生物化学试验报告

1、班级: 姓名： 座号: 实验一 生物化学实验基本知识与操作一、课堂目标1简述生化实验的五点基本知识2动手练习三种吸量管的使用，培养严谨的科学态度3选择弹动混匀法做操作练习，使试管内溶液混匀4仔细观察老师使用离心机的示教过程，并练习使用。二、生物化学实验基本知识 1实验前做好预习 每次实验课前应首先复习与实验有关的理论知识，然后认真阅读实验指导，明确课时目标，了解实验原理、操作程序及实验中应注意的事项。 2实验中要认真操作、仔细观察 实验时要求学生严格按照实验指导和教师的要求，一丝不苟地进行操作，仔细观察和分析实验中出现的各种现象，如实地将实验结果、数据填写在记录本内。 3正确使用和爱护仪器 实

2、验时须遵照教师要求，严格按操作规程正确使用每种仪器。贵重仪器未经允许不得随意搬动，如不慎损坏，应及时报告指导老师。 4保持实验室的整洁和秩序 遵守实验室规则，实验时保持室内安静。实验仪器及用具必须洁净，实验试剂的排列应整齐有序。勿将试剂药品洒于桌面、地上或它处。废物及强酸、强碱溶液应适当处理，以防堵塞和腐蚀水管。实验结束，做好清洁工作，注意关断水，电源，关闭好门窗。 5认真填写实验报告 三、生物化学实验几项基本操作1吸量管的选择和使用(1)刻度吸管 常见容量有l0ml、5ml、2m1、1ml、0.5ml等数种。通常将管身标明的总容量分刻度为100等分。常选用与移取非整数量的试液，因厂家不同，有

3、分刻度到尖端和刻度不到尖端的两种。如刻度到管尖的，通常在管壁上标有“吹”字，放液时必须在容液流完后吹出残留于吸管尖端的试液。使用前先认明。 (2)移液管 吸管中间膨大，管壁只有一条总量标线，准确度较高，常用作移取整数量的试液。常见规格有50ml、25m1、l0ml、5ml、2ml和lml等容量。操作时在放出试液后，吸管尖端在容器内壁上仍要停留1015秒钟。 以上两种吸管使用方法如下：用右手拇指和中指靠住吸管标线以上部分，将管尖插入所要移取的试液液面下约lcm处。左手持洗耳球，对准吸管上口，慢慢吸取溶液到刻度以上，立即以右手食指紧按吸管的上口。抽出吸管，用滤纸拭干管尖外壁，将管尖靠在试剂瓶颈内壁

4、，右手食指稍作放松，垂直缓慢地将多吸的液体放出至液面的弯月面与标线相切时为止。立即用食指按紧，拿出吸管，垂直地移入准备好的容器中，使管尖与容器内壁接触，让试液自然流出。 (3）微量定量移液管 此管由塑料制成，因形如手枪故又称为枪式移液管。是较为精密的取液仪器，规格有1000l、500l、250l、200l、100l、50l等，最小可为5l。有固定式和可调式2种类型。目前在临床生化检验中已广泛使用，用于血清、标准液等微量液体的取样和加液。一管可用多次，每次只需更换塑料吸液嘴。 使用方法：正式使用之前，在不吸液状态下，连续按动多次，以保持管内空气工作负压恒定。使用时先将吸液嘴套在移液管尖，轻轻转动

5、，以保证密封。然后垂直地握住移液管，将按钮按到第一停止点，并把吸液嘴浸入到液面下23mm，缓慢地放松按钮，使之复位。1秒钟后取出移液管，即完成取样。最后将吸液嘴移至备好的容器壁上，缓慢地把按钮按到第一停止点，待l秒钟后再完全按下按钮，排尽全部液体。吸液嘴沿容器壁向上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成一次操作过程。使用另一种试液，应更换一支塑料吸液嘴。不使用时，应套上吸嘴，以保持管内清洁。对于可调式微量移液管，使用时按钮上的标线必须对准所需容量的刻度线。 2试管中液体混匀的方法 实验中，试管内每加入一种试剂参加反应，必须充分混匀。混匀的方法通常有以下几种： （1）少量液体的混匀可将试管轻轻振

