第七章 化学物质与酶的相互作用

1、第七章第七章化学物质与酶的相互作用化学物质与酶的相互作用Interaction between chemicals and enzymes 化学物质对酶的抑制作用化学物质对酶的抑制作用Inhibition of enzymes by chemicals化学物质对酶的激活作用化学物质对酶的激活作用Activation of enzymes by chemicals酶对化学物质的催化作用酶对化学物质的催化作用Enzymatic catalysis of chemical substances熟练掌握抑制作用的类型，动力学特性以及抑制剂研究的意义；掌握酶激活作用的类型、动力学特性；掌握酶对化学物质的

2、催化作用；掌握酶制剂的类型、催化反应的介质以及酶催化的有机合成反应类型。 自然界中发现的酶已达自然界中发现的酶已达30003000多种，而且这个数目随着基因多种，而且这个数目随着基因工程和蛋白质工程方面研究的发展而大大增加。工程和蛋白质工程方面研究的发展而大大增加。 酶可以直接作为药物用于医药工业，如溶菌酶可治疗各类酶可以直接作为药物用于医药工业，如溶菌酶可治疗各类炎症（咽喉炎、口腔溃疡、慢性鼻炎、带状疤疹及各种刀炎症（咽喉炎、口腔溃疡、慢性鼻炎、带状疤疹及各种刀伤引起的发炎等），天冬酞胺酶治疗癌症，治疗血栓的尿伤引起的发炎等），天冬酞胺酶治疗癌症，治疗血栓的尿激酶等。激酶等。 酶也广泛应用于

3、食品工业、化学工业、医药工业、环保工酶也广泛应用于食品工业、化学工业、医药工业、环保工业等，在临床检验、生物分析等领域也广泛使用。业等，在临床检验、生物分析等领域也广泛使用。 化学物质化学物质（无机物质、有机物质和高分子物质）（无机物质、有机物质和高分子物质）与酶的相互作用包括化学物质对酶的抑制作用、与酶的相互作用包括化学物质对酶的抑制作用、激活作用激活作用 酶酶对化学物质的催化作用对化学物质的催化作用化学物质对酶的抑制作用化学物质对酶的抑制作用化学物质对酶的抑制作用化学物质对酶的抑制作用p 酶的抑制作用：酶的抑制作用：凡能降低酶促反应速度的作用。凡能降低酶促反应速度的作用。 通过酶抑制作用的

4、研究，不仅对了解酶的专通过酶抑制作用的研究，不仅对了解酶的专性，酶活性部位的性，酶活性部位的物理和化学结构，酶的动力学性质以及酶的作用机制等；物理和化学结构，酶的动力学性质以及酶的作用机制等； 对了解药物和毒物作用于机体的方式及机理等也有重要意义；对了解药物和毒物作用于机体的方式及机理等也有重要意义； 对代谢途径中酶的调节也能提供信息。对代谢途径中酶的调节也能提供信息。p 酶的抑制剂（酶的抑制剂（inhibitor）：）：能使酶活性受抑制的物质。能使酶活性受抑制的物质。 抑制剂能抑制酶促反应，主要是抑制剂能使酶的必需基因或活性抑制剂能抑制酶促反应，主要是抑制剂能使酶的必需基因或活性部位的性质和

5、结构发生改变，从而导致酶活性降低或丧失。部位的性质和结构发生改变，从而导致酶活性降低或丧失。 按抑制剂作用的方式不同，酶的抑制作用两按抑制剂作用的方式不同，酶的抑制作用两种类型种类型 类型类型：不可逆抑制剂不可逆抑制剂 可逆抑制剂可逆抑制剂 应用应用：研制杀虫剂、药物：研制杀虫剂、药物 研究酶的作用机理，确定代谢途径研究酶的作用机理，确定代谢途径 为了评价化合物对酶的抑制活性，用半数有效浓度为了评价化合物对酶的抑制活性，用半数有效浓度IC50。 测定测定IC50方法：将底物与酶的浓度保持恒定，改变方法：将底物与酶的浓度保持恒定，改变抑制剂的浓度，求出使酶活性降低抑制剂的浓度，求出使酶活性降低5

6、0%所需的抑制所需的抑制剂浓度。剂浓度。一、可逆抑制作用一、可逆抑制作用 按可逆抑制剂对酶按可逆抑制剂对酶底结合的影响不同，可分为许底结合的影响不同，可分为许多类型，它们的反应历程可用一通式表示多类型，它们的反应历程可用一通式表示： E + S KsESkpE + P+ +IIEIEISSKiKiKs速度方程通式速度方程通式 根据此反应历程根据此反应历程, ,根据快速平衡学说或恒态学说推导，根据快速平衡学说或恒态学说推导，得到其总速度方程通式如下得到其总速度方程通式如下在不同的抑制作用中，仅在于在不同的抑制作用中，仅在于EI的解离常数的解离常数Ki和和EIS的解离常的解离常数数Ki两个数值的不

7、同两个数值的不同，一般可分为，一般可分为4种类型：竞争性抑制、非种类型：竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合性抑制作用。竞争性抑制、反竞争性抑制和混合性抑制作用。 max (1) (1)VSvIIKsSKiKimax (1) (1)VSvIIKmSKiKi将该方程作双倒数处理，可得将该方程作双倒数处理，可得1 11 (1)(1)max maxkmIIvVKiSVKi 竞争性抑制作用竞争性抑制作用可逆抑制作用可逆抑制作用 非竞争性抑制作用非竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用反竞争性抑制作用 混合性抑制作用混合性抑制作用1、竞争性抑制作用、竞争性抑制作用 竞争性抑制作用（竞争性抑制作用（Co

8、mpetitive inhibition ）中）中I只与自只与自由酶结合，因而阻止由酶结合，因而阻止S与酶结合。而与酶结合。而S又不能与又不能与EI结合，结合，I也不能与也不能与ES结合，所以结合，所以EIS不存在；不存在；EI亦不能分解成亦不能分解成产物。反应历程：产物。反应历程：竞争性抑制作用的特点竞争性抑制作用的特点 个 竞 争 性 抑 制 剂 只 增 加 酶个 竞 争 性 抑 制 剂 只 增 加 酶 底 结 合 的底 结 合 的 表 观 米 氏 常 数表 观 米 氏 常 数Km(Kmapp)，即抑制剂，即抑制剂I浓度增加，浓度增加，Kmapp就增加；而就增加；而Vmax则则保持不变。在

