生物化学简明教程ppt第二章蛋白质.

1、第二章蛋白质蛋白质主要元素组成：c. H、0、N、S及P、Fe. Cu. Zn. Mo、I、Se 等微量元素。円首卜阿凯氏定第一节蛋白质的分类、根据分子形状分类、根据分子组成分类中.纯蛋白质（如淸蛋白等）结合蛋白质（如核蛋门等）三.根据功能分类催化蛋白调节蛋白结构蛋白运输蛋白贮藏蛋白运动蛋白 防御蛋白 电子传递蛋白第二节 蛋白质的组成单位氨基酸J含芳香环及杂环R基：Phe、Trp. Pro不带电荷的极性R基:Ser、Thr、Asn、Gin、Tyr、Cys极性R基氨基酸带正电荷的极性R基：Lys、His、Arg带负电荷的极竹H基：Asp、Glu2、按R基的化学结构不同来分类了 倉氨基 竣基的Gl

2、y、Ala、Vai、Leu、lie.中网啟酸：“、Met金片旱的氨基酸：Ser.Thr、脂肪族氨基酸含1O的氨基酸：Asn.Gin含氨基二竣基的Acnril,fim氮基酸：心、Glu1含二氨基一滋基的LvsAm輕奴基酸：庐、旧芳存族氨基酸：Phe、Tyr杂环族帆莊购：TrD、His、Pro三、氨基酸的理化性质1、一般物理性质2. 化学性质厂万亚硝酸的反应(1)氨基参加的反W与甲醛的反应92, 4硝肚触苯的反应与界硫机酸苯酯的反应/戈盐和成脂反应(2) 竣基参加的反应T讹竣反应(3) 氨基和竣基共同参加的反应两性解离(两件离于、两件解离、等电点)苗三酮反应I成肽反应（4）由侧链慕团参加的反应双缩

3、尿反应 黄蛋白反应 乙醛酸反应 坂口反应酚试剂反应米伦氏反应第三节 肽_、肽的结构几个重要的概念：肽、肽键、氨味酸残里、N端C端、多肽、.硫键、酰氨平面第四节 蛋白质的结构(一) 、蛋白质的一级结构定义 举例：胰岛素的级结构(二) 、空间结构包禽的内容1、蛋门质的二级结构(1)、定义a 螺旋结构(2) 、包含内容彳B折廉结构10转角结构(3) 、超级结构:aa、 Pap.祁0、卩曲折、结构域2、蛋白质的三级结构举例：儿纟I 丨的"3、蛋白质的四级结构举例：血红蛋I的四级结构（亚基）三、维持蛋白质构象的化7键1、共价键：肽键、二硫键2、非共价键：型也范徳华力、盐键（离子键）、疏水键第五

4、节蛋白质结构与功能的关系一、蛋白质一级结构和功能的关系仁种属差异2、分f病二、蛋口质的空间结构与功能的关系别构现象第六节 蛋白质的性质与分离.分析技术一、蛋白质的性质1、蛋白质的相对分子质量 沉降系数S2、蛋白质的两性解离和等电点等电点isoelectric poirH:蛋白质分子所带的 正电荷和负电荷相等时溶液的pH值.pl在有中性盐时有明显变化，因分子中某些 解离基团可与盐的离子如Ca2+、Mg2+、Cl->HPO42-结合，观察到的pl在一定程度上决定于介 质中离子的组成.pl是蛋白质的一个特征常数.不同的蛋白质有不同的等电点等电点是蛋白质的一个特征常数，其等电点 是由可解离基团的

5、种类和数目决定的，而这在不 同的蛋右质中是不同的.不同蛋白质的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸 残基的多少，直接影响蛋白质等电点的大小。蛋白质在等电点时的溶解度最小，因此不同 蛋白质的等电点不同来沉淀不同的蛋白质，分离 蛋白质混合物3、蛋白质的变性(1) 、变性的概念在变性因素作用下，天然蛋白质一级结构保 持不变，高级结构发生了异常的变化，由天然态 的折迭态变成了变性的伸展态，引起生物功能的 丧失，理化性质的改变的现象。氨基酸的甲醛滴定丄为aNib的反应B.庄常温，中性条件.甲醛与a - MljIR快反应.生成轻甲基衍生物.释放氢离子.氨基酸定量分析一甲醯滴定法（间接滴定） 儿直接滴定.终点pHit