6、摇或摔动即可。 (2 ) 试管内液体较多时，可采用弹动混匀法，以一手持试管，另一手指拨动试管底部，使管内溶液作旋转流动。 (3 )具塞试管内盛有多量液体时，可采用倒转混匀。 无论用哪一种方法混匀，都应防止试管内液体溅出或被污染。严禁用手指堵塞管口的混匀动作。3离心机使用方法 选用普通台式电动离心机(10004000转分) (1 ) 取出离心机的全部套管，在无负荷条件下，开动离心机(3000转分)，检查转动是否平稳。 (2 ) 检查套管与离心管大小是否相配，套管底是否铺好软垫，套管底部有无碎玻片或漏孔(如有则取出或用蜡封孔)。 (3 ) 检查合格后，将盛有离心液的离心管2支分别放入离心套管中，然

7、后在粗天平上进行平衡，对较轻一侧可用滴管往离心管与外套管之间隙加水，直至两侧重量相等为止。 (4 ) 将已平衡的一对离心套管(连同其内容物)按对称方法放入离心机的插孔中。不用的套管取出，盖上机盖，开动离心机。扭动旋钮时须逐步增加转速，直至所需标准。离心完毕，将转速旋钮逐步扭回至零。待离心机自动停稳(不可用手按压)后，取出离心管。 四、实验报告 1如实回答，填写下列各题空格(l ) 你在实验课前是否认真阅读了本实验项目的实验指导?答：_(2）你动手操作过哪些吸量管的使用练习?答：_（3）你是在第_次的练习中，首次成功地用_吸量管准确移取了试液。（4）你是否进行了弹动混匀法练习?答：_如有，简单谈

8、谈效果和感受：_。2简要回答 离心机在生化实验中常作什么用途?实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_ 实验二 型可见分光光度计使用 一、课堂目标 1说一说什么是比色法?什么是分光光度法。 2正确使用721分光光度计，测定未知溶液的浓度。树立热爱科学和爱护公物的精神。 3领会朗伯比尔定律推导的公式， 二、实验原理 有色溶液颜色的深浅与其所含有色物质的含量成正比关系。在定量分析中，利用比较有色物质溶液的颜色深浅来测定物质含量的分析方法称为比色法。 物质的颜色是由于物质吸收某种波长的光线以后，通过或反射出某种颜色的结果。利用物质对一定波长光线吸收的程度测定物质含量的方法称为分光光度法。 分光光度法

9、依据朗伯比尔定律。设一束单色光I0射入溶液，由于部分光线被溶液吸收，通过的光线减弱为It，则It/ I0之比为透光度(T)。透光度的倒数(1/T)反映了物质对光的吸收程度、一般取(1/T)的对数值，作为吸光度，用A表示。又可称消光度(E)或光密度(OD)。 依据朗伯比尔定律的推导，溶液吸光度的大小与溶液的浓度(C)及液层厚度 (L)的乘积成正比。即AKCL K为常数。在实际比色时，使用完全相同的比色杯。测定同一种物质，则标准溶液液A标和待测溶液A测的公式中，K值和L值都是相同的，因而A标：A测 = C标 ：C测 A测则C测= A标 ×C标 式中，A测与A标 可在比色时读出数值，C标为

10、已知标准液浓度。进而可求出未知待测溶液的浓度(C测) 三、721分光光度计的基本结构 通电后，当光源发出的复合光透过单色光器后衍变为各种不同波长的单色光，单色光透过比色皿时，一部分光线被有色溶液吸收，未被吸收的部分照射到光电检测器上，进而将这种讯号的强度变为电信号的大小，最后经放大，由显示部分显示出测定结果。光源 单色光器 比色皿 光电检测器 放大 显示 图1 721型分尤光度计原理和仪器图1波长选择钮 2“O”电位钮 3“100”电位钮 4比色杯拉杆 5灵敏选择钮 6电源开关 7电源指示灯 8暗箱盖 9读数表 10波长读数窗 四、方法一：721分光光度计的使用1按通电源，按下开关指示钮，指示