9、竞争性抑制剂存在下保持不变。在竞争性抑制剂存在下, 要达到最大反应速度要达到最大反应速度Vmax，必须加入更高的底物浓度。如必须加入更高的底物浓度。如S100Km时，时，Vmaxi可达可达Vmax。 竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度，决定于竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度，决定于I，S，Km和和Ki的大小的大小。 I一定，增加一定，增加S, 减少抑制程度；减少抑制程度；S一定，增加一定，增加I，增加抑制程，增加抑制程度，度，Ki值较低时，任何给定值较低时，任何给定I和和S，抑制程度都较大；，抑制程度都较大；Km值越值越低，在一定低，在一定S、I下，抑制程度越小。下，抑制程度越小。竞争性抑制作用

10、的双倒数图竞争性抑制作用的双倒数图11 1(1)max maxKmIvVSKiV在不同的固定在不同的固定I下，改变下，改变S并测定相应并测定相应S下下，如图所示，如图所示图中：有竞争性抑制剂存图中：有竞争性抑制剂存在，不管在，不管I如何，其双倒如何，其双倒数图的纵截距不变，仍为数图的纵截距不变，仍为1/Vmax ,而横截距则随而横截距则随I的的增加其负值增加，如增加其负值增加，如I 达饱达饱和浓度，则可使初始速度降和浓度，则可使初始速度降为零，为零，Vmax unchanged, Km increases 竞争性抑制作用竞争性抑制作用Ki的求解的求解 从双倒数图计算出表观米氏常数从双倒数图计算

11、出表观米氏常数Kmapp，然后代入，然后代入Kmapp=Km(1+I/Ki)可计算出可计算出Ki。 从双倒数图求得各从双倒数图求得各I浓度下的浓度下的Kmapp值对相应值对相应I再作再作图，从再制图的纵截距可直接测得图，从再制图的纵截距可直接测得Km，从其横截距可，从其横截距可直接测得直接测得Ki。 从不同固定从不同固定I下所作一簇直线的斜率下所作一簇直线的斜率1/S对相应对相应I再再制图，其纵截距为制图，其纵截距为Km/Vmax, 斜率为斜率为Km/VmaxKi，横截，横截距即为距即为-Ki。 Dixon作图法求作图法求Ki Dixon作图法求作图法求Ki 11 (1)max max KmK

12、mIvVKi SVS将竞争性抑制剂存在下的双倒数重排成将竞争性抑制剂存在下的双倒数重排成1/v随随I而变化的方程而变化的方程竞争性抑制剂的竞争性抑制剂的IC50值值 取决于实验所用的酶和底物浓度，当酶的浓度固定取决于实验所用的酶和底物浓度，当酶的浓度固定时，时，IC50值与值与Ki、Km和底物浓度和底物浓度S呈如下关系：呈如下关系： 根据该方程式，当底物浓度大于根据该方程式，当底物浓度大于Km值时，值时，IC50值值高于高于Ki值，尤其当底物浓度较高时，值，尤其当底物浓度较高时，Ki值偏低更加值偏低更加明显。明显。 50 (1)SICKiKm竞争性抑制剂的结构特征竞争性抑制剂的结构特征 底物类

13、似物底物类似物 过渡态类似物过渡态类似物 其他化合物其他化合物 利用酶底物类似物作为竞争性抑制研究一利用酶底物类似物作为竞争性抑制研究一些三维结构不清楚的酶活性中心结构；些三维结构不清楚的酶活性中心结构； 根据底物结构设计临床药物。根据底物结构设计临床药物。底物类似物底物类似物 -葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖、伏格列波糖（voglibose）和米格列醇（）和米格列醇（Miglitol）的结构与酶的低聚糖）的结构与酶的低聚糖类底物和葡萄糖糖苷类相似。类底物和葡萄糖糖苷类相似。 可与活性部位发生竞争性结合，抑制肠道内双糖分解，从可与活性部位发生竞

14、争性结合，抑制肠道内双糖分解，从而降低餐后的高血糖。而降低餐后的高血糖。 黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶可催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤，进而可催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤，进而被氧化成尿酸，黄嘌呤氧化酶抑制剂被氧化成尿酸，黄嘌呤氧化酶抑制剂 别嘌呤醇治疗痛风病就是通过抑制黄嘌呤氧化酶，别嘌呤醇治疗痛风病就是通过抑制黄嘌呤氧化酶，降低尿酸的生物合成。降低尿酸的生物合成。 返回返回过渡态类似物过渡态类似物 酶催化化学反应效率高的原因在于酶能与高能态的过酶催化化学反应效率高的原因在于酶能与高能态的过渡态相结合，从而大大降低了化学反应的活化能。渡态相结合，从而大大降低了化学反应的活化能。 如果对催化某一特定生物化学

15、反应的酶的三维结构尚如果对催化某一特定生物化学反应的酶的三维结构尚不清楚，可以根据其生化反应的过程，设计合成具有不清楚，可以根据其生化反应的过程，设计合成具有特定结构、疏水性匹配、电子和空间因素与过渡态类特定结构、疏水性匹配、电子和空间因素与过渡态类似的稳定化合物，作为该酶特异的抑制剂，这无疑为似的稳定化合物，作为该酶特异的抑制剂，这无疑为药物合理分子设计提供了另一强有力的手段。药物合理分子设计提供了另一强有力的手段。R3OCONR2R1氨基甲酸酯的基本结构NNCH3OCONCH3H毒扁豆碱OCONCH3CH3N+H3CH3CH3C新斯的明 AChE的羟基与酯酶的酯解部位形成共价键，其四价氮上