6、高（12） 没有适当指示剂. B与甲軽反应，滴定终点在9左右.可用酚酿作指示剂. C.释放一个氢离子.相当于一个飢基（摩尔比1： 1）与异硫氣酸苯酯（PITC）的反应小（苯异确鼠酸酯法）：由Edm&n于1950年首先提出，为a- NH2的反应，用于N末端分析，又称 Ednmn降解法。此法的特点是能够不断重复循环，将 肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离肽链（N«|氨基酸）与PITC偶联，生成PTC肽环化断裂：域確近PTC展的肽键断裂，生成PTC氨堆酸和少一残展的肽链，同时PTC 猱加酸坏化生成PTH似卑酸分离PTH氨基酸层析法鉴定 Edman-用DNS（-甲甲紧磺酰氯）测疋

7、N端氮基槪原理DNFB法相同但水解后的DNS氨肚酸不需分离，可直接用电泳或层析法 鉴定山于DNS台强烈荧光，灵敏度比DNFB法髙100倍，比与2, 4-二硝基氟苯（DNFB）反应A. 为a- NR?的反应B. 氨基酸a- NH?的一个H原子可被炷基取代（卤代炬）C在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基门月.鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸首先lllSanger应用，确定了胰岛索的一级结构A. 肽分子与DNFB反应，得DNP肽B. 水解DNP肽，得DNPN端氨基酸及工他游离氨 基酸C. 分离DNP 姐荒酸D.层析法定性DNP-M基酸,得出N端氨基酸的种Corey & Paul

8、ing(Corey1897 1971Paulinga螺旋(ahelix)特征1、每隔3. 6个AA残 基螺旋上升一圈，螺距 0.54nm;2. H旋体中所有氨基 酸残基R侧链都伸向外侧， 链中的全部（工0和NH几 乎都平行于II旋轴：3、每个氨基酸残基的 N-H与前面第四个氨基酸残 基的C=O形成氢仏 肽桂上 所有的肽键都参与氢犍的形 成.形成因素与AA组成和排 列顺序直接相关.多态性多数为右手（较稳 定），亦有少数左手螺旋存 在（不稳定X存在尺寸不网 的媒瓠*影响a -螺旋形成的因素氨基酸组成和序列？R基团？脯氨酸？P 折叠定义：两条或几条几孚完全伸展的篡肽链侧向聚集在 起相邻 肢诜匸链上的

9、奴基和顼呈Z间形成右规则的氧键，维持这种片足结构的特点：纟肽链匸徒比絞伸展，相邻如的轴心和为O.35nm.侧链R殳 替分布在片层平面的上、下方.令平行和反平行两面种儿f所仃的肽逊都参I if链间啦建的形成肌红蛋白（myoglobin）分子由一条多肽链 （153个残基）和一个血红素组成.分子呈扁圆形， 大小为4.5nm x 3.5nm x 2.5nm°多肽链主链骨架包 含长短不等的A、B、C、D、E、F、G、H共8个 a螺旋。分子中几乎80%的氨基酸残基都是位于a 螺旋结构中.a螺旋之间的拐弯处（AB、CD、EF、 FG、GH）是无规卷曲。绝大多数亲水性R侧链分 布在分子的外表面，与水

10、分子结合，使肌红蛋白 可溶于水溶液中。绝大多数疏水性R侧链埋藏在分分子表面有一个深陷的洞穴.该洞穴由C、E、 F、G共4个螺旋段构成。洞穴周围分布许多疏水 性R侧链，从而为洞穴构成了疏水性环境。平面 的血红素分子埋人疏水的洞穴中.维持肌红蛋白 分子二级结构的力是范德华引力、疏水键、氢健 和配位键。血红蛋白的四级结构V维系蛋白质分子的一级结构：肽键、二硫犍V维系蛋白质分子的二级结构：氢犍丁维系蛋白质分子的三级结构：疏水相互作用力、氢键、 范律华力.盐tt7维系蛋白成分子的四级结构：范德华力、盐键a盐犍（离子犍） b氢犍C疲水相互作用力d范德华力&二磕键f陌键中性脂肪族氛基酸COOHjN