11、灯亮。打开比色箱盖。 2选择所需波长，转动灵敏度旋钮选择适宜灵敏度。 3转动O旋钮，使检流针对准T为O。将空白液、标准液、测定液分别倒入3个比色杯中，将比色杯依次放入比色箱里，固定好位置，使空白液对准光路，合上比色箱盖。4转动100旋钮，使检流针对准T为100(A为0)。预热20分钟，观察检流针是否稳定。 5预热后，反复几次调节TO(开箱盖)、T100(闭箱盖)。 6轻轻拉动比色槽拉杆，先后将标准液、测定液对准光路。分别记录A标数值和A测数值。随即打开箱盖，以便节约光电管能源，保护仪器。 7比色完毕，恢复各旋钮至原来位置。扳上开关钮，指示灯灭。取出比色杯，合上比色箱盖，套上布罩。关闭电源。将比

12、色杯洗净后倒置晾干。 方法二：722分光光度计的使用连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能。接通电源，使仪器最好预热分钟。用“功能键”将测试方式设置至A（吸光度）状态用波长旋钮设置样品的分析波长。将空白溶液、标准样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，空白样品放在第一个槽位中。仪器所附的比色皿，其透射比是经过配对测试的，未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。比色皿透光部分表面不能有指印、溶液痕迹，被测溶液中不能有汽泡、悬浮物，否则也将影响样品测试的精度。将空白推（拉）入光路中，按“0A/100%T”键调

13、0A/100%T，此时显示器显示的“BLA”,直至显示“0.000”A为止。用“功能”键将测试方式设置至C状态。将标准样品推（或拉）入光路中。按“上升”键或“下降”键将已知的标准样品浓度值输入仪器，直至显示器显示样品浓度值时，按“确认”键。（浓度值只能输入整数值，设定范围为1999）9将被测样品依次推（或拉）入光路，这时，便可从显示器上分别得到被测样品的浓度值。记录被测样品的浓度值。0关闭仪器电源开关。取出比色杯，合上比色箱盖，套上布罩。将比色杯洗净后倒置晾干。 五、操作练习l试剂(1)l标准硫酸铜溶液(2)未知浓度硫酸铜溶液2操作步骤 (1)取比色杯三只，分别加入蒸馏水，1标准硫酸铜溶液和未

14、知浓度硫酸铜溶液。（2）选用630nm波长，以蒸馏水力空白液，按前述使用方法测定两种硫酸铜溶液的不同吸光度。记录。六、实验报告1解释(1)比色法(2)分光光度法2填空朗伯比尔定律的公式是A_其中A代表_ ，其余字母代表的分别为_。实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_实验三 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳一、课堂目标 1简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳原理 2团结协作，仔细认真地进行血清样品的醋酸纤维薄膜电泳实验。 3说出醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白依次分为哪几条区带 4说一说血清蛋白电泳分析有何临床意义二、实验原理 带电荷的蛋白质，在电场中向着与其电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电

15、点不同，但大都在pH70以下，若将血清置于pH86的缓冲液中，则这些蛋白质均带负电，在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带电荷多少及分子大小不同，所以在电场中泳动速度也不同。清蛋白分子小带负电荷多泳动快；球蛋白分子大、带负电荷少则泳动慢，因此可将血清蛋白质分为清蛋白、12、和球蛋白五条区带。 醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物，具有微量、快速、简便及分辨率高等优点。该技术已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、同工酶的分离和测定。 如果需要定量，可把五条区带经染色、比色，算出各部分蛋白质的相对百分含量 三、试剂 1巴比妥缓冲液(pH86，离子强度006) 称取巴比

