工业微生物菌种的筛选ppt课件

1、第二章工业微生物菌种选育工业微生物育种的必要性 发酵工业的目的是为人们提供各种各样的发酵产品，菌种的特性是发酵能否胜利的关键，野生菌株不会积累过多的代谢产物，我们需求对野生菌株改造，使其符合人们的要求高代谢产物及其它特性等；这个过程就是育种。工业微生物育种方法 自然选育 诱变育种 杂交育种 基因工程育种工业微生物菌种的挑选步骤 菌株的挑选通常分采样 富集分别挑选产物鉴别等步骤.出发菌株采样 向菌中保藏机构购买或索取 向其它机构购买或索取 从自然界采样从自然界采样 从土壤中采样 根据微生物特点采样从土壤中采样 土壤有机质情况 土壤酸碱度和植被情况 地理条件 季节变化根据微生物的生理特点 产纤维素

2、酶 产蛋白酶 产淀粉酶,糖化酶 以碳氢化合物为底物的菌种等采样方法 出去表层5CM左右的土层,取525CM的土样1015克(北方土壤枯燥,可在10-30CM处取样),装入事先预备好的容器内,编号并记录地点 土壤质地 植被情况取样时间及其它环境条件等.富集培育 富集培育是根据微生物的生理特点,设计一种选择性培育基,取样品少许参与培育基中,给目的微生物一个最适的生长环境,经过一定时间的培育,目的微生物在数量上占绝对优势,可有效地分别出所需求的菌株.富集培育方法 富集培育主要根据微生物的碳氮源PH温度需氧等生理要素加以控制. 举例一:分别纤维素水解酶产生菌 举例二:分别耐高浸透压的酵母分别 纯化分别

3、,包括稀释分别法和划线分别法 组织分别法常用于病变组织或特殊组织 控制营养和培育条件控制营养和培育条件 控制培育基中的营养成份 控制培育基的PH 抑制不需求的菌类 加温处置 利用指示剂或呈色剂的生化反响等工业微生物的诱变育种 微生物育种是建立在遗传和变异的根底上的,一个菌种生物合成代谢产物的产量和质量由遗传要素所决议.一个性能好的菌种只需在适宜的条件下才干表现出来.因此诱变育种的包括诱变 挑选和优化环境条件三个重要环节.人工诱变育种的目的 提高有效产物的产量. 改善菌种特性 提高产质量量.例如:孢子生长力强,产泡沫少,需氧量低,抗噬菌体,耐高温等. 开发新种类.人工诱变育种的优点 人工诱变育种

4、能加速基因突变,可大大地提高突变株的数量.具有速度快 收效大 方法简单等优点.育种前预备任务 了解菌落的特征以及和消费性能的关系 了解产物的代谢途径. 了解影响菌种发育的主要要素. 建立一个准确 简便 快速检测突变株和产物的方法. 研讨最正确保藏条件.诱变育种方法与步骤 出发菌株的选择. 菌悬液制备. 诱变剂选择. 诱变处置方法. 突变株纯化及分别.出发菌株的选择 选择具有一定消费才干或某种特性的菌株作出发菌株. 选择纯种作出发菌株. 选择菌株应思索稳定性. 采用多出发菌株. 选择出发菌株的其它要素.出发菌株的纯化 将液体培育物或从斜面移接菌体细胞到0.9%生理盐水中,按10倍稀释法,逐一稀释

5、到10-610-5,从适当浓度的稀释管中汲取0.1毫升,于事先预备好的琼脂平板上均匀涂抹,培育后,挑取一定数量(3050个)菌落,进一步培育鉴定,最后确定遗传性状稳定菌株供诱变处置.单孢子菌悬液制备 菌悬液要求:对进展诱变的菌体要坚持同步,同时又要处在最旺盛的对数期. 菌悬液制备方法(细菌):把经过2024小时培育的新颖斜面,移到装有根本培育基的三角瓶中,于370C振动培育到对数期(1618小时).接着于60C培育1小时, 使之同步生长.然后参与一定浓度的嘧啶和嘌呤继续培育2060分钟.置于低温(约20C)10分钟.离心洗涤 .用生理盐水或缓冲溶液制备菌悬液.诱变 诱变剂的选择. 诱变处置方式

6、.突变株分别和挑选 微生物经过诱变因子处置,群体中产生各种突变体,其中有正突变 负突变和稳定型.需经过分别挑选,逐个挑出. 突变是随机不定向的,但挑选是定向的.挑选的条件决议选育方向.常规挑选程序 第一次诱变:出发菌株 诱变分别在平皿上挑选菌落(200个) 初筛(1瓶/株) 选取50株复筛(35瓶/株) 选取35株(供下次做出发菌株). 第二次诱变:取上述菌株4株诱变分别到平皿上每株取100个菌落初筛(1瓶/株) 复筛选取35株供第三次诱变.挑选方法 随机挑选:将诱变处置后的菌体分别在琼脂平板上,随机挑选菌落,逐个进展鉴定.其优点是不论种子或发酵条件如何,都能做到与大消费条件接近.缺陷是效率低. 平板菌落预选法:根据菌种及其代谢产物的特性,在平板上设计许多巧妙的挑选方法和活性粗测方法.平板菌落预选法 根据形