16、的强的羟基与酯酶的酯解部位形成共价键，其四价氮上的强正电荷与酯酶的阴离子部位呈静电联接。酶的乙酰化很快导致正电荷与酯酶的阴离子部位呈静电联接。酶的乙酰化很快导致酯键断裂和胆碱的消除，乙酰化酶随即与水反应而使酶再生并酯键断裂和胆碱的消除，乙酰化酶随即与水反应而使酶再生并放出乙酸。放出乙酸。 氨基甲酸酯杀虫剂是乙酰胆碱酯酶水解过渡态的稳定类似物，氨基甲酸酯杀虫剂是乙酰胆碱酯酶水解过渡态的稳定类似物，能与乙酰胆碱酯酶结合部位紧密结合而抑制乙酰胆碱酯酶。能与乙酰胆碱酯酶结合部位紧密结合而抑制乙酰胆碱酯酶。乙酰胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶(AChE) 苯甲酰丙氨醛是胰凝乳蛋白酶的过渡态抑制剂；苯甲酰丙氨醛是胰凝

17、乳蛋白酶的过渡态抑制剂； 其结构类似底物苯甲酰苯丙氨酰化合物与酶形成的其结构类似底物苯甲酰苯丙氨酰化合物与酶形成的共价中间物中的底物酰基部分，比底物中的肽键羰共价中间物中的底物酰基部分，比底物中的肽键羰基更易受到酶活性中心羟基的亲核进攻，但不能形基更易受到酶活性中心羟基的亲核进攻，但不能形成酰化酶共价中间物。成酰化酶共价中间物。返回返回其它化合物其它化合物 有些化合物的平面结构与底物并不相似，但立有些化合物的平面结构与底物并不相似，但立体构象十分相近，也可以成为竞争性抑制剂。体构象十分相近，也可以成为竞争性抑制剂。非甾体抗炎药非甾体抗炎药 非甾体抗炎药是一类具有不同结非甾体抗炎药是一类具有不同

18、结构类型的化合物，由于选择性地构类型的化合物，由于选择性地抑制环氧合酶的活性，用作抗炎抑制环氧合酶的活性，用作抗炎止痛药。止痛药。 环氧合酶抑制剂消炎痛和底物花环氧合酶抑制剂消炎痛和底物花生四烯酸的三维结构，整个分子生四烯酸的三维结构，整个分子的立体构象中，羧基和双键的配的立体构象中，羧基和双键的配置有某种相似性，因而竞争性地置有某种相似性，因而竞争性地与环氧合酶结合。与环氧合酶结合。 作为环氧合酶（作为环氧合酶（COX2，炎症细胞产生的酶）的特异，炎症细胞产生的酶）的特异性抑制剂，难以进入开口较小的性抑制剂，难以进入开口较小的COX1活性中心的通活性中心的通道，故而不能对其产生抑制作用，但仍

19、能进入口径稍道，故而不能对其产生抑制作用，但仍能进入口径稍大，后段略有柔性的大，后段略有柔性的COX2通道，而能对通道，而能对COX2产生产生抑制作用。抑制作用。塞来克西塞来克西(Celebrex) 某些竞争性抑制剂的化学结构与底物的结构没有任何关系，其某些竞争性抑制剂的化学结构与底物的结构没有任何关系，其抑制作用的原理是抑制剂与一些酶活性中心的金属离子络合，抑制作用的原理是抑制剂与一些酶活性中心的金属离子络合，妨碍了底物的进入，从而起到抑制酶活性的目的。妨碍了底物的进入，从而起到抑制酶活性的目的。 LOX的活性中心含有一个非血红素铁原子，通过的活性中心含有一个非血红素铁原子，通过Fe2+与与

20、Fe3+的循的循环实现其催化功能。该酶的抑制剂（环实现其催化功能。该酶的抑制剂（CGS-23885,A-76745）就是）就是通过铁的螯合而与底物竞争性地与酶活性中心结合。通过铁的螯合而与底物竞争性地与酶活性中心结合。 5-脂氧合酶脂氧合酶(LOX)2、非竞争性抑制作用、非竞争性抑制作用 典型的非竞争性抑制剂典型的非竞争性抑制剂不影响酶不影响酶-底物结合；底物结合； 底物也不影响酶底物也不影响酶-I的结的结合；合；S和和I都可可逆独立都可可逆独立地结合于酶的不同部位地结合于酶的不同部位上；并且上；并且ESI为端点复为端点复合物。合物。 非竞争性抑制作用的双倒数方程非竞争性抑制作用的双倒数方程1

21、 11 (1)(1)max maxKmIIvVKiSVKi非竞争性抑制作用非竞争性抑制作用Ki 的求解的求解 从从I0和和I为某一固定浓度所作为某一固定浓度所作1/ 对对1/S双倒数双倒数图的纵截距可直接测得图的纵截距可直接测得1/Vmax和和(1/Vmax)(1+I/Ki)，从而计算出从而计算出Ki。 从不同固定从不同固定I所作双倒数图的斜率所作双倒数图的斜率1/S对对I再制图可再制图可求得求得Ki。 从不同固定从不同固定I所作双曲数图的纵截距对所作双曲数图的纵截距对I再制图，再制图，从其横截距可直接到得从其横截距可直接到得Ki。 Dixon作图法求作图法求Ki11(1) (1)max ma

22、x KmKmKmIvVKiSVS非竞争性抑制剂的非竞争性抑制剂的IC50值值 非竞争性抑制剂的非竞争性抑制剂的IC50值与底物浓度的关系如下：值与底物浓度的关系如下： 根据该式，当底物浓度较高时，根据该式，当底物浓度较高时，IC50值接近于值接近于Ki值；值；当底物浓度较低时，当底物浓度较低时，IC50值明显低于值明显低于Ki值。值。50(1) KmICKiS非竞争性抑制剂的结构特征非竞争性抑制剂的结构特征 由于非竞争性抑制剂并非结合于酶活性中心的底物结由于非竞争性抑制剂并非结合于酶活性中心的底物结合位点，而是活性中心附近的某些区域或基团，不影合位点，而是活性中心附近的某些区域或基团，不影响酶

23、与底物的亲和力。响酶与底物的亲和力。 而非竞争性抑制剂的作用部位不是十分清楚，所以，而非竞争性抑制剂的作用部位不是十分清楚，所以，不能根据酶的底物及酶活性中心的结构设计非竞争性不能根据酶的底物及酶活性中心的结构设计非竞争性抑制剂。抑制剂。 目前所发现的一些酶的非竞争性抑制剂大多数都是随目前所发现的一些酶的非竞争性抑制剂大多数都是随机筛选得到的化合物。机筛选得到的化合物。 3、反竞争性抑制作用、反竞争性抑制作用 反竞争性抑制剂反竞争性抑制剂I不能与不能与自由酶结合，而只能与自由酶结合，而只能与ES可逆结合生成不能分可逆结合生成不能分解成产物的解成产物的EIS。这一点。这一点与竞争性抑制相反，与竞