16、妥166克和巴比妥钠1276克溶于700800毫升蒸馏水中，加水稀释至1000毫升。 2染色液 称取氨基黑1005克，加入蒸馏水40毫升、甲醇50毫升、冰醋酸10毫升混匀。 3漂洗液 取95乙醇45毫升、冰醋酸5毫升、蒸馏水50毫升，混匀备用。 404摩尔升NaOH溶液 5透明液 取冰醋酸25毫升和无水乙醇75毫升混匀备用 四、器材 醋酸纤维薄膜(2x8厘米)、培养皿、滤纸、镊子、点样器、直尺、铅笔、吸量管、洗耳球、电泳仪、电泳槽、 五、操作 1准备 量取缓冲液700800毫升倒入电泳槽之一侧，打开中央活塞，使液体通过导管流人另一侧，待管中气泡排出后，再向另一侧倒入缓冲液，使两侧槽内液面达到水

17、平状态。约需平衡15-20分钟，平衡后将活塞关好。 取出薄膜，先在薄膜无光泽面一端约1.5厘米处用铅笔划一直线，表示点样位置(如实验图)。将薄膜无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液中(缓冲液盛于培养皿中)，待充分浸透后，即膜条无白斑时，取出用滤纸轻轻吸去多余的缓冲液。 2点样 取少量血清置于普通玻璃板上，用点样器(血红蛋白吸管或盖玻片均可）的钢口蘸取血清，然后将钢口平值“印”于点样线上，待血清渗入膜后移开点样器。注意应使血清均匀分布在点样区，切不可用力过大，、过猛弄破薄膜。掌握好点样技术是获得清晰电泳图谱的重要环节。 3电泳 将已点样的薄膜端靠近阴极，无光泽面向下(以防蒸干)严整地紧贴在电泳槽支架“

18、滤纸桥”上，支架上事先放置好两端浸入缓冲液的用四层滤纸条作的“滤纸桥”(如实验图)，平衡5分钟后通电。 4.通电 一般用电压130160V，电流约为0406毫安厘米，通电4050分钟，待电泳区带展开约3.5厘米时切断电流。 5.染色 小心取出薄膜直接浸于染色液中5分钟，取出用漂洗液连续浸洗数次，使底色漂净为止。即得五条蛋白色带。从阳极端起依次为、清蛋白、1、2、和球蛋白五条区带。 6定量 将漂净的薄膜用滤纸吸干，蛋白质区带分段剪下，分别浸入04摩尔升Na0H溶液中，清蛋白管为4毫升，其余各管为2毫升。振摇数次，约25分钟，蓝色即可完全浸出。用721分光光度计于580-620nm波长进行比色，蒸

19、馏水调零，读各管吸光度数，按下式计算各部分蛋白质所占百分比(相对百分含量) 六、临床意义正常参考范围 清蛋白：5772 1球蛋白25 2球蛋白49球蛋白6.512 球蛋白：1220慢性肝炎、肝硬化时，清蛋白降低，球蛋白明显升高。肾病综合征时，清蛋白明显降低，2及球蛋白升高。全身性红斑狼疮，清蛋白降低，2球蛋白显著升高，球蛋白也增加很多。七、实验报告不作定量实验时，请粘上实验所得醋酸纤维薄膜电泳图谱，并标明(1)阳极(+)、阴极()及原点的位置 (2)各电泳区带名称 2填空 (1)电泳是指_。 (2)本电泳方法在临床生化检验中多用作哪些用途：_ _。 (3)你在电泳实验过程中，采用的点样工具是_

20、，电泳时电压为_伏特，电流为_毫安，通电时间共_分钟。 (4)在电泳图谱显示的五条区带中，_染色最深，在电场中它的泳动速度最_，表示其所带负电荷最_，分子量最_；而离原点最近的区带是_，泳动速度最_。原因是分子量_，所带负电荷量_。 实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_实验四 蛋白质的性质 （一）盐析沉淀【实验原理】 在蛋白质溶液中加入适量的无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠）浓溶液会使蛋白质析出，这种作用称为蛋白质的盐析作用。当盐浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。降低盐溶液浓度后，由盐析作用获得的蛋白质沉淀能再溶解，因此蛋