11、-C-H$ H ?甘気酸«ilyX；)COOCOOCOOl 彳 iCHjj "CH z 、i15HX-C-K X|:HjC CH,:CH 、CH,:H,C CH,：1CH,亮氨酸异亮氯酸(AhuA)含疑基或硫膚驟氨基muc,)(IleJ)-C-Hcoo1COO 1H<N C HH,N C H9 丫 H C-OK：:<1 :1 :OH ：ch5丝氨隈苏氨酸/TK.T、coocooHjN C-H1HjNC H I1 CH2 :? 1 :SH :ch2 :! 1 ?! s半甲硫氨酸:i? CH,：f w 彳rxtoi MA酸性氨基酸及酰胺COO*COO"CO

12、O"coo* 1 H.N-C-H.1 HjN-C-H 1 HjN-C-Hh3n - c -h| ch2 !1 ch21 CHi11ch2i 1 1;111 COOH i竿 c; ch2；COOHQNH2 =!<；& 0 NH,天冬氨酸谷氨酸天冬酰胺谷氮酰胺(AspJ)(Ghi.E)(AsnTN )(Gln.Q)碱性氨基辽COO"COCTCOCT 1 HjN-C-HH,N -C-H41HjN-C-Hi ch2 I 1CH?1CH,I 11 1i2i円:$ch2HC=C1X:ch2 i? 1 ;ich21xi /' i：H %zNH| 杂环I ch2 IN

13、HI£ iMJ:NH3 ： 夕、:h2n nh2H赖氨酸精氨酸组氨酸(Lys,K)(Arg.R)(HisJI)ch2HC = CNH脯氨酸(Prof)组氨酸(His Ji)芳香族氨基酸COOCOO*酪氨酸(TynY)色氨酸 (TrgV)苯丙氨酸(Phe.F)杂环氨基酸COOcoo4 Ih3n 一 ch氨基酸的兼性离子形式：氨基酸或肽在晶体或水中以兼性离子形式 存在，熔点高。 OO氨基酸的两性解离R1+R1+ OHR .ICII-NH?V- ii N M、- 1CH-NIkCOOHCOO"+1 2 ccxrpH< pl(pic JpH = pIpH>pI净电荷为正

14、净电衙=0净电荷为负pH = pl：蛋白质处于中性环境，两边解离趋势相等而成兼性离子 pH > Ph蛋白质处于碱性环境，竣基解离趋势大于氨基而成负离子 pH<pl：蛋白质处于酸性环境，氨基解离趋势大于敖基而成正离子氨基酸的等电点当氨基酸溶液在某一定pH值时.使某特定氮基酸分子上所带正 负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动 ,此时溶液的pH值即为该氨基酸的等电点(Isoelectric polnl, pl).在氨基酸等电点以上任何pH, AA带净的负电荷，在电场中 向阳极移动；在氨基酸等电点以下任何pH, AA带净的正电 荷，在电场中向阴极移动.在一定pH范围中

15、，溶液的pH离AA等电点愈远，AA带净电荷pKj+pKjpKj+pKRCOOH pl= S一氮基一竣基AA的等电点计算：二氨基一竣基AA的等电点计算：pK2+pKRNH2pl= ;一氮基二竣基AA的等电点计算：可见，奴基酸的pl值等于该氨基酸的两性离子状态两侧 的基团pk，眨的一. °®白质两性解离性质和等电点/ NH/+p / nh +/NH, pr、COOH+p COO"+ 1 COO-pH< plpH = pIpH>pI净电荷为正净电荷=0净电荷为负当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负 电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向

16、阳极也不向阴极移动，此 时洛液的pH值即为该蛋白质的等电点（isoekxmc point，pD P 转角（0 -turn）:多肽 链中氨基酸 残基n的拨基 上的氧与残 基（n+3）的 氮原上的氢 之间形成氢 键，肽键回 折 180° A.呂絶稔椅牝希椅繊(1)超二级结构(supersecondary structure )蛋白质中相邻的二级结构单位(即单个a 螺錠或卩一折叠或卩 一转角)组合在-起，形成有规则的、在空间上能辩认的二级结构组 合体称为蛋白质的超二级结构基本组合方式：a n Bp p 0(2)(structure domain)在二级结构的基础上，多肽进一步卷曲折叠成几个