24、争性抑制相反，Ki值为值为，EIS只能解离成只能解离成ES + I，而不能解离成，而不能解离成EI + S。 反竞争性抑制程度取决于反竞争性抑制程度取决于I、S、Ki和和Km等。它的等。它的抑制程度随底物浓度的增加而增加。抑制程度随底物浓度的增加而增加。 反竞争性抑制剂使酶的反竞争性抑制剂使酶的Km值降低，即值降低，即KmappKm。 从这点看，反竞争性抑制剂不是一个抑制剂，而像是从这点看，反竞争性抑制剂不是一个抑制剂，而像是一个激活剂。它之所以造成对酶促反应的抑制作用，一个激活剂。它之所以造成对酶促反应的抑制作用，完全是由于它使完全是由于它使Vmax降低而引起。所以如果降低而引起。所以如果S

25、很小，很小，反应主要为一级反应，则抑制剂对反应主要为一级反应，则抑制剂对Vmax的影响几乎完的影响几乎完全被对全被对Km的相反影响所抵消。这时几乎看不到抑制作的相反影响所抵消。这时几乎看不到抑制作用。用。 反竞争性抑制作用的特点反竞争性抑制作用的特点反竞争性抑制作用的双倒数方程反竞争性抑制作用的双倒数方程111 (1)max maxKmIvVSVKi反竞争性抑制剂的结构特征反竞争性抑制剂的结构特征 反竞争性抑制在单底物酶催化反应中比较少见反竞争性抑制在单底物酶催化反应中比较少见 胎盘碱性磷酸酯酶以葡萄糖胎盘碱性磷酸酯酶以葡萄糖-6-6-磷酸或磷酸或 - -萘酚磷酸酯萘酚磷酸酯为底物时，为底物时

26、，L-L-苯丙氨酸为反竞争性抑制剂；苯丙氨酸为反竞争性抑制剂； 顺铂对乙酰胆碱酯酶的抑制作用也是属于反竞争类顺铂对乙酰胆碱酯酶的抑制作用也是属于反竞争类型。型。 在双底物反应中，反竞争性抑制比较多见，如乒乓机在双底物反应中，反竞争性抑制比较多见，如乒乓机制的酶促反应时，因为制的酶促反应时，因为I可以与可以与EB复合物结合，对一复合物结合，对一个底物（个底物（A）表现竞争性抑制的化合物（）表现竞争性抑制的化合物（I）对另一个）对另一个底物（底物（B）呈现反竞争性抑制。）呈现反竞争性抑制。 抗坏血酸对兔肌乳酸脱氢酶的抑制作用，抗坏血酸相抗坏血酸对兔肌乳酸脱氢酶的抑制作用，抗坏血酸相对于对于NADH

27、表现为乳酸脱氢酶的反竞争抑制，相对于表现为乳酸脱氢酶的反竞争抑制，相对于丙酮酸为乳酸脱氢酶的竞争性抑制剂。丙酮酸为乳酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 抗坏血酸抗坏血酸HIV-1 protease 4、混合性抑制作用、混合性抑制作用 混合性抑制作用中混合性抑制作用中S和和E或或EI都能够结合，都能够结合，I也可和也可和E或或ES结合，但亲和力都不相等，表明结合，但亲和力都不相等，表明S和和I对酶的对酶的结合互有影响，结合互有影响， Ki和和Ki两者既不等于无穷大，又两者既不等于无穷大，又互不相等，互不相等，Ksi和和Ks也不相等。有关可逆抑制作用也不相等。有关可逆抑制作用的通式就是混合性抑制作用的公式。

28、的通式就是混合性抑制作用的公式。1 11 (1)(1)max maxkmIIvVKiSVKi 当用双倒数方程作图时，有抑制剂和无抑制剂的直线当用双倒数方程作图时，有抑制剂和无抑制剂的直线既不平行，又不相交于纵轴或横轴，而是相交于横轴既不平行，又不相交于纵轴或横轴，而是相交于横轴负侧的上方（第二象限）或下方（第三象限）负侧的上方（第二象限）或下方（第三象限）双倒数方程作图双倒数方程作图5、四种类型可逆抑制的比较、四种类型可逆抑制的比较 不同类型的可逆抑制作用可以利用双倒数作不同类型的可逆抑制作用可以利用双倒数作图法来区别图法来区别 根据图中有无抑制剂时的直线是否相交于根据图中有无抑制剂时的直线是

29、否相交于1/S轴，还是轴，还是1/V轴就可以区别。轴就可以区别。 表表7-1 四类可逆抑制剂的动力学比较四类可逆抑制剂的动力学比较抑制类型抑制类型速率方程速率方程表观表观Km表观表观 Vmax无抑制无抑制KmVmax竞争性竞争性增大增大不变不变非竞争性非竞争性不变不变减小减小反竞争性反竞争性减小减小减小减小混合性混合性减小或增大减小或增大减小减小max VSvKmSmax (1) VSvIKmSKimax ( )(1)VSvIKmSKimax (1)VSvIKmSKimax (1) (1)VSvIIKmSKiKiVmax decreases, Km increases.二、不可逆抑制作用二、不

30、可逆抑制作用 这类抑制作用的抑制剂与酶分子上的某基团以牢固这类抑制作用的抑制剂与酶分子上的某基团以牢固的共价健结合使酶失活。的共价健结合使酶失活。 不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。活。 不可逆抑制作用的特点是随时间的延长会逐渐地增不可逆抑制作用的特点是随时间的延长会逐渐地增加抑制，最后达到完全抑制加抑制，最后达到完全抑制。 非专一性不可逆抑制作用非专一性不可逆抑制作用不可逆抑制作用不可逆抑制作用 专一性不可逆抑制作用专一性不可逆抑制作用 指向活性部位抑制剂指向活性部位抑制剂不可逆抑制剂不可逆抑制剂 基于机理的不可逆抑制剂基于机理的不可