21、白质的盐析作用是可逆过程。 盐析法分离蛋白质广泛应用于蛋白质制品的制备和个别蛋白质的分离、纯化。【实验材料】1. 蛋白质溶液：5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）；2. 饱和硫酸铵溶液；3. 固体硫酸铵【实验方法】 1.取锥形瓶一个，加入蛋白质溶液5.0ml，再加等量的饱和硫酸铵（半饱和硫酸铵)溶液，混匀后静置数分钟，则析出球蛋白。将混合液转移至两离心管（等量）中，2000rpm离心5min，小心将上清夜转移至小烧杯；向沉淀中加少蒸馏水，观察是否溶解，为什么？ 2.向小烧杯中上清液添加硫酸铵粉末，边加边摇，直至不再溶解为止，此时析出的沉淀为清蛋白。转移至两离心管（等量）中，

22、2000rpm离心5min，弃上清，向清蛋白沉淀中加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 蛋白质溶液 5.0ml 饱和硫酸铵 5.0ml 放锥形瓶中，混匀， 静置数分钟 至两离心管中（等量） 2000rpm离心5min 取上清液至小烧杯 球蛋白沉淀 添加硫酸铵粉末， 加少量H2O 边加边摇 ？ （再溶解） 至两离心管中（等量） 2000rpm离心5min 弃上清 清蛋白沉淀 加少量H2O ？ （再溶解）思考：1.盐析后球蛋白沉淀加水再溶解后，加热，再加水，是否溶解？ 2.清蛋白沉淀加水后再溶解，用何方法可再沉淀而不变性？ （二） 茚三酮反应【实验原理】 除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应生成黄色物质外

23、，所有-氨基酸和蛋白质都合茚三酮反应生成蓝紫色物质。具有氨基或能释放氨的化合物都有此反应，但尿素、马尿二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，蛋白质和氨基酸的茚三酮反应不是特异性反应，在定性定量测定中，应严防干扰物存在。该反应十分灵敏，1：150 000浓度的氨基酸水溶液即能出现反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。 【实验材料】1.蛋白质溶液：5%卵清蛋白溶液或鸡蛋清水溶液（新鲜鸡蛋清：水=1：9）；2.0.5%甘氨酸溶液；3.0.1%茚三酮水溶液：4.0.1%茚三酮乙醇溶液 【实验方法】1. 取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1ml，再加入0.5ml0.1%茚三酮水溶液，充分混匀

24、后，在沸水浴中加热12min。观察颜色由粉红色变为紫红色再变为蓝色。2.取小块滤纸，加一滴0.5%甘氨酸溶液，用电吹风吹干后在原处加一滴0.1%茚三酮乙醇溶液，再用电吹风烘干显色，观察紫红色斑点的出现。 试剂 1号试管 2号试管蛋白质溶液 1ml -0.5%甘氨酸溶液； - 1ml0.1%茚三酮水溶液 0.5ml 0.5ml 混匀后，沸水浴中加入12min。观察结果：粉红色 紫红色蓝色 实验五 DNA的粗提取与鉴定一、课堂目标 1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法2.观察提取出来的DNA物质二、实验原理血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶

25、液。DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 molL的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。三、试剂1. 鸡血细胞液510ml2. 0.1g/mL的柠檬酸钠3. 蒸馏水4. 体积分数为95%的酒精溶液（实验前置于冰箱内冷却24小时）5. 2mol/L的氯化钠溶液6. 0.015mol/L的氯化钠溶液7. 二苯胺试剂A液：

26、15 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用。 B液： 乙醛的体积分数为0.2%的溶液。 配制： 将0.1 mL B液加入到10 mL A液中,现配现用。四、器材 塑料烧杯（100 ml, 1个；50 ml、1000ml,各2个）,量筒（100ml,1个）,玻璃棒,纱布, 镊子, 漏斗、滤纸、铁架台、铁环，试管（20 ml, 2个）试管架,试管夹,电磁炉五、操作 1.实验前制备鸡血细胞液 取 0.1g/mL的柠檬酸钠溶液100 ml，置于500ml烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180ml）注入烧杯中，同时用棒搅拌

27、，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000r/min的离心机离心2min, 此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。（或可将烧杯中的血液置于冰箱内，静置一天，使血细胞自行沉淀。）2.提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液510ml ,注入到50ml烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20ml，同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌5min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500ml的塑料烧杯中，取其滤液。3.溶解细胞核内的DNA将2mol/L的氯化钠溶液40ml加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌

28、1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。4.析出含DNA的黏稠物沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的黏稠物会越来越多。当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水（约300ml）。这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14mol/L。）5.滤液含DNA的黏稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤4中的溶液至1000ml的烧杯中，含DNA的黏稠物被留在纱布上。6.将DNA的黏稠物再溶解取一个50ml烧杯，向烧杯内注入2mol/L的氯化钠溶液20ml。用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至氯化钠溶液中,

29、用玻璃棒沿一个方向不停地搅拌3min,使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。7.过滤含有DNA的氯化钠溶液取一个100ml烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤6中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。8.提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、体积分数为95%的酒精溶液50ml，并用玻璃棒沿一个方向搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。注意观察丝状物是什么颜色的。9.DNA的鉴定取两支20ml的试管，各加入0.015mol/L的氯化钠溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管（A管）中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后

30、，向两支试管各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。六、实验报告：七、思考：1.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？2.步骤2和步骤4中都需要加入蒸馏水，两次加入的作用相同吗？为什么？3.DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否表示一个DNA分子直径大小？实验六 酶的专一性 一、课堂目标 1解释酶的专一性 2以唾液淀粉酶的专一性为例谈谈本实验的原理3以严谨的科学态度进行实验操作，准确记录，并对结果进行讨论分析，完成实验报告 二、实验原理 唾液淀粉酶可将淀粉水解成麦芽糖及少量葡萄糖，二者均属

31、还原性糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。而蔗糖不能被此种酶水解，也不具有还原性，故不能与班氏试剂发生颜色反应。 三、试剂 11淀粉溶液 21蔗糖溶液 3 pH68缓冲液 4班氏试剂 5稀释唾液的制备 用水漱口以清除口腔食物残渣，然后再含20毫升蒸馏水作咀嚼动作，使唾液充分分泌。3分钟后，把口中的水吐入烧杯中，再用滤纸稍加稀释过滤后待用。另外，可从其中取出少量，加热煮沸，制备出煮沸唾液。 四、器材 1试管、试管架、试管夹、滴管、蜡笔、漏斗、烧杯。2恒温水浴箱，沸水浴箱、电炉。 五、操作 取试管三支，标号，按下表加入试剂。 管号试剂(滴) 123 1淀粉 1

32、蔗糖 pH68缓冲液 稀唾液 煮沸唾液102051020510205 各管混匀后置于37水浴中保温510分钟。 班氏试剂202020 各管混匀后置于沸水浴中煮沸(可用试管夹帮助置于沸水浴箱的孔内)。(如停电时改用酒精灯加热，要小心防范溶液煮沸时喷出。) 观察结果并记录。六、实验报告1在下表中如实填写实验结果，并对原因作简单解释管号结果与分析123颜色？沉淀？原因2试以唾液淀粉酶为例，解释“酶的绝对专一性”实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_ 班级: 姓名： 座号: 实验七 温度、pH、激动剂与抑制剂对酶促作用的影响一、课堂目标1说出影响酶作用的几个因素2简述本实验的原理3严肃认真，全组合作

33、，共同完成实验操作4如实做好实验记录，一起对结果进行分析，正确填写实验报告二、实验原理 酶促反应在低温时，反应速度较慢甚至停止。随着温度升高，反应速度逐渐加快。当达到最适温度时，酶促反应速度达最大值。人体内大多数酶的最适温度在37左右。如温度过高，反应速度反而下降，甚至停止。这主要由于酶蛋白因高温变性失活之故。 酶活性与溶液的pH有关。pH既影响酶蛋白本身构象，也影响底物的解离程度，从而改变酶与底物结合和催化作用。故每种酶都有其自身最适pH的作用环境。过酸过碱均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适pH为6.8。氯离子对该酶活性有激动作用，铜离子则有抑制作用。 本实验利用碘与淀粉及