17、相对独立、近 似球形的三维实体，再由两个或两个以上这样的三维实体缔合成三级 结构.这种相対独立的三維实体称为结构域.形成意义：动力学上更为合理蛋白质(酶)活性部位往往位于结构域之间，使其更具柔性a-氨基可与亚硝酸反应产生氮气!二级结构secondary structure一级结构 primary structure三级结构 Tertiary structure结构域 Structure doman超二级结构 supersecondary struc四级结构quariernary structure氢键(hydrogen bond )主要维持蛋白质分子的二级结构，对三、四级结 构亦有一定作用.范

18、德华引力(Van der weals force )实质是静电引力，维持三、四级结构。包括： 二个极性基团偶极之间的静电吸引(取向力)； 极性基团的偶极与非极性基团的诱导偶极之间 的静电吸引(诱导力)； 二个非极性基团瞬时偶极之间的静电吸引(色 散力)。疏水作用力(hydrophobic bond )2个或2个以上的疏水基团(非极性基团)因极 性水分子的排斥而接近，因范德华引力而结合，这 种结合力称疏水作用力或疏水键。主要维持三、四 级结构.离子键(ionic bond )正负离子之间的静电吸引产生的化学键.在一 些蛋白质分子中，离子键参与维持三、四级结构。二硫键(disulfide bond

19、 )指二个硫原子之间的共价键，又称二硫桥、硫 硫桥。在一些蛋白质中，二硫键对稳定蛋白质分子 构象起重要的作用.患者的Hb量仅为正常人（15-16g/i00ml ）的一 半，红细胞数目是正常人（4.6-62） x 13个/ml的一 半左右，且形态不正常，除有大量的未成熟红细胞 外，还有很多长而薄、新月状或镰刀状的红细胞。 当红细胞脱氧时，这种镰刀状细胞明显增加。纯合子（50%红细胞镰刀状化）多在童年死去 ,无后代；杂合子患者（1%的患者红细胞镰刀状 化）的寿命也短，但能抵抗流行于非洲的致死性疟 疾（malaria）,会有后代。正常红细胞与 镰刀形红细胞 的扫描电镜图氨基酸序列的细微变化正常的血红

20、蛋白Hb和异常的血红蛋白HbS仅在卩 链的第&个氨基酸有Glu变为了WI,电泳时向正极的 移动速度HbS比HbA稍慢。A链N端氨基酸排列顺序12345678Hb-A （正常人）Val-His-Leu-Thr-Pm-Glu-Glu-Lys.Hb-S （患 者）Val-Hls-I.eu-Thr-lVal.Glu-Lys人类发现的30()多种血红蛋白变体，绝大多数只 有一个氨基酸差异，因为取代的位置不同，对功能的 影响程度有差异，但目前对取代氨基酸影响功能的了 解很少。镰刀状细胞血红蛋白的治疗性矫正体外用氛酸钾处理患者的红细胞，可防止在 去氧时形成镰刀状，输氧能力有好转.®白质两性

21、解离性质和等电点'cOOH'coo'coo.净电荷=0pH > pl净电荷为负pH<pI净电荷为正当蛋白质溶液在某一定pH值时，使某特定蛋白质分子上所带正负 电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此 时溶液的pH值即为该蛋白质的等电点(isodtxtric point, pl) The thermal denaturationof ribonu clease变性是一 个协同过 程：在彳艮 窄的变性 剂浓度范 围，很窄 PH或温度.（2）、引起蛋白质变性的因素有： .物理因素热（60100°C）、紫外线、X射线、超声波、 高压、表

22、面张力，以及剧烈的振荡、研磨、搅拌 等； .化学因素化学因素又称为变性剂，包括：酸、碱、有 机溶剂（如乙醇、丙酮等）、尿素、盐酸肌、重 金属盐、三氯醋酸、苦味酸、磷铸酸以及去污剂(3) 、变性表现及变性机理 生物功能丧失； 物理性质发生改变； 化学性质发生改变； .侧链基团暴露、复性复性：蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则 是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素 后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原 有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性(renaturation)。如1条肽链、4个二硫键的RNA酶，被8mol/L尿 素和蔬基乙醇变性，二硫键全部断裂，酶活性和结 晶能力全部丧失