31、逆抑制剂 抑制剂抑制剂是作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基是作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶的失活。类型有团中包含了必需基团，因而引起酶的失活。类型有1、非专一性不可逆抑制作用、非专一性不可逆抑制作用 这类抑制剂选择性很强，它只能专一性地与酶活性中这类抑制剂选择性很强，它只能专一性地与酶活性中心的某些基团不可逆结合，引起酶的活性丧失。心的某些基团不可逆结合，引起酶的活性丧失。 实例：有机磷杀虫剂实例：有机磷杀虫剂-Ser-OH-Ser-OPO-RO-ROPO-RO-ROX2、专一性不可逆抑制剂、专一性不可逆抑制剂 这类抑制剂呈现其活性是在酶的催化过程实现

32、的。这类抑制剂呈现其活性是在酶的催化过程实现的。 这类抑制剂的结构与底物有很大相似性，与酶分子有较高的亲这类抑制剂的结构与底物有很大相似性，与酶分子有较高的亲和力，它本身无化学活性或者没有化学活性基团，但在酶的催和力，它本身无化学活性或者没有化学活性基团，但在酶的催化作用下，产生了化学活性的亲电性基团，化作用下，产生了化学活性的亲电性基团， 从而与酶的活性部位处的从而与酶的活性部位处的 亲核性基团发生不可逆的亲核性基团发生不可逆的 结合反应，使酶失活。结合反应，使酶失活。3、酶自杀性底物的抑制作用、酶自杀性底物的抑制作用qKs型：型：一种抑制剂只作用于酶分子中一种氨基酸侧链一种抑制剂只作用于酶

33、分子中一种氨基酸侧链基团，该氨基酸残基属于酶的必需基团。基团，该氨基酸残基属于酶的必需基团。如：有机汞：专一作用于巯基；如：有机汞：专一作用于巯基； 有机磷农药：专一作用于丝氨酸羟基，如乐果、敌百虫有机磷农药：专一作用于丝氨酸羟基，如乐果、敌百虫qKcat型：型：抑制剂为底物的类似物，但其结构中潜藏着抑制剂为底物的类似物，但其结构中潜藏着一种化学活性基团，在酶的作用下，潜在的化学活性一种化学活性基团，在酶的作用下，潜在的化学活性基团被激活，与酶的活性中心发生共价结合，不能再基团被激活，与酶的活性中心发生共价结合，不能再分解，酶因此失活。分解，酶因此失活。自杀性底物自杀性底物自杀性底物具有以下的

34、结构特征和性能自杀性底物具有以下的结构特征和性能 (1)同正常底物的化学结构具有相似性；同正常底物的化学结构具有相似性； (2)可以同酶结合成复合物，有较大的亲和力；可以同酶结合成复合物，有较大的亲和力； (3)在通常状态下，有低反应性能或化学惰性的基团或在通常状态下，有低反应性能或化学惰性的基团或结构片断；结构片断； (4)在酶的催化阶段，可将惰性基团转化为反应性能强在酶的催化阶段，可将惰性基团转化为反应性能强的中间体；的中间体； (5)与酶的活性部位发生化学反应，特别是共价键合，与酶的活性部位发生化学反应，特别是共价键合，使酶不可逆失活。使酶不可逆失活。 酶自杀性底物的功能基团类型酶自杀性

35、底物的功能基团类型 基于它与正常底物的结构相似性、这是酶与该抑制剂基于它与正常底物的结构相似性、这是酶与该抑制剂结合成复合物并经催化反应暴露出活性基团的前提。结合成复合物并经催化反应暴露出活性基团的前提。 所暴露出的反应活性基团大多是亲电基团。所暴露出的反应活性基团大多是亲电基团。酶的自杀性底物的特异性酶的自杀性底物的特异性 醛、酮、亚胺或酯等与酶分子的亲核基团发生迈克尔加成反醛、酮、亚胺或酯等与酶分子的亲核基团发生迈克尔加成反应应 生成的负碳型中间体被负电性的羰基共振稳定化，使邻位生成的负碳型中间体被负电性的羰基共振稳定化，使邻位碳发生消去反应或去质子化，生成邻位不饱和键。碳发生消去反应或去

36、质子化，生成邻位不饱和键。 , 不饱和羰基不饱和羰基4 4、指向活性部位抑制剂、指向活性部位抑制剂指向活性部位抑制剂的作用特征是指向活性部位抑制剂的作用特征是, , 抑制剂分子中含有化学抑制剂分子中含有化学活泼的功能基，它与酶的活性部位处的基团或原子发生共价结活泼的功能基，它与酶的活性部位处的基团或原子发生共价结合，使酶失活。合，使酶失活。 这类抑制剂的结构类似于酶的底物，可被酶的活性部位识别。这类抑制剂的结构类似于酶的底物，可被酶的活性部位识别。 可用于酶活性中心的结构研究，也称为亲和标记试剂。可用于酶活性中心的结构研究，也称为亲和标记试剂。 指向活性部位的不可逆抑制剂的化学活性基团多为亲电

37、试剂，指向活性部位的不可逆抑制剂的化学活性基团多为亲电试剂，与其发生反应的酶活性部位的基团则是亲核性基团，形成共价与其发生反应的酶活性部位的基团则是亲核性基团，形成共价键。键。化学物质对酶的激活作用化学物质对酶的激活作用 Activation of enzymes by chemicals化学物质对酶的激活作用化学物质对酶的激活作用一、激活剂的类型一、激活剂的类型 激活剂的类型除了在生物体内起激活作用的蛋白质激活剂的类型除了在生物体内起激活作用的蛋白质分子（如酶原激活）以外，按照分子的大小可以分分子（如酶原激活）以外，按照分子的大小可以分为三种类型。为三种类型。 即：无机离子、有机分子和高分子

38、物质。即：无机离子、有机分子和高分子物质。1、具有巯基的还原剂、具有巯基的还原剂 半胱氨酸、半胱氨酸、2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等都含有巯基，可以巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等都含有巯基，可以使酶分子中被氧化的使酶分子中被氧化的-SH基还原，从而提高酶的催化活力。基还原，从而提高酶的催化活力。 如半胱氨酸、如半胱氨酸、2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等对腺苷二磷酸葡巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、木瓜蛋白酶、蜡样芽胞杆菌蛋白酶、萄糖焦磷酸化酶、木瓜蛋白酶、蜡样芽胞杆菌蛋白酶、D-甘油甘油醛醛-3-磷酸脱氢酶等均具有激活作用。磷酸脱氢酶等均具有激活作用。 半胱氨酸半胱氨酸 (2

