条同源染色体上，同源DNA序列长度相等，但个别核苷酸不同而产生的个体差异，也称单核苷酸多态性（SNP）。 人类基因组中存在着广泛的多态性，最简单的多态形式是发生在基因组中的单个核苷酸的替代，即单核苷酸SNP通常是一种二等位基因的，而且遗传变异SNP的数量大、分

5、布广，在组成人类基因组的30亿个碱基中，平均每1000个就有一个SNP。3.PCR-STR3.PCR-STR法法 STR是短串联重复序列。广泛存在于真核生物基因组中的DNA串联重复序列，它由2-6 bp的核心序列组成，通常重复15-60 次，片段大小一般为100-300 bp。主要由于核心序列的重复次数不同而具有高度多态性，是个体的特征，遵循孟德尔共显性遗传规律传递,绝大多数不受选择压力的影响，且较均匀地分布人类全基因组。TCCCAAGCTCTTCCTCTTCCCTAGATCAATACAGACAGAAGACAGGTGGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGAT

6、AGATAGATATCATTGAAAGACAAAACAGAGATGGATGATAGATACATGCTTACAGATGCACAC 靶区域靶区域(short tandem repeat)7 repeats8 repeats9 repeats10 repeats11 repeats12 repeats13 repeats核心串联重复次数存在个体差异性核心串联重复次数存在个体差异性等位基因等位基因核心序列核心序列7GATA78GATA89GATA910GATA1011GATA1112GATA1213GATA132. PCR-STR2. PCR-STR法的法的理论基础理论基础 人类基因组是一个结构十分稳

7、定的体系，同时又是一个变异的体系。在长期的进化过程中，基因组DNA的序列不断发生变异。这些变异有些被保存下来，导致了不同种族、群体和个体间基因组的差异和多态性。 除同卵双生子外，没有两个个体基因组是完全相同的。尽管遗传多态性的存在，但每一个人的染色体必然也只能来自其父母，这就是DNA亲子鉴定的理论基础 PCR-STRPCR-STR法的法的原理原理1、不同个体中，STR核心序列的重复次数不同。根据子代的两条DNA一条来自于父方一条来自于母方，其子代某一特定DNA分子上STR核心序列重复次数必定与父母相同。2、根据STR两端序列的保守性，设计一对特异引物，利用PCR技术，扩增每个位点的STR，以检

8、测、分析STR序列多态性；并确定基因排布序列及表型，最终达到成功鉴定的目的。 5 .5 . PCR-STRPCR-STR法法 方法方法步骤步骤样本的选择样本的选择 DNA检测样本很多。一般来说，人体的任何组织或分泌物都可以做。 DNA样品收集主要采用抽少量静脉血或者末梢血或者收集口腔上皮细胞。此外，也可以进行头发、组织、血迹、胎儿的绒毛等特殊样本的DNA鉴定。方法一：DNA测序法 步骤：材料处理 经过处理破坏细胞膜以释放细胞内容物将细胞中的DNA释放到提取缓冲液中（尽量确保DNA的完整性）分离纯化 （去除杂质包括大量的RNA、蛋白质、多糖和色素等）SSRSSR（Simple Sequence

9、RepeatSimple Sequence Repeat） 引物引物设计设计PCR扩增通过基因分析仪进行分析, 并通过软件读取结果PRC扩增比对示意图6 . . PCR-STR 法结果分析法结果分析 电泳分离片段后，通过放射自显影技术检测单链DNA片段的放射性带，就可以直接读出DNA的核苷酸序列。 如果小孩的遗传位点和被测试男子的位点超过3个不一致，那么该男子便100被排除血缘关系之外，即他绝对不可能是孩子的父亲。如果孩子与其父母亲的位点都吻合，我们就能得出亲权关系大于9999的可能性，即证明他们之间的血缘亲子关系。 若有若有12个位点不同，要考虑是否发生了基因突变，个位点不同，要考虑是否发生

10、了基因突变，这是要对多个这是要对多个STR序列位点进行鉴定。序列位点进行鉴定。方法二：Southern杂交法步骤： 样本的选择 DNA的提取 PCR扩增 琼脂糖凝胶电泳 转膜进行Southern杂交（探针设计）洗膜晾干包（用保鲜膜）压X光片（-20度-70度保存3到7天）冲洗观察杂交图谱（全自动条带分析系统） 注：探针设计将微卫星DNA核心序列（CA)n串联起来，PCR扩增（加入P32标记的dNTP) 电泳挖胶回收试剂盒回收DNA片段导入载体形成重组DNA分子导入大肠杆菌选择白斑一部分培养保存，一部分提取质粒DNA测序作为探针结果分析 若获得的个体的杂交图谱与亲代相同则证明他（她）们是亲子关系

11、，否则不是 国际上关于亲子鉴定和国际上关于亲子鉴定和DNA身份识别的两个最著名实例均与美国前总统身份识别的两个最著名实例均与美国前总统克林顿有关克林顿有关A 当矢口否认有任何不轨行为的总统被要求抽取血样以核对莱温斯基裙子当矢口否认有任何不轨行为的总统被要求抽取血样以核对莱温斯基裙子上的污渍来源时，他只得承认错误以避免陷入更尴尬的境地；上的污渍来源时，他只得承认错误以避免陷入更尴尬的境地；B 后来黑人妇女威廉斯声称其后来黑人妇女威廉斯声称其13岁独生子丹尼的父亲是克林顿时，克林岁独生子丹尼的父亲是克林顿时，克林顿毫不犹豫地抽血化验，最后经顿毫不犹豫地抽血化验，最后经DNA检测证明威廉斯所生的黑白

12、混血儿并非检测证明威廉斯所生的黑白混血儿并非克林顿的私生子，由此足见这一技术的可靠克林顿的私生子，由此足见这一技术的可靠 8 . PCR-STR 8 . PCR-STR 法应用前景法应用前景 由于由于DNADNA亲子鉴定技术具有检测迅速准确，安全可靠等亲子鉴定技术具有检测迅速准确，安全可靠等优点，现已广泛应用于许多方面。不仅包括亲子鉴定，还优点，现已广泛应用于许多方面。不仅包括亲子鉴定，还用于文物鉴别等方面用于文物鉴别等方面。 作为最前沿的生物技术，作为最前沿的生物技术，DNADNA分析将为法医物证检验分析将为法医物证检验提供科学、可靠和快捷的手段，使物证鉴定从个体排除过提供科学、可靠和快捷的手段，使物证鉴定从个体排除过渡到可以