34、其水解产物(大分子糊精，麦芽糖)的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的速度，从而判断温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性的影响。 淀粉 糊精 麦芽糖 (与碘呈蓝色) (与碘呈紫色至红色) (与碘不呈色) 三、试剂11淀粉溶液 2新鲜配制的稀释唾液 3不同pH缓冲液 (1)pH68缓冲液 (2)pH50缓冲液 (3)pH80缓冲液 409NaCl溶液 (即生理盐水) 51CuSO4溶液 6碘液 四、器材 1试管、试管架、试管夹、滴管，蜡笔、烧杯。2恒温水浴箱、沸水浴箱、冰浴(冰箱)。 五、操作1温度对酶活性的影响 (1)取试管三支，编号，按下表加入试剂 管号试剂(滴)123pH68

35、缓冲液1515151淀粉溶液555(2)混匀后，三支试管分别置于冰浴，沸水浴、恒温水浴(37）中预温5分钟。再向各管加入稀唾液5滴，继续在原水浴中放置l0分钟。 取出各管，各滴加碘液3滴，摇动，观察颜色并记录。2pH对酶活性的影响(1)取试管三支，编号，按下表加入试剂 管号试剂（滴）123pH50缓冲液15pH68缓冲液15pH80缓冲液151淀粉溶液555稀唾液555(2)将各管摇匀，同时置37水浴中恒温10分钟。(3)取出各管，各滴加碘液3滴，摇动，观察颜色并记录。3激动剂、抑制剂对酶活性的影响(1)取试管三支，编号，按下表加入试剂 管号试剂（滴）123蒸馏水1009%NaCL溶液101%

36、CuSO4溶液10pH68缓冲液1515151淀粉溶液555稀唾液555(2)将各管摇匀，同时置37水浴中恒温10分钟。(3)取出各管，各滴加碘液3滴，摇动，观察颜色并记录。六、实验报告1结合本次实验，说说影响酶作用的几个因素2根据实验结果，正确填写下列各表，并作简单分析(1)温度影响试管号试验条件加碘液后颜色结果分析1冰 浴2沸水浴3恒温水浴（2）pH影响试管号试验条件加碘液后颜色结果分析1pH502pH683pH80 （3）激动剂与抑制剂影响试管号试验条件加碘液后颜色结果分析1蒸 馏 水209%NaCL溶液31%CuSO4溶液实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_实验八 酶的竞争性抑制作

37、用一、 目的要求：通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解二、 实验原理：与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。 COOH COOH CH2琥珀脱氢酶CH + 甲烯蓝 + 甲烯白CH2CH COOH COOH三、 实验材料 1、 试剂 ：（1） 0.2 mol

38、/L 琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml ,用5mol/L NaOH 调pH至7.4，再加水至1000ml（2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2 mol/L 琥珀酸稀释10倍（3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸22.92g ，用蒸馏水配成约600ml ，5mol/L NaOH调pH至7.4，再加水至1 000ml（4）0.02mol/L丙二酸：用0.2 mol/L丙二酸稀释10倍（5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至200ml (6) 0.02%甲烯蓝 （7）液体石蜡2、器材 （1）小试

39、管及试管架 （2）吸量管（10ml *1）及滴管（8支） （3）研钵四、实验方法 1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠 、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入0.1mol/L 磷酸盐缓冲液10ml ，磨匀，备用 2、取小试管5支并编号，按下表操作：试剂管号1 号2 号3 号4 号5 号心肌匀浆15 15 15 15 0.2M琥珀酸55 5 0.02M琥珀酸 5 50.2M丙二酸 5 50.02M丙二酸 5 蒸馏水5 20甲烯蓝22 2 2 2 液体石蜡55 5 5 5甲烯蓝褪色情况加入液体石蜡后时间记录甲烯蓝褪色时间记录所用时间：加入液体石蜡后，室温放置。观察各管甲烯蓝褪色情况。五、结