39、0mM)、2-巯基乙醇巯基乙醇(10mM)和谷胱甘肽和谷胱甘肽 (10mM)分分别使未活化的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性提高别使未活化的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性提高1.3、3.5和和2.8倍。倍。 巯基的配位作用巯基的配位作用 这些含有巯基的化合物还可以作为金属酶活性中心的轴向配这些含有巯基的化合物还可以作为金属酶活性中心的轴向配体从而激活酶的催化作用，如巯基苯甲酸、巯基乙酸、半胱体从而激活酶的催化作用，如巯基苯甲酸、巯基乙酸、半胱氨酸对细胞色素氨酸对细胞色素 P450P450、过氧化氢酶的激活作用。、过氧化氢酶的激活作用。 过氧化氢酶被巯基乙酸激活后，其过氧化氢酶被巯基乙酸激活后

40、，其kmkm值减小、值减小、kcatkcat/km/km增大，增大，即巯基乙酸能够提高过氧化氢酶对底物的亲和力及底物专一即巯基乙酸能够提高过氧化氢酶对底物的亲和力及底物专一性。性。 巯基乙酸同样能够引起过氧化氢酶的可见光谱的蓝移及酶分巯基乙酸同样能够引起过氧化氢酶的可见光谱的蓝移及酶分子的色氨酸残基的荧光强度减小，从而使过氧化氢酶活性中子的色氨酸残基的荧光强度减小，从而使过氧化氢酶活性中心铁卟啉周围环境发生变化，以达到提高酶活力之目的。心铁卟啉周围环境发生变化，以达到提高酶活力之目的。2、多羟基化合物、多羟基化合物 多羟基化合物如甘油、乙二醇、糖类物质等不但可以作为酶的多羟基化合物如甘油、乙二

41、醇、糖类物质等不但可以作为酶的稳定剂使用，而且它们对许多酶具有激活作用。稳定剂使用，而且它们对许多酶具有激活作用。 对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶起激活作用的物质除了半胱氨对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶起激活作用的物质除了半胱氨酸、酸、2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等以外，巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等以外，3-磷酸甘油是其最有磷酸甘油是其最有效的激活剂。效的激活剂。3、变性剂、变性剂 某些变性剂如脲、盐酸胍等可以完全破坏酶蛋白的空间构象，某些变性剂如脲、盐酸胍等可以完全破坏酶蛋白的空间构象，使酶失去活性。但是当变性剂的浓度较低时，酶蛋白仅仅发生使酶失去活性。但是当变性剂的浓度较低时，酶蛋白仅仅发生了部

42、分变性。了部分变性。 由于酶活性中心附近的多肽链的柔性，部分变性使活性中心的由于酶活性中心附近的多肽链的柔性，部分变性使活性中心的空间构象发生的改变，有利于底物的结合以及产物的离去，从空间构象发生的改变，有利于底物的结合以及产物的离去，从而使酶的催化活性提高。而使酶的催化活性提高。曲线曲线1和和2是在脲加入后立即检测，是在脲加入后立即检测，曲线曲线3和和4是在脲加入是在脲加入12小时后检测小时后检测 4 4、有机溶剂、有机溶剂表面活性剂表面活性剂5 5、小分子有机化合物、小分子有机化合物 在有机胺类化合物（二乙胺、二异丙胺、三乙胺、吡啶等）在有机胺类化合物（二乙胺、二异丙胺、三乙胺、吡啶等）的

43、存在下，磷酸三酯酶的催化活性随着有机胺的浓度改变而的存在下，磷酸三酯酶的催化活性随着有机胺的浓度改变而变化；变化； 当有机胺浓度较低时，磷酸三酯酶的催化活性明显提高，显当有机胺浓度较低时，磷酸三酯酶的催化活性明显提高，显示出有机胺化合物对磷酸三酯酶的激活作用，但当有机胺的示出有机胺化合物对磷酸三酯酶的激活作用，但当有机胺的浓度增大时（浓度增大时（0.1mol/L），则表现出较强的抑制作用。），则表现出较强的抑制作用。 6 6、高分子化合物、高分子化合物二、激活作用的动力学二、激活作用的动力学p 激活剂之所以能够提高酶的催化活性，其主要原因有两种：激活剂之所以能够提高酶的催化活性，其主要原因有两

44、种： 一是激活剂与酶分子结合，改变了酶活性中心及其附近的一是激活剂与酶分子结合，改变了酶活性中心及其附近的构象，从而增强了酶与底物的亲合能力，或者是增加了产构象，从而增强了酶与底物的亲合能力，或者是增加了产物的离去速度，进而提高酶的催化活力；物的离去速度，进而提高酶的催化活力； 二是激活剂与底物分子结合再与酶分子结合，使底物分子二是激活剂与底物分子结合再与酶分子结合，使底物分子的电子密度或分子张力发生变化，有利于产物的形成，从的电子密度或分子张力发生变化，有利于产物的形成，从而提高酶催化活力。而提高酶催化活力。1、激活剂、激活剂A与酶形成与酶形成EA活性复合物活性复合物 激活动力学模型与抑制动

45、力学模型采取一致的符号，激活动力学模型与抑制动力学模型采取一致的符号，可表示如下可表示如下: +AEA + SEASEA + PKsKAEE + S KsESkpE + P+ +IIEIEISSKiKiKs以稳态法处理可得到如下以稳态法处理可得到如下: : 显而易见，此类型的激活剂只影响反应的显而易见，此类型的激活剂只影响反应的Km值，并值，并不影响不影响Vmax。若和抑制剂的类型相类比，应属于竞。若和抑制剂的类型相类比，应属于竞争性活化。其倒数方程可表示如下：争性活化。其倒数方程可表示如下：max1(1) AVvKmKSA反应速度方程式反应速度方程式111(1)maxmax AKmKvVVA