23、，若透析除去变性剂，在氧存在下 二硫键重新生成，酶活性全部恢复，并恢复结晶能 力，说明RNASI由变性态恢复到天然态。4、蛋白质的胶体性质由于蛋白质分子量很大，在水溶液中形成1- lOOnm的颗粒，因而具有胶体溶液的特征。可溶性 蛋白质分子表面分布着大量极性氨基酸残基，对水 有很高的亲和性，通过水合作用在蛋白质颗粒外面 形成一层，同时这些颗粒带有 ，因而蛋白质溶液是相当稳定的亲水胶体。:利用蛋白质不能透过半透膜的的性质，将含有小 分子杂质的蛋白质溶液放入透析袋再置于流水中，小分 子杂质被透析出，大分子蛋白质留在袋中，以达到纯化 蛋白质的目的。这种方法称为透析(dialysis).5、蛋白质的沉

24、淀如果加入适当的试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失 去水化层(消除相同电荷，除去水膜)，蛋白质胶体溶液就 不再稳定并将产生沉淀.沉淀方法：(1) :在蛋白质溶液中加入高浓度的硫酸鞍、氯化钠等中性盐，可有效地破坏蛋白质颗粒的水化 层.同时又中和了蛋白质表面的电荷，从而使蛋白 质颗粒聚而生成沉淀，这种现象称为盐析分段盐析沉淀反应：不同蛋白质分子的水 膜厚度和带电量不同，发生盐析所需要的 盐浓度不同.改变盐浓度可分离蛋白质混 合物，这被称为分段盐析法.（2）.有机溶剂沉淀反应降低溶液的介电常数，使蛋白质发生沉淀。改变 有机溶剂的种类和浓度，可分离蛋白质混合物，这被 称为有机溶剂分级法。（3）.重金属

25、盐沉淀反应在碱性溶液中，蛋白质分子的负离子基团（如 COO ）可以与重金属盐（如醋酸铅、氯化高汞、硫 酸铜等）的正离子结合成难溶的蛋白质重金属盐，并 从溶液中沉淀下来.在临床上，利用这种特性抢救重 金盐审毒的病人和家畜。（4）.生物碱试剂沉淀反应生物碱试剂（如苦味酸、单宁酸、三氯醋酸、 药酸等）在溶液pH小于蛋白质等电点时，其酸根负 离子能与蛋白质分子上的正离子基团相结合，变成 为溶解度很小的蛋白盐，并从溶液中沉淀下来。临 床化验时，常用上述生物碱试剂除去血浆中干扰测 定的蛋白质。二、蛋白质分离纯化方法（-）.利用溶解度差别的纯化方法（1）.等电点沉淀和pH控制蛋白质是带有正电荷和负电荷基团的

26、两性电解质， 蛋白质分子的电荷性质和数量则因pH不同而变化。蛋 白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质 分子之间没有靜电斥力而趋于聚集沉淀。因此在其他 条件相同时，它的溶解度达到最低点.在等电点以上或以下的pH时，蛋白质分子携带同 种符号的净电荷而相互排斥，阻止了单个分子聚集成 沉淀、因此溶解度较大.（2）.蛋白质的盐溶和盐析盐溶sailing in:在蛋白质水溶液中加少量中性盐, 增加分子表面电荷，增强分子与水的作用，使蛋 白质在水溶液中的溶解度增大的现象.盐析salting out:在高浓度的盐中，离子将蛋白质水化 膜的水夺去，使蛋白质发生沉淀的现象.如饱和硫酸 铁.中性盐影响蛋白

27、质溶解度的能力是离子强度的函 数。离子强度（ionic strength ）可以定义为： 弓Ci为各离子的浓度，Zj为各离子的净电荷，E表示求和。 未解离的电解质和携带电荷相等的兼性离子不计入电 荷的计算，它们不增强溶液的离子强度。（3）.有机溶剂分级分离法有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是改变了介 质的介电常数（dielectric constant）。水是高介电常 数物质（20°C时，80）,有机溶剂是低介电常数物质 （20°C时，甲醇33,乙醇24,丙酮21.4）,因此有机 溶剂的加人使水溶液的介电常数降低。（4）.温度对蛋白质溶解度的影响在040°C之间，

28、大部分球状蛋白质的溶解度随温 度升高而增加，但人的血红蛋白从025°C,溶解度随 温度上升而降低.在4（）50°C以上，大部分蛋白质变 得不稳定并开始变性，在中性pH介质中失去溶解力. 大多数蛋白质在低温下比较稳定，因此蛋白质的分级 分离操作一般都在0°C或更低的温度下进行。（二）、根据分子大小不同的纯化方法仃）.透析和超过滤dialysis and ultrafiltration透析：利用蛋白质分子不能通过半透膜，使 蛋白质和其他小分子物质分开的方法。半透膜：玻璃纸（cellophane paper,或称赛 璐坊纸）、火棉纸（celloidin paper,又称