40、果处理记录各管甲烯蓝褪色情况，并解释结果。六、注意事项1. 心肌要用新鲜的2.注意各种试剂加入的顺序，混匀各管已加入的试剂后马上加入液体石蜡3.及时、仔细观察颜色变化4观察结果过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使甲烯白重新被氧化变蓝七、思考题 在此实验基础上，如何设计实验来观察“增加底物浓度，酶的竞争性抑制作用可以降低或消除”的现象？ 实验九血糖浓度测定葡萄糖氧化酶法一、课堂目标： 1了解工具酶在临床检验中的作用 2解释血糖测定的原理和方法。 3记住血糖测定的临床意义。二、实验原理 葡萄糖氧化酶（GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶，POD)在色原性氧受

41、体存在时将过氧化氢分解为水和氧，使色原性氧受体4氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比三、试剂 1血糖测定试剂盒 212mmol/L苯甲酸溶液于900 ml蒸馏水中加入苯甲酸15 g，加热助溶，冷却后置于1升容量瓶中，加蒸馏水至刻度。3葡萄糖标准储存液（100mmol/L）称取无水葡萄糖（预先置80烤箱干燥至恒重，移置干燥器内保存）1802 g，溶解于80 ml苯甲酸溶液中，移置100 ml容量瓶中，再加苯甲酸溶液至刻度。4葡萄糖标准应用液（5mmol/L）取葡萄糖标准储存液5ml，置于100 ml容量瓶中，加苯甲酸溶液至刻度。5血浆（或血清）最好用

42、氟化钠抗凝血浆做测定，如用一般草酸盐抗凝或血清做测定，应尽早分离血浆或血清。严重黄疸、溶血及乳糜样高脂血症标本对实验有干扰，应制备无蛋白血滤液再行测定。6蒸馏水四、器材试管及试管架、贴纸、吸量管、洗耳球、水浴箱、721分光光度计 五、操作1取试管3支，分别标记“空白管”、“标准管”、“测定管”。2按下表用吸量管加入血清及各种试剂： 加入物(m1) 空白管 标准管 测定管 血清 一 一 002 葡萄糖标准液 一 002 一 蒸馏水 002 一 一 酶混合试剂 30 30 30 混匀，置37水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取测定管，做好记录。测定管浓度是_。 六、临

43、床意义参考值 空腹血糖为38961l mmoL。血糖升高 空腹血糖超过72称为高血糖，超过肾糖阈时（88 mmoL）则出现糖尿。 (1)生理性高血糖：可见摄入高糖食物或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 (2)病理性高血糖： 1)糖尿病：常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 2)内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进肾上腺皮质功能及髓质功能亢进时，各种对抗胰岛素的激素分泌过多，也会出现高血糖。 3)颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 4)脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。血糖降低 血糖浓度低于3339 mmoL称为低血糖。此时脑组织首先对低血糖出现

44、反应，表现为头晕、心悸、出冷汗以及饥饿感等症状。当血糖低于25 mmoL时，就可发生低血糖昏迷。 (1)生理性低血糖：饥饿和剧烈运动。 (2)病理性低血糖： 1)胰岛细胞增生或胰岛细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。 2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如腺垂体功能臧退肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 3)严重肝病患者，田于肝脏贮存糖原减少及糖异生等功能低下，肝脏不能有效的调节血糖浓度。 七、实验报告1填空（1）正常人空腹血糖浓度为_。高于_ 称为高血糖，常见于_病人。低于_ 称为低血糖，此时表现症状有_等。（2）本实验原理是葡萄糖氧化酶利_将葡萄糖氧化_再经一系列化学变化，生成有色化合物，其颜色的深浅与_成正比。通过比色测定其_和标准液的_，最终求出_浓度。（3）实验过程中选取的标准液浓度是_，进行比色所用的仪器是_，选择的波长为_。实验日期：_月 _日 评分_ 评改老师_ 实验十 肝中酮体的生成一、课堂目标 1说出酮体在体内生成的必要条件及过程2注意观察比较和记录实验结果，分析原因，得出明确的结论3深入理解为什么酮体的生成是肝特有的功能二、原理 酮体是乙酰乙酸，羟丁酸和丙酮三种物质的总称。肝脏中含有合成酮体的酶系，用丁酸作为底物与新鲜的肝匀浆混合后保温，即有酮体生成，酮体与含亚硝基铁氰化钠的显色粉作用产生紫