46、S111()maxmax max AKmKmKvVVSVSA激活剂激活剂A竞争性激活过程竞争性激活过程对对S1和和S2不同底物浓度下所得到的不同底物浓度下所得到的1/ 1/A两直线相交于两直线相交于一点：一点：1/A=-1/KA。 如果激活剂如果激活剂A与底物结合，其模型可表示如下：与底物结合，其模型可表示如下：+AEASEA + PKsKAE + S E + AS2、激活剂与游离酶、酶、激活剂与游离酶、酶-底物复合物结合底物复合物结合+AEA + SEASEA + PKsKAE + S ES +AKAKsE + S KsESkpE + P+ +IIEIEISSKiKiKs 激活剂和酶结合不影

47、响底物与酶结合激活剂和酶结合不影响底物与酶结合 底物结合也不影响激活剂与酶的结合。底物结合也不影响激活剂与酶的结合。 激活剂的作用只对酶的活性有影响，也就是说，末结合激活剂激活剂的作用只对酶的活性有影响，也就是说，末结合激活剂的的ES复合物是无活性的，只有复合物是无活性的，只有ESA三元复合物才有活性。以迅三元复合物才有活性。以迅速平衡法得到如下方程：速平衡法得到如下方程：max(1)(1) AVvKKmAS激活剂与游离酶、酶激活剂与游离酶、酶-底物复合物结合关系底物复合物结合关系1(1)11 maxmax AAKKKmAAvVVS非竞争性活化作用非竞争性活化作用酶对化学物质的催化作用酶对化学

48、物质的催化作用 Enzymatic catalysis of chemical substances酶对化学物质的催化作用酶对化学物质的催化作用 酶作为一种高效生物催化剂，它具有比化学催化剂更优越的性能。酶作为一种高效生物催化剂，它具有比化学催化剂更优越的性能。利用生物催化剂实现有机化合物的生物合成和生物转化是一门以利用生物催化剂实现有机化合物的生物合成和生物转化是一门以有机合成化学为主，与生物学密切联系的交叉学科，它也是当今有机合成化学为主，与生物学密切联系的交叉学科，它也是当今有机合成化学的研究热点和重要发展方向。有机合成化学的研究热点和重要发展方向。 酶不仅可以催化天然有机物质的生物转化

49、，也能在生物体外催化酶不仅可以催化天然有机物质的生物转化，也能在生物体外催化天然的或人工合成的有机化合物的各种转化反应，并且显示出优天然的或人工合成的有机化合物的各种转化反应，并且显示出优良的化学选择性、区域选择性和立体选择性。因此，酶催化反应良的化学选择性、区域选择性和立体选择性。因此，酶催化反应提供了许多常规化学方法不能或不易合成的化合物的合成方法，提供了许多常规化学方法不能或不易合成的化合物的合成方法，能合成和制备包括光学纯的医药、农药及中间体在内的复杂的功能合成和制备包括光学纯的医药、农药及中间体在内的复杂的功能化合物，是一个有利于环境保护的绿色化学过程。能化合物，是一个有利于环境保护

50、的绿色化学过程。 一、酶制剂的类型一、酶制剂的类型 虽然自然界中发现的酶已达虽然自然界中发现的酶已达3000多种，但由于酶生产成本等方多种，但由于酶生产成本等方面的限制，工业上有价值的酶只有不到面的限制，工业上有价值的酶只有不到100种，能大规模生产种，能大规模生产和应用的只有十多种，如淀粉酶，蛋白酶、葡萄糖异构酶、果和应用的只有十多种，如淀粉酶，蛋白酶、葡萄糖异构酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、脂酶等。胶酶、葡萄糖氧化酶、脂酶等。 在酶催化的化学反应中，由于反应的类型，反应条件，反应体在酶催化的化学反应中，由于反应的类型，反应条件，反应体系以及完成底物转化的规模等因素，需要考虑所使用酶制剂的系以及

51、完成底物转化的规模等因素，需要考虑所使用酶制剂的类型。为了提高酶制剂的稳定性和催化效率，可以对酶制剂本类型。为了提高酶制剂的稳定性和催化效率，可以对酶制剂本身进行修饰和改性，因此，在酶催化的化学反应中，除了使用身进行修饰和改性，因此，在酶催化的化学反应中，除了使用溶液状态的酶制剂以外，还可采用以下酶制剂类型。溶液状态的酶制剂以外，还可采用以下酶制剂类型。 酶天然酶人工改造酶动物植物微生物粗酶精制酶冻干酶粉 溶液态酶化学的生物的固定化酶化学修饰酶抗体酶基因工程酶酶制剂的来源酶制剂的来源1 1、完整细胞、完整细胞 某些含有较高酶活力的细胞（如微生物、植物细胞、某些含有较高酶活力的细胞（如微生物、植

52、物细胞、动物细胞）组织、细胞器等，不经过分离直接用于催动物细胞）组织、细胞器等，不经过分离直接用于催化反应，或用物理或化学方法使其与适当载体相结合，化反应，或用物理或化学方法使其与适当载体相结合，作为固定化催化剂利用。作为固定化催化剂利用。 固定化细胞可省掉提取工艺，使酶的损失达到最低限固定化细胞可省掉提取工艺，使酶的损失达到最低限度。有时可以利用细胞的复合酶系统催化几个有关反度。有时可以利用细胞的复合酶系统催化几个有关反应。固定化细胞的方法主要有两种类型：即包埋法和应。固定化细胞的方法主要有两种类型：即包埋法和共价交联法。共价交联法。 2、固定化酶、固定化酶 酶的固定化是通过物理或化学方法，

53、将酶束缚在某种载体上，酶的固定化是通过物理或化学方法，将酶束缚在某种载体上，使酶只能在一定的空间内进行催化活动，底物通过扩散作用与使酶只能在一定的空间内进行催化活动，底物通过扩散作用与酶接触并发生反应。在反应结束后，产物扩散到反应介质中与酶接触并发生反应。在反应结束后，产物扩散到反应介质中与酶分离。而酶则可以重复进行催化作用。这种酶在反应体系中酶分离。而酶则可以重复进行催化作用。这种酶在反应体系中以固相形式存在，所以称为固定化酶或固相酶。以固相形式存在，所以称为固定化酶或固相酶。 固定化酶不仅保持了酶原有的性质，而且赋予了酶新的特性。固定化酶不仅保持了酶原有的性质，而且赋予了酶新的特性。例如固