29、赛璐碇 纸）和其他改型的纤维素材料.超过滤：透析时对半透膜加压，一般液体与膜表面相切的方向流动，使部分液体透过膜，另一部分液体切向流过膜表面，将膜哉留的蛋白质分子冲走（反流回样品槽），避免在滤膜表面堆积塞。样品含量低时因吸附不能回收而采用此法.妥白质的越濤(2).密度梯度(区带)离心density gradient (zone) centrifugation蛋白质颗粒在有密度梯度的介质中离心时，质量 和密度大的颗粒沉降快，到与自身密度相等的介质密 度梯度即停止，最后各种蛋白质在离心管(常用塑料 管)中被分离成各自独立的区带，在管底小孔分部收 集。常用蔗糖梯度，聚蔗糖梯度和其他合成材料。蔗糖便宜

30、，纯度高，浓溶液(60%, W/W)密度 可达 1.28g/cm3.聚蔗糖的商品名是Ficoll,由蔗糖和I氯2,3环氧 丙烷合成的高聚物，约400.000,需高密度和低渗 透压的梯度时，可用Ficoll代替蔗糖。(3).凝胶过滤gel filtration又称凝胶过滤层析、分子排阻(molecular- exclusion )层析、凝胶渗透(gel permeation )层析。 这是按大小分离蛋白质混合物的最有效方法之一.常用的凝胶有交联葡聚糖，聚丙烯酰胺凝胶和 琼脂糖等。交联葡聚糖是由线形的al,6葡聚糖与 氯2.3环氧丙烷反应而成的化合物，商品名称为 Sephadex»聚丙烯

31、酰胺凝胶(商品名称为Bio-gel P ) 是一种人工合成的凝胶，它是由单体丙烯酰胺 (acrylamide )和交联剂甲文双丙烯酰胺(N,N， methylenebisacrylamide )共聚而成的。琼脂糖是从 琼脂中分离制得的，商品名称微Sepharose或Bio GelA,这种凝胶的优点是孔径大，排阻极限高。O O OO CO %溶剂流动方向小分子进入凝 胶分子内，被 滞留大分子在凝 胶颗粒间移 动，较快流 出按分子量从大到小依次流出aoe q poo cB凝胶过滤层析原理（三）、根据电荷不同的纯化方法（1）.电泳 electrophoresis电泳或离子泳ionphoresis:在

32、电场作用下、带电颗粒向与其电性相反的电极移动的现象.（2）.离子交换层析用于各种两性分子混合物的分离，蛋白质和核 酸大分子层析的支持介质一般是纤维素离子交换剂 和交联葡聚糖离子交换剂。阳离子交换剂：CM纤维素（弱酸型）；P纤 维素（中强酸型）；SE纤维素（强酸型）；SP- Sephadex （强酸型）；阴离子交换剂：AE纤维素（弱碱型）；PAB- 纤维素（弱碱型）；DEAE-纤维素（中强戚型）； DEAE- Sephadex （中强戚型）；TEAE-纤维素（强 碱型）;QAE- Sephadex （强碱型）；(四) 、利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法 亲和层析affinity chrom

33、atography:利用蛋白质对其 配体分子特有的识别能力，即生物学亲和力建立起来 的券请宛彳匕为法。最先用于酶的纯化，现广泛用于核昔酸.核酸、 免疫球蛋白、膜受体、细胞器甚至完整的细胞的纯化.凝集素亲和层析、免疫亲和层析、金属螯合层析(metal chelate chromatography )、染料配体层析和共 价层析等都属于亲合层析类抗体和抗原的结合：高度特异性把抗体作为“鱼饵”，分离抗原,ai9 AiQen-coTibrrig stle亲和层析的操作机理三、蛋白质分子中氨基酸序列的测定 测定宙白质的分f质吊和幺肚创 拆丿1蛋门顷分/的乡h , 断幵多肽链内的1硫键 分析毎条篇肽链的紅堆酸细成 器总务肽琏的N末端和C术端残咗 虬I以I 一