54、定化酶具有一定的机械强度，可以搅拌或装柱，易于回例如固定化酶具有一定的机械强度，可以搅拌或装柱，易于回收和重复使用，产物容易分离，容易实现生产过程的连续化。收和重复使用，产物容易分离，容易实现生产过程的连续化。另外，酶固定化后，可以提高对温度及酸碱稳定性。另外，酶固定化后，可以提高对温度及酸碱稳定性。 3、修饰酶、修饰酶 化学修饰的目的是将酶分子表面的亲水基团改变为疏化学修饰的目的是将酶分子表面的亲水基团改变为疏水基团，使得酶可以在有机介质中有效分散，溶解在水基团，使得酶可以在有机介质中有效分散，溶解在有机溶剂中，从而提高酶的催化效率。有机溶剂中，从而提高酶的催化效率。 典型的例子是用单甲氧基

55、聚乙二醇共价修饰脂肪酶、典型的例子是用单甲氧基聚乙二醇共价修饰脂肪酶、过氧化物酶等的自由氨基，修饰酶能均匀溶于苯、氯过氧化物酶等的自由氨基，修饰酶能均匀溶于苯、氯仿等有机溶剂中，同时表现出较高的酶催化活性和稳仿等有机溶剂中，同时表现出较高的酶催化活性和稳定性。定性。 采用聚乙二醇共价修饰采用聚乙二醇共价修饰Candida rugosa脂肪酶，在异脂肪酶，在异辛烷中催化酯合成反应，酶催化活力比未修饰的酶提辛烷中催化酯合成反应，酶催化活力比未修饰的酶提高数十倍；另外聚丙烯醇修饰、聚丙烯酸甲酯修饰、高数十倍；另外聚丙烯醇修饰、聚丙烯酸甲酯修饰、脂肪酸修饰酶在有机溶剂中也表现出较好的催化活性。脂肪酸修

56、饰酶在有机溶剂中也表现出较好的催化活性。 酶分子表面以及活性中心的基团也可以与表面活性剂酶分子表面以及活性中心的基团也可以与表面活性剂或脂肪酸相互作用，形成复合物。用非离子表面活性或脂肪酸相互作用，形成复合物。用非离子表面活性剂处理各种蛋白酶形成的复合物在无水有机溶剂中催剂处理各种蛋白酶形成的复合物在无水有机溶剂中催化二肽的合成，酶催化活力可提高化二肽的合成，酶催化活力可提高26倍。而采用硬脂倍。而采用硬脂酸处理脂肪酶和蛋白酶（对酶进行非共价修饰），修酸处理脂肪酶和蛋白酶（对酶进行非共价修饰），修饰酶在有机溶剂中的酯交换活力提高了饰酶在有机溶剂中的酯交换活力提高了15倍，产物的倍，产物的光学收

57、率达到光学收率达到100%ee。 二、酶催化反应的介质二、酶催化反应的介质 将生物催化剂应用于有机合成是目前最吸引人的研究领域。将生物催化剂应用于有机合成是目前最吸引人的研究领域。有机化合物的生物合成和生物转化是一门以有机合成化学有机化合物的生物合成和生物转化是一门以有机合成化学为主，与生物学密切联系的交叉学科，它也是当今有机合为主，与生物学密切联系的交叉学科，它也是当今有机合成化学的研究热点和重要发展方向。成化学的研究热点和重要发展方向。 酶不仅在生物体内可以催化天然有机物质的生物转化，酶不仅在生物体内可以催化天然有机物质的生物转化，也能在生物体外促进天然的或人工合成的有机化合物的各也能在生

58、物体外促进天然的或人工合成的有机化合物的各种转化反应，并且显示出优良的化学选择性、区域选择性种转化反应，并且显示出优良的化学选择性、区域选择性和立体选择性和立体选择性1 1、水介质、水介质 水是酶促反应最常用的反应介质。在水溶液中采用游离酶水是酶促反应最常用的反应介质。在水溶液中采用游离酶催化化学反应不存在底物及产物的扩散问题。因为底物、催化化学反应不存在底物及产物的扩散问题。因为底物、产物和酶都处于溶解状态，底物容易进入酶的活性中心，产物和酶都处于溶解状态，底物容易进入酶的活性中心，产物也容易进入缓冲体系中。产物也容易进入缓冲体系中。 但是，对于大多数有机化合物来说，水并不是一种适宜的但是，

59、对于大多数有机化合物来说，水并不是一种适宜的溶剂，因为许多有机化合物在水介质中难溶或不溶。而且，溶剂，因为许多有机化合物在水介质中难溶或不溶。而且，由于水的存在，往往有利于如水解、消旋化、聚合和分解由于水的存在，往往有利于如水解、消旋化、聚合和分解等副反应的发生。等副反应的发生。 2、与水互溶的有机溶剂、与水互溶的有机溶剂水单相体系水单相体系 有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系。有机溶剂与水形成均匀的单相溶液体系。 酶、底物和产物都能溶解在这种体系中。这类溶剂主要包括二酶、底物和产物都能溶解在这种体系中。这类溶剂主要包括二甲基甲酰胺甲基甲酰胺 四氢呋喃四氢呋喃, 二氧六环二氧六环, 丙酮，乙醇

60、和甲醇等。丙酮，乙醇和甲醇等。 该体系主要用于脂溶性底物的转化反应。由于底物在水溶液中该体系主要用于脂溶性底物的转化反应。由于底物在水溶液中溶解度比较低溶解度比较低, 因而反应速度很低。在某些情况下，通过使用因而反应速度很低。在某些情况下，通过使用与水互溶的溶剂可以提高酯酶和蛋白酶的催化反应速度和选择与水互溶的溶剂可以提高酯酶和蛋白酶的催化反应速度和选择性。但这种极性有机溶剂常常导致酶的变性，催化活力降低。性。但这种极性有机溶剂常常导致酶的变性，催化活力降低。 3、非极性有机溶剂、非极性有机溶剂水两相体系水两相体系 由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶剂由含有溶解酶的水相和一个非极性的